猪红细胞生成素受体基因突变与血常规性状关联分析

本研究旨在探索红细胞生成素受体基因(EPOR)影响红细胞相关性状的分子机理.对EPOR基因第1内含子和第4内含子突变位点g.705G＞T和g.2373C＞T,以飞行时间质谱进行个体基因型分型,在构建的大白猪×民猪F2代资源群体内开展其与6种血常规性状(红细胞压积、血红蛋白、平均红细胞血红蛋白量、平均红细胞体积、红细胞计数及红细胞分布宽度)的关联分析.结果表明,第1内含子突变位点g.705G＞T未发现与血常规性状显著关联;第4内含子突变位点g.2373C＞T群体内只发现2种基因型,其中CT基因型个体的红细胞压积显著高于CC基因型个体(P＜0.05),但并未发现与其他性状显著关联.结果显示,EPOR基因突变可显著影响红细胞压积,说明该基因可作为影响红细胞压积的主效候选基因开展深入研究.     

口蹄疫病毒Asial/JS/China/2005株基因组全长感染性克隆的构建

利用长距离RT-PCR技术扩增病毒基因组3'端覆盖口蹄疫病毒Asial/JS/China/2005株近全长的3个片段(共约7.5 kb),并利用单一酶切位点将其分别克隆到pBlueseriptSK+载体上.利用融合PCR扩增到基因组5'端含有15个C碱基的基因片段(约700 bp),并将其连接至pGEM-T载体.最后将这4个片段的阳性克隆装配至剔除T7启动子的低拷贝载体pcDNA3.1/Zeo(+)中构建该病毒株的全长cDNA克隆.以构建的FMDV Asial/JS/China/2005株全长cDNA为模板,使用TTRNA聚合酶在体外转录得到病毒RNA,通过脂质体将其导入BHK细胞获得拯救病毒.对收获的病毒分别用RT-PCR、间接免疫荧光、电子显微镜观察和乳鼠致病性分析结果证实,通过体外转录获得了具有感染性的口蹄疫病毒.该株感染性克隆的构建为深入研究口蹄疫病毒的致病机制及研制新型疫苗等奠定了基础.     

粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)培养细胞对家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)的吞噬过程观察

观察微孢子虫在非天然宿主细胞系的生物行为过程,有助于探究微孢子虫的侵染特异性机制。选用鳞翅目昆虫粉纹夜蛾(Trichoplusia ni,Tn)细胞系为材料,接种家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)孢子后观察其吞噬过程。结果发现:经氢氧化钾发芽预处理的Nb孢子虽然可以在Tn培养细胞液中发芽,但未见发芽孢子的孢原质进入Tn培养细胞;在接种Nb孢子浓度为2.0×105mL-1以上时,观察到孢子通过内吞作用进入了Tn培养细胞,但未见孢子的增殖;随着时间的延长和进入Tn培养细胞的Nb孢子的增加,可引起Tn培养细胞的超微结构变化,并导致细胞的裂解。以上结果说明,虽未见Nb以发芽形式感染Tn培养细胞,但Nb能够被吞噬进入Tn培养细胞并破坏其结构。     

用卡片PCR法检测卡耶他环孢子虫

使用FTA卡片法提取卡耶他环孢子虫DNA,利用特异性引物组F1E/R2B、CC719/CRP999进行巢式PCR,得到1条298bp的特异条带。并以柔嫩艾美尔球虫、贝氏隐孢子虫等作为对照,结果显示,除卡耶他环孢子虫外,均无特异性条带。用卡耶他环孢子虫卵囊进行巢式PCR敏感性试验,结果显示敏感度最高达1.0×100个/mL。     

Application of PCR-HRM in the study of relationship between leptin gene promoter polymorphisms and liver cirrhosis

AIM: To analyze the feasibility of PCR-high-resolution melting curve analysis (HRM) for detecting the site mutations of C2549 and G2548 in leptin gene promoter from the patients with liver cirrhosis, and to explore the relevance between mutant genotypes and physiological and biochemical indexes in liver cirrhosis patients. METHODS: Compared with the method of PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP), the present research used the method of PCR-HRM to analyze the site mutations of C2549 and G2548 in leptin gene promoter in control group (n=100) and liver cirrhosis group (n=100). The physiological and biochemical indexes of the patients were also detected and compared. RESULTS: Leptin gene promoter polymorphism was detected using PCR-HRM with effectiveness, high flux and accuracy. Preliminary results showed that the main mutation of the patients with liver cirrhosis was in C2549 site, but not found in G2548 site. Leptin, free leptin index (FLI), fasting insulin (FINS) and insulin resistance index estimated by homeostatic model assessment (HOMA-IR) in liver cirrhosis group were higher than those in control group. Insulin sensitivity index (ISI) and soluble leptin receptor (sOB-R) in liver cirrhosis group were lower than those in control group with significant difference except leptin level. Meanwhile, FLI showed positively correlated with FINS and HOMA-IR (r=0.45, r=0.53, P<0.05), and negatively with ISI (r=-0.34, P<0.05). In the patients with liver cirrhosis, C2549A heterozygous mutation was predominant. The indexes of HOMI-IR, leptin, sOB-R and FLI of C2549A homozygotes and heterozygotes were higher than those of the wildtypes, which showed significant difference except leptin and sOB-R levels (P<0.05). CONCLUSION: PCR-HRM can be more accurate for identifying leptin promoter polymorphism. The increase in the frequency of C2549A mutation may be closely related with liver cirrhosis. Existence of hyperinsulinemia and insulin resistance may be correlated with leptin level in the patients with liver cirrhosis.     

壳聚糖涂膜对常温贮藏兔眼蓝莓果实品质的影响

以“圆蓝”兔眼蓝莓为试材,研究了0．5％壳聚糖（0．4％高分子壳聚糖＋0．1％低分子壳聚糖）涂膜对常温贮藏蓝莓果实品质的影响。结果表明,在20℃常温条件下贮藏20d的过程中,壳聚糖涂膜可以有效减缓蓝莓果实感官品质及果实硬度的下降速度,降低腐烂率和失重率,保持较稳定的TSS和有机酸含量;抑制PPO活性的快速升高和MDA的大量积累：有效延长常温条件下的贮藏期,有利于保持采后蓝莓的品质。但对采后蓝莓果实中的花色苷含量无明显影响．对类黄酮的增加有一定的抑0作用。     

室内模拟条件下玉米秸秆的分解特征及物质组成变化

以玉米秸秆为材料,研究了在室内模拟的条件下不同处理的玉米秸秆的腐解率、粗纤维以及全钾含量的变化。结果表明,随着腐解时间的延长,各处理的腐解率不断增大,在其他条件一致的前提下,添加微生物的处理平均腐解率 大于未添加微生物的处理,秸秆长度为1 cm的处理平均腐解率大于秸秆长度为3 cm的处理;粗纤维含量的变化总体趋势是下降,其他条件一致的前提下,秸秆长度为1 cm的处理粗纤维含量小于秸秆长度为3 cm的处理,在添加物微生物的处理中秸秆长度为1 cm且C/N=25的处理粗纤维平均含量最小,其含量为31.57%;其他条件一致的前提下,秸秆长度为1 cm的处理全钾含量大于秸秆长度为3 cm的处理。     

山西菜田捕食性食蚜蝇优势种及其对菜蚜的控制效果

对山西菜田捕食性食蚜蝇优势种及对菜蚜的控制效果进行了研究，菜田常见捕食性食蚜蝇有黑带食蚜蝇，大灰食蚜蝇，斜斑鼓额食蚜蝇，野食蚜蝇，四条小食蚜蝇，短翅细腹食蚜蝇6种，以黑带食蚜蝇种群数量最大，平均占全年发生总量的36.3%，通过对食蚜蝇产卵量，卵化率，幼虫期捕食量和羽化率测试，筛选出的黑带食蚜蝇，大灰食蚜蝇，斜斑鼓额食蚜蝇幼虫对菜蚜均有较强的捕食能力，其中黑带食蚜蝇为山西菜田菜蚜捕食性食蚜蝇优势种，用黑带食蚜蝇三龄幼虫对菜蚜进行防治试验，结果以1：180防效最佳，72h后控制效果达93.5%。     

寄主植物对百合上桃蚜的影响研究

对广东百合种植区进行了系统调查,结果表明为害宜兴百合Lilium peciosum的蚜虫有桃蚜Myzus persicae和豆蚜Aphis craccivora,其中桃蚜发生的数量较多。在百合未出苗前,1-3月桃蚜主要在小白菜和芥菜为害,并在这些作物上越冬,转入春季后,当食料条件发生变化后,产生有翅蚜迁出,当年3—6月主要在百合上为害,当百合现蕾及成熟后,又产生有翅蚜迁出,在菊花和茄子等植物上为害,随后再转到小白菜和芥菜上为害。当地种植的小白菜Brassica campestris var．Chinensis、芥菜B．juncea等植物都属于桃蚜的嗜食寄主。通过组建不同寄主上实验种群生命表,表明桃蚜在百合和小白菜上种群趋势指数分别为28．512和27．027,最有利于桃蚜种群的增长。     

基于超声波技术的水平管气液两相流流型识别方法

根据超声波在不同介质界面处的反射回波强弱不同的特性,提出了应用超声波对水平管气液两相流流型进行非介入式在线识别的方法。理论计算得到钢管内壁接触的介质分别为水和空气时的声压反射率,证明了超声波流型识别法的可行性。数值仿真研究管内的流体分别为水、空气时不同界面的反射回波特点,得到了超声波流型识别法的实现方式。依据数值仿真结果,开展超声波气液两相流流型在线识别实验,分析气液两种流体在管道横截面上的分布,从而识别水平管气液两相流流型。研究结果表明：在不影响生产的前提下,超声波流型识别方法能够准确获取水平管气液两相流流动过程中的实时流型,操作方法简便,且结果可靠。（图10,表1,参9）