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鸭瘟病毒dUTPase基因克隆、原核表达及在病毒感染宿主亚细胞中的定位分析 总被引:2,自引:0,他引:2
根据笔者实验室新发现的鸭瘟病毒(DPV)dUTPase基因(GenBank登录号DQ486149)序列设计1对引物,PCR扩增后将产物亚克隆至pET32a(+)原核表达载体,获得表达质粒pET32a-DU。然后将其转化至E.coliBL21(DE3)进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测显示诱导表达蛋白约66.8ku,与预期表达蛋白大小一致。薄层扫描分析表明重组蛋白占菌体总蛋白的36.2%,主要以包涵体的形式存在。重组蛋白纯化后制备兔抗血清,间接EUSA效价为1:409600。通过免疫荧光技术进行DPVdUTPase亚细胞定位检测,结果显示最早可在感染后4h的胞质中检测到特异性荧光,12h大量点状绿色荧光聚集于胞核;24h后胞核内点状荧光减弱,而胞质点状荧光增强;48h胞核和胞质荧光均显著减弱。本研究为DPVdUTPase基因功能和DPV致病机理的研究提供了重要数据。 相似文献
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同时检测猪圆环病毒2型、猪细小病毒和伪狂犬病毒连接酶检测反应-PCR基因芯片检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
为快速、灵敏、准确地同时检测和鉴别猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)和伪狂犬病毒(PRV)的方法,本研究采用连接酶检测反应(LDR)-PCR和基因芯片技术建立一种新型检测方法.首先在3种病毒的保守区内分别设计一对LDR探针,两端各连接一段通用序列,依次进行LDR、通用引物荧光标记扩增和芯片杂交,同时比较引物标记和Cy5 -dCTP标记方法的灵敏度.结果表明该方法可以特异地检测PCV2、PPV和PRV3种病毒,而对牛病毒性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、猪圆环病毒1型检测结果均为阴性;对3种病毒的最低检测限少于10个拷贝;Cy5-dCTP标记检测的灵敏度显著高于引物标记.利用建立的方法对41例临床样品进行检测,与普通PCR检测结果符合率为97.6%~100%.该方法的建立为基础研究和临床应用提供了技术平台. 相似文献
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应用光镜和透射电镜观察,恒河猴肾上腺皮质可分为球状带、束状带和网状带。其特点是:(1)被膜较发达,有时可伸入球状带将其细胞分隔为团块。(2)球状带有时呈指状指入束状带和网状带,其内可见嗜铬细胞;球状带细胞可分为明、暗2种类型,他们排列成团球状、滤泡状、索状和不规则形。(3)网状带较发达,有的可分为内、外2个区;有时网状带呈刺状伸入束状带;有时网状带细胞可见于被膜下或髓质内。(4)有时部分被膜连同皮质一起呈指状伸入髓质内。(5)皮质细胞均含丰富的溶酶体、线粒体和内质网,但不同部位的细胞所含的脂滴在数量、大小、形态和电子密度等方面存在差异。 相似文献
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鸭出血症血凝及血凝抑制试验的建立和应用 总被引:1,自引:0,他引:1
鸭出血症是由不同于鸭瘟病毒的鸭新型疱疹病毒引起的鸭的一种传染性疾病。根据该病毒可凝集Balh/c小鼠红细胞的特性,我们建立了鸭出血症血凝及血凝抑制试验,经试验表明该方法是一种快速、实用、特异性强的检测方法。 相似文献
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儿茶素在家兔体内的药物动力学及生物利用度研究 总被引:1,自引:0,他引:1
对家兔单剂量静注和灌服儿茶素 (Catechin) 2 5mg/kg体重各 5只。用高效液相色谱法测定其血药浓度。房室模型分析表明静注给药后的药时数据符合无吸收二室开放模型 ,主要动力学参数为 :t1 / 2α=( 0 .1 5± 0 .0 1 )h ,t1 / 2 β=( 0 .5 8± 0 .0 2 )h ,Vc=( 1 .41± 0 .0 8)L ,Vβ=( 2 .97±0 .1 1 )L ,ClB=( 3.5 3± 0 .1 0 )L/h ,AUC =( 1 6.95± 1 .5 2 )mg/(L·h)。灌服儿茶素的药时数据符合一级吸收一室开放模型 ,主要药物动力学参数为 :t1 / 2Ka=( 0 .39± 0 .0 6)h ,t1 / 2Ke=( 0 .79±0 .1 1 )h ,tmax=( 0 .78± 0 .1 1 )h ,Cmax=( 3.35± 0 .1 6)mg/L ,AUC =( 7.45± 0 .94)mg/(L·h) ,F =( 4 4.1 8± 3.5 9) %。儿茶素在健康家兔体内的药动学特征是 :吸收迅速 ,达峰时间短 ,消除快 ,半衰期短 ,表观分布容积较大 ,口服摄入吸收不完全 相似文献
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ZHANG Zhi CHENG Xiao-na FAN Ya-ting DONG Ya-qin LIU Shuang WU Fa-xing SHAO Wei-xing LI Xiao-cheng 《中国畜牧兽医》2015,42(7):1654-1660
To ascertain a diarrhea case in a pig farm in Shandong province,the pathological changes of dead piglets were observed and nested RT-PCR test was carried out on 7 diarrhea samples for porcine epidemic diarrhea virus (PEDV).Pathological examination revealed that intestine was detected as enlargement,hyperemia and edema.After histological examination,the typical microscopic lesions of intestine were disappearance of epithelial cells,villus shrinkage and shortening.The result of nested RT-PCR showed that all of the 7 samples could amplify a specific target band of PEDV.Molecular characteristics of two field strains showed that they had an amino acid homology of 92.3% to 92.4% with vaccine CV777 and 96.6% to 98.6% with other previous field strains which sequences were downloaded from GenBank.Phylogenetic tree analysis further revealed that all of PEDV strains could be mainly divided into two clusters of G1 and G2. G2 consisted of the field strains of our study and other field strains from USA,China and so on,which had the same sequence characteristics of two insertions and one deletion,while G1 consisted of all vaccines of CV777 and several older field strains from China and Korea.These results indicated that our field strains were the dominant strains in recent epidemic diarrhea occurrence.Moreover,its molecular characteristics might be a characterization of differentiating the field and vaccine strains. 相似文献