检测实验动物弓形虫感染的两种PCR方法的建立和比较

为了建立敏感、稳定、特异的PCR检测体系，用于实验动物弓形虫感染的检测。采用B1基因设计引物，建立常规PCR，用P30基因设计引物，建立巢式PCR；用两种PCR方法检测实验感染弓形虫小鼠血液和腹腔波中的DNA动态变化；用巢式PCR检测自然状态下的普通级豚鼠、教学和科研用兔的弓形虫感染率，并和常规PCR检到结果比较。结果，巢式PCR可检测到1fgDNA含量，比常规PCR敏感lOO倍；对其他微生物DNA无交叉现象，特异性强；对同一样品重复检测3次，阴、阳性结果一致，稳定性好。小鼠感染弓形虫2d后，巢式PCR对小民腹腔液的阳性检出率为83．3％，对血液的阳性检出率为33．3％；感染3d后，腹腔液阳性检出率为100％；而常规PCR在小鼠感染3d和4d后才能在腹腔液和血液中检测到，检出率各为16．7％。受检普通级豚鼠没有感染弓形虫，教学和科研用兔的弓形虫总感染率为14．3％。结论认为，巢式PCR方法可用于实验动物弓形虫早期感染的检测，具有敏感性高、特务性强、稳定性好的特点。     

畜禽肌肉肌苷酸研究进展

文章综述了畜禽肌肉呈味物质肌苷酸的研究现状、呈味机理、代谢途径和影响因素,提出了现阶段肌苷酸研究过程中存在的问题并对未来的研究方向进行了展望,以期为目前动物营养工作者在畜禽风味品质方面的研究提供借鉴与参考。     

凤头鸭胚性反转建立及性别候选基因的表达

试验通过对鸭胚注射芳香化酶抑制剂(AI)和β-雌二醇(E2)构建性反转模型,观察其性腺外观形态变化,并荧光定量检测雌性基因P450arom、FOXL2、SF-1和雄性基因DMRT1、SOX9、AMH等6个基因在性反转和正常鸭胚中的表达情况。结果显示:芳香化酶抑制剂能促进公鸭性腺发育,母鸭表现雄化;雌二醇能促进母鸭性腺分化,公鸭表现雌化。DMRT1、SOX9、AMH表达趋势相似,AI促进基因表达使胚胎雄化;E2抑制基因表达使胚胎雌化。P450arom、FOXL2、SF-1在AI组中被抑制使胚胎雄化,在E2组中得到促进发生雌化。该研究结果为研究鸭胚性反转机制奠定理论基础。     

东亚和南亚固有绵羊群体X-蛋白等位基因特有频率分布的研究

本研究利用单向水平板淀粉凝胶电泳以我国5个固有地方绵羊品种包括湖羊（Hu）、同羊（Tong）、滩羊（Tan）、小尾寒羊（Han）、洼地羊（WD）为研究对象对X-蛋白遗传多样性进行了检测,并引用我国周边国家、地区绵羊品种为分析背景。结果表明以喜马拉雅山脉为界的亚洲东部和南部的北部群体和南部群体在编码的X（＋）型的显性等位基因X频率上存在极显著差异（P〈0．01）。北部检测的群体中X等位基因频率范围为0～0．18,平均值为0．0878,包括属于藏羊和蒙古羊系统的小尾寒羊（Han）、不丹羊（Bhutan）、同羊（Tong）、湖羊（Hu）、滩羊（Tan）、洼地绵羊（WD）、Bhyanglung绵羊（Bhy）、Baruwal绵羊（Bar）、云南绵羊（Yunnan）、哈拉和林绵羊（Kh）和乌兰巴托绵羊（Ub）。南部检测的群体中X等位基因频率范围为0．2037～0．4655,平均值为0．3082,包括属于印度绵羊系统的孟加拉国绵羊（Ban）、Kagi绵羊（Kagi）、Lampuchhre绵羊（Lamp）、越南占部落绵羊（Cham）和缅甸绵羊（Mya）。本研究揭示X等位基因可作印度绵羊的标记,在绵羊群体尤其是亚洲东部和南部绵羊系统形成的研究中具有潜在的重要作用。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒S1蛋白基因在毕赤酵母中的表达

应用特异性引物从猪血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）中扩增出S1蛋白基因,PCR产物纯化后克隆入pGEM-T载体中,得到重组质粒pTS1。用Ec0R I和Not I双酶切pTS1,回收目的基因S1片段将其定向克隆到pPICZαA中,构建重组质粒pPICZαASI。用BstX I酶切pPICZαAS1使其线性化,并电转至感受态毕赤酵母细胞GS115。PCR法鉴定阳性重组子,用1％甲醇诱导表达后,进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果显示,在酵母菌培养基上清中检测到相对分子质量为73000的重组蛋白,且该重组蛋白可与HEV多克隆抗体发生特异性血清学反应,表明HEV的S1蛋白片段在毕赤酵母中获得成功表达。     

刚地弓形虫GRA3基因的克隆与表达

采用PCR方法扩增弓形虫GRA3基因,将扩增产物与pMD18-T Simple载体连接,重组质粒经PCR、双酶切鉴定后测序;构建pGEX-4T-1／GRA3表达载体,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western blot分析。结果显示,克隆的GRA3基因片段长687bp,含有1个669bp的开放阅读框,编码222个氨基酸,与GenBank中UK株（AF414079）的同源性为99．8％;表达的融合蛋白为50Ku,能被弓形虫阳性血清识别;表明该融合蛋白具有较好的免疫反应活性。     

藏山羊和藏绵羊小肠黏膜免疫相关细胞的比较研究

为了探讨藏山羊和藏绵羊在低氧环境中小肠黏膜免疫屏障结构的适应特征,本试验采用组织化学方法和图像分析法对4只成年藏山羊和4只成年藏绵羊小肠不同肠段的上皮内淋巴细胞、杯状细胞和肥大细胞的数量进行比较研究。结果显示:藏山羊小肠各段杯状细胞和肥大细胞的数量均高于藏绵羊(P<0.05),其中藏山羊十二指肠、空肠和回肠的上皮内杯状细胞数量分别比藏绵羊多37.87%(P<0.05)、21.43%(P>0.05)和31.68%(P<0.05),藏山羊十二指肠、空肠和回肠的肥大细胞数量分别比藏绵羊多85.20%(P<0.05)、50.73%(P<0.05)和22.52%(P>0.05);而藏山羊小肠各段上皮内淋巴细胞的数量(36.35±0.98)低于藏绵羊(48.84±2.12)(P<0.05)。结果提示,成年藏山羊的小肠黏膜免疫屏障功能强于藏绵羊;藏绵羊小肠中上皮内淋巴细胞起重要的黏膜防御功能,而在藏山羊小肠中杯状细胞和肥大细胞起重要的黏膜防御功能。     

不同品种受体对绵羊胚胎移植效果及羔羊早期生长性能的影响

旨在探讨以小尾寒羊和蒙古羊作为受体时,二者的胚胎移植效果及所产羔羊的早期生长性能之间的差异。选用南非肉用美利奴羊(n=11)和澳洲白绵羊(n=110)作为供体,以小尾寒羊(n=196)和蒙古羊(n=504)作为受体;对供体母羊进行超数排卵以及人工授精处理,记录供体母羊的收集胚胎总数和可用胚胎数,计算平均每只羊收集的可用胚胎数以及胚胎合格率;对小尾寒羊和蒙古羊进行同期发情及胚胎移植处理,记录受体母羊的产羔数,计算繁殖率;计算并比较不同受体母羊所产羔羊的平均初生重、成活率以及70日龄断奶羔羊数、70日龄断奶重、平均日增重、平均每只母羊提供的断奶羔羊数。结果表明,从供体母羊中共获得可用胚胎549枚,平均每只羊收集可用胚胎4.54枚,胚胎合格率为82.56%;利用胚胎移植技术,移植受体母羊529只,所产羔羊240只,平均繁殖率为45.37%;小尾寒羊的发情率和繁殖率明显高于蒙古羊;共获得70日龄断奶羔羊211只,羔羊成活率为87.92%,平均日增重为280.00g;小尾寒羊和蒙古羊所产的羔羊初生重没有显著差异(P>0.05),小尾寒羊所产羔羊的70日龄断奶重和平均日增重分别极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)高于蒙古羊,而蒙古羊所产羔羊的成活率显著高于小尾寒羊(P<0.05);平均每只小尾寒羊母羊可提供的断奶羔羊数(0.42只)略高于蒙古羊(0.39只),小尾寒羊作为胚胎移植受体略具有优势。综合分析表明,在内蒙古兴安盟地区小尾寒羊和蒙古羊均可以作为胚胎移植的受体来使用。     

血清2型猪链球菌河南分离株毒力基因的鉴定及其cps2j全基因序列分析

为了解血清2型猪链球菌(S.suis2)河南分离株的毒力基因型及cps2j全基因突变情况,本研究扩增S.suis2毒力基因gdh、cps2j、mrp、ef 、sly、orf2和fbps,并对s.suis2的cps2j进行全基因序列测定和同源性分析.结果表明,gdh、cps2j、mrp、ef、sly、orf2和fbps基因在8个S.suis2分离株中的检出率分别为100％(8/8)、100％(8/8)、62.5％(5/8)、75％(6/8)、87.5％(7/8)、100％(8/8)和100％(8/8);其中cps2j全基因核苷酸及推导的氨基酸序列与来源不同的S.suis2分离株同源性分别达98％和97％以上,以该基因构建的系统发育树表明8株S.suis2河南分离株与国内外不同参考株同源性高,亲缘关系密切.     

留茎高度对红芪经济性状、品质和耗水规律的影响

采用单因素随机区组法,在甘南高原地区研究红芪留茎高度对其产量、品质和土壤水分的影响。结果表明,红芪在7月上旬现蕾前剪茎,且留茎50 cm水分利用效率最高,主根长、根径、单株根鲜重等经济性状和产量最高,且产量比CK提高了30.86%,差异极显著,多糖含量、总黄酮含量也最高,药材品质最优。红芪留茎高度约50 cm较为理想,既可以节水,又能达到增产和改善药材品质的效果。