硒对S. aureus诱导的奶牛乳腺上皮细胞Nod2/MAPK/mTORs信号通路关键蛋白表达的影响

【目的】硒（Se）能否通过Nod2/MAPK/mTOR途径调控金黄色葡萄球菌诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤,有待于进一步研究。因此本研究将探究硒对金黄色葡萄球菌（S. aureus）感染的奶牛乳腺上皮细胞（bMECs）Nod2/MAPK/mTORs信号通路中关键蛋白表达的影响,从而为阐明硒的免疫调控机制提供理论依据。【方法】首先将bMECs以10 ⁶细胞/孔接种于6孔板中,当细胞超过80%的汇合度时,用含2、4和8 μmol·L ^-1浓度硒的培养基替换原来的培养基,继续孵育12 h,然后用PBS洗涤每孔3次,将S. aureus按MOI=1:1的比例加入6孔板中,继续培养0.5 h,然后收集bMECs细胞进行相关蛋白的检测。本试验共分3大组,即对照（Con）组（bMECs）、模型（Mod）组（bMECs+S. aureus）和试验组。其中试验组又分3个亚剂量组,即Low组（bMECs+2 μmol·L ^-1 Se+S. aureus）、Mid组（bMECs+4 μmol·L ^-1 Se+S. aureus）和Hig组（bMECs+8 μmol·L ^-1 Se+S. aureus）,每组设3个重复。利用BCA蛋白测定试剂盒对收集的bMECs细胞进行总蛋白提取。应用Western blotting技术检测bMECs中Nod2和RIP2蛋白表达水平及JNK,AKT和mTOR蛋白磷酸化水平。将蛋白样品加到10%的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中,上样量为20 μg/孔,之后将蛋白转移到聚偏氟乙烯（PVDF）膜上。将PVDF膜用5 mL 5%脱脂乳阻断2 h,脱脂乳脱脂后用TBST清洗后,分别用5 mL的 Nod2、RIP2、JNK、AKT、mTOR和β-actin的一抗孵育过夜,回收一抗。之后在PVDF膜中分别加入5 mL上述蛋白的二抗,室温孵育2 h,回收二抗。PVDF用TBST洗涤5次,最后在暗室条件下进行化学显影。 【结果】S. aureus能显著提高bMECs中Nod2和RIP2蛋白表达水平及JNK,AKT和mTOR蛋白磷酸化水平（P<0.01）。S. aureus感染0.5 h后,Nod2蛋白水平显著升高（P<0.01）。在培养基里添加2 μmol·L ^-1 的硒可极显著抑制Nod2蛋白的表达（P<0.01）,在培养基里添加8 μmol·L ^-1 的硒可显著抑制Nod2的表达（P<0.05）; S . aureus感染0.5 h后,RIP2蛋白水平显著升高（P<0.05）,而在培养基里添加8 μmol·L ^-1 硒可显著抑制RIP2蛋白的表达（P<0.05）;S. aureus感染0.5 h后,与对照组相比,模型组JNK蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.01）。在培养基里添加4 μmol·L ^-1 的硒能显著抑制JNK蛋白的磷酸化水平（P<0.05）,在培养基里添加8 μmol·L ^-1 的硒能显著抑制JNK蛋白的磷酸化水平（P<0.01）; S. aureus感染0.5 h后,与对照组相比,模型组AKT蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.01）。在培养基里添加4 μmol·L ^-1 硒可极显著抑制JNK蛋白的磷酸化水平（P<0.01）,在培养基里添加8 μmol·L ^-1 硒可显著抑制AKT蛋白的磷酸化水平（P<0.05）;S. aureus感染0.5 h后,模型组mTOR蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.01）。在培养基里分别添加4 μmol·L ^-1 和8 μmol·L ^-1 硒均能显著抑制mTOR蛋白磷酸化水平（P<0.05）。 【结论】硒可通过抑制bMECs Nod2/MAPK/mTORs信号通路中关键因子蛋白的表达而减轻S. aureus诱导的bMECs炎症反应。     

Adipose-derived stem cells mediate immunosuppression of Th17 in multiple sclerosis

AIM: To investigate how human adipose-derived stem cells (hASCs) regulates the differentiation of Th17 cells in multiple sclerosis. METHODS: hASCs were isolated from the adipose tissues. Magnetic-activated cell sorting (MACS) kit was used to isolate CD4⁺ T cells from peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) which were isolated by density gradient centrifugation. The percentage of CD4⁺ T cells was detected by flow cytometry. The activated CD4⁺ T cells were co-cultured with hASCs for about 4 d at different ratios of hASCs to CD4⁺ T cells (1:4 and 1:10) in a Th17 polarised condition. Another group adding anti-leukemia inhibitory factor (LIF) antibody was set up. Th17 cell proportion of the CD4⁺ T cells was determined by flow cytometry. The level of LIF in the supernatant of co-cultured system was measured by ELISA. The mRNA expression of retinoid-related orphan receptor γt (RORγt), interleukin-6 receptor (IL-6R), interleukin-23 receptor (IL-23R), LIF and leukemia inhibitory factor receptor (LIFR) was detected by real-time PCR. RESULTS: The result of flow cytometry suggested there were mainly hASCs, and the percentage of CD4⁺ T cells in the PBMCs were above 90% after MACS. The Th17 cell proportion decreased in 1:4 and 1:10 co-cultured groups in a dose-dependent manner. The mRNA expression of IL-6R, IL-23R and RORγt was downregulated and the expression of LIFR and LIF was up-regulated. When the anti-LIF was added into the co-cultured system, the ratio of Th17 cells increased and reached to the control level. The protein level of LIF obviously increased after co-cultured. After anti-LIF added, the mRNA expression of RORγt and IL-6R was up-regulated. CONCLUSION: hASCs inhibits the differentiation of Th17 cells from multiple sclerosis patients through the competitive inhibition of LIF/IL-6 by secreting LIF.     

化学疏花剂对富士苹果的疏花疏果效应

选用尿素、施易乐、NAA+BA、TMN-6等4种制剂对富士苹果进行了疏花疏果试验,结果表明:以0.5 mg/L TMN-6制剂的处理效果最好,座果率为27.9%;在盛花期喷布TMN-6,不仅能显著提高疏花效果,且使侧花的结果率显著降低,提高了单果率和中心果率(89.22%和100%);同时TMN-6处理对叶、生长点以及果实生长和果实品质均无不利影响。     

将生物多样性纳入环境影响评价的机制探讨

探讨了如何在环境影响评价的各环节中全面考虑生物多样性问题,阐明了将生物多样性影响评价纳入环境影响评价过程的机制。     

生物活性物质熊果酸资源分布状况研究进展

综述了生物活性物质熊果酸的植物资源概况、种类分布和分布差异性。熊果酸在植物中分布很广,其中熊果酸含量较高的植物有:希腊鼠尾草、夹竹桃、迷迭香、西班牙鼠尾草、长春花、六座大山荆芥、小冠薰、长穗薰衣草、百里香、苦丁茶、冬季香薄荷、枇杷、枸骨、白花蛇舌草和樱桃肉桂,分别达74.50、43.00、41.00、40.20、37.00、29.20、20.20、19.00、18.80、17.70、16.00、12.30、10.60、10.07和10.00 mg/g。熊果酸主要分布于茶树、果树、药用植物、香草植物及泡桐等其它植物中,熊果酸的分布还存在着品种差异性、植物部位差异性、区域差异性、季节差异性和生长条件差异性等。对熊果酸植物资源分布状况的充分了解,可为生物活性物质熊果酸的可持续研究开发、高值化和规模化利用提供物质基础。     

2013~2015年黑龙江省马铃薯晚疫病菌群体结构研究

为明确马铃薯北方一季作区致病疫霉对烯酰吗啉和双炔酰菌胺的敏感性时空动态及常用药剂对马铃薯晚疫病的田间防效,采用菌丝生长速率法测定了2011—2019年采自河北、内蒙古和吉林3省 (区) 马铃薯主产区的922个致病疫霉菌株对烯酰吗啉和双炔酰菌胺的敏感性,采用茎叶喷雾法于2018年和2019年评估了烯酰吗啉和双炔酰菌胺等7种杀菌剂在推荐剂量下对马铃薯晚疫病的田间防效。结果表明：在时间上,不同年份采集的922株致病疫霉对烯酰吗啉的抗性频率和抗性指数分别为25.71%~100%和0.31~0.50;890株致病疫霉对双炔酰菌胺的抗性频率为0~1.43%,仅于2013年检测到抗性菌株,历年抗性指数均为0.25。在地域上,3省 (区) 致病疫霉菌株对烯酰吗啉的抗性频率和抗性指数分别为57.19%~66.56%和0.39~0.42;对双炔酰菌胺的抗性频率为0~0.36%,抗性指数均为0.25。田间药效试验结果显示：50%烯酰吗啉可湿性粉剂 (有效成分,下同) 300.0 g/hm²对马铃薯晚疫病的防治效果 (83.3%~85.6%) 高于23.4%双炔酰菌胺悬浮剂140.4 g/hm²的防治效果 (76.9%~78.6%) 和50%氟醚菌酰胺水分散粒剂75.0 g/hm²的防治效果 (70.0%~71.4%)。20%霜脲氰悬浮剂162.0 g/hm²、40%氟醚菌酰胺 • 烯酰吗啉悬浮剂240.0 g/hm²、43%霜脲氰 • 双炔酰菌胺水分散粒剂290.3 g/hm²和687.5 g/L氟吡菌胺 • 霜霉威盐酸盐悬浮剂773.4 g/hm²对马铃薯晚疫病的防治效果为79.8%~86.9%。为此,推荐烯酰吗啉单剂或混剂及双炔酰菌胺混剂在河北、内蒙古和吉林3省 (区) 继续用于马铃薯晚疫病的防治,但是需密切监测致病疫霉对烯酰吗啉和双炔酰菌胺的敏感性变化并注意与不同作用机理的杀菌剂混用或者交替使用。     

EGR对增压柴油机排放特性的影响

对于轻型车用增压中冷柴油机,应用真空驱动的弹簧膜片式EGR阀,真空度由控制器根据输入的电压信号量决定,从而控制EGR阀的开度,研究了在不同工况下EGR阀的流通特性,分析了柴油机的HC、CO、NOx排放,烟度和比油耗随EGR率的变化规律。     

基于生物量的冬小麦穗部主要形态参数模型

冬小麦穗部形态结构模型是功能–结构小麦模型的重要研究内容。以济麦22、泰农18和鲁原502为材料,于2013—2014和2014—2015年度开展了品种和施氮试验。结合2013—2014年数据,分析穗部主要形态参数与器官生物量的定量关系及形态参数间的内在联系,构建了冬小麦穗部主要形态结构模型。经2014—2015年小麦生长数据检验,除穗长模型精度略低外,穗宽、穗厚、颖壳长、颖壳宽、颖壳厚、籽粒长、籽粒宽和籽粒厚模型精度均较高,所建模型可较好模拟不同品种与施氮水平冬小麦穗部主要形态结构。     

开食料中不同NDF水平对犊牛生长性能、瘤胃内环境及血清生化指标的影响

为探索开食料中不同NDF水平对犊牛生长、瘤胃发酵参数以及血清生化指标的影响,选用初生重相近(42±2.5) kg、饲喂足量初乳的中国荷斯坦犊牛60头,其中公犊牛36头,母犊牛24头。随机分为A、B、C和D 4个处理组,每个处理15头,其中9头公犊牛+6头母犊牛,试验犊牛于犊牛岛(1.5 m×3.4 m)单独饲养。15日龄开始分别饲喂NDF水平不同的4种开食料,分别为:A处理10%,B处理15%,C处理20%和D处理25%,70日龄断奶,试验期112 d。结果表明:1)0~42日龄和70~112日龄,B组日增重均高于A、C和D组(P<0.05),分别高出45.69、39.79、117.13 g·d^-1和35.33、153.29、 145.93 g·d^-1。70~112日龄,B、C和D组开食料采食量显著高于A组(P<0.05),分别高出255.20、252.48和392.27 g·d^-1。A(0.61)和B(0.60)组犊牛的饲料转化率显著高于C(0.55)和D(0.54)组(P<0.05);2)犊牛瘤胃pH在35和70日龄时,C组显著高于其他3组(P<0.05),112日龄时,A和B组显著高于C和D组(P<0.05);3)瘤胃NH₃-N含量在90日龄前差异不显著(P>0.05),但在112日龄时, B、C和D组较A组显著降低16.72%、44.19%和52.10%(P<0.05);4)C和D组乙酸比例显著高于A和B组(P<0.05);B组丙酸比例较A、C和D组高出4.24%、3.18%和6.43% (P<0.05),乙酸/丙酸显著低于A、C和D组(P<0.05);5)各处理组间血清总蛋白、葡萄糖和尿素氮含量无显著差异(P>0.05)。1~3月龄犊牛开食料中NDF适宜水平为15%有利于提高断奶后日增重,促进饲料利用效率,改善瘤胃内环境,且对犊牛血清生化指标无不利影响。     

葡萄霜霉病菌对甲霜灵抗药性治理及其田间抗药菌株遗传稳定性分析

 为了明确葡萄霜霉病菌对甲霜灵的田间抗药性水平发展态势,于轮换用药前后,采用叶盘漂浮法测定了河北、山西、河南3省葡萄主要种植区11个葡萄园试验地葡萄霜霉病菌对甲霜灵敏感性变化动态。结果表明:田间采集的葡萄霜霉病菌对甲霜灵抗药的菌株其抗药性可以稳定遗传;不同地区轮换用药后,葡萄霜霉病菌对甲霜灵的抗药水平变化态势因用药流程的不同而发生相应的变化。采用不同作用机制的杀菌剂轮换或混合用药进行葡萄霜霉病菌对甲霜灵的抗药性治理时,需制定合理的施药流程,并根据抗药性治理的效果不断完善治理措施。