自身启动子控制的卡那霉素抗性基因在哺乳动物细胞中表达的检测

为了研究卡那霉素抗性(KanR)基因能否在哺乳动物细胞中表达以及用含相同抗性基因重组质粒防治奶牛乳腺炎的安全性,用PCR从重组质粒p215C3LYZ中扩增得KanR基因,将其克隆入原核表达载体pQE-31,用含卡那霉素(Kan)琼脂平板筛选得KanR重组菌,经IPTG诱导成功表达了预期大小的Kan抗性融合蛋白;用纯化的重组蛋白免疫小鼠,获得了Kan抗性蛋白抗血清,经Western blotting证明免疫血清特异性良好;分别用重组质粒pQE-Kan和p215C3LYZ转染COS-1细胞,在不含抗生素培养液中培养后分别收集细胞上清和细胞裂解物;将转染细胞上清分为添加和不加Kan组,接种Kan敏感菌DH5α大肠杆菌,培养物的OD600检测结果显示,添加组的指示菌生长被抑制,转染细胞上清中无Kan抗性蛋白表达;以Kan抗性蛋白免疫血清进行的Western blotting结果显示,转染细胞内无Kan抗性蛋白表达;将p215C3LYZ注射奶牛乳腺,用脱脂和浓缩奶样进行Western blotting检测,结果显示试验牛乳中也无Kan抗性蛋白表达。这些试验结果提示,来源于原核大肠杆菌的KanR基因启动子在动物细胞中无转录活性,乳腺注射含KanR基因的重组质粒不会表达对奶牛和人体有害的Kan抗性蛋白。     

饲喂水平对杜寒F1代公羔羊体内主要矿物质含量及分布的影响

本文旨在研究饲喂水平对杜寒F1代公羔羊体内主要矿物质含量及分布规律的影响。选用杜寒F1代公羔羊21只,随机分为3组,即自由采食组(AL组)、70%限饲组(IR70组)和40%限饲组(IR40组),每组7个重复,每个重复1只,AL组体重达到35 kg时进行比较屠宰试验,测定各组织中钙、磷、镁、钠、钾含量。结果表明:饲喂水平对羔羊体增重、骨骼、肌肉、皮、脂肪、内脏(包括血液)增重影响显著(AL组>IR70组>IR40组)(P<0.05),对羊毛重影响不显著(P>0.05);在各组织中,仅有IR70组内脏(包括血液)中钙含量显著高于IR40组(P<0.05),AL组和IR70组内脏(包括血液)中磷含量显著高于IR40组(P<0.05);在分布上,骨骼是钙、磷、镁、钠的主要储存部位,分别占机体总量的98.5%、83.4%、71.7%和41.5%,而钾主要储存于肌肉中,占机体总量的49.4%。结果提示,饲喂水平提高,羔羊各组织重量显著增加(除羊毛重外),骨骼、肌肉和皮中钙、磷、镁、钠、钾含量均无显著变化,饲喂水平为维持需要时,钙和磷含量最低。骨骼是钙、磷、镁和钠的主要储存部位,而钾主要储存于肌肉中。     

鲜猪肉病原菌污染研究进展

鲜猪肉病原菌污染是引起食源性中毒因素之一,近年来有愈演愈烈趋势。论文从鲜猪肉病原菌污染种类(革兰阳性菌和革兰阴性菌)、污染来源(内源性和外源性)、检测技术(病原学、免疫学、分子生物学和光谱学)和控制措施(源头环节控制、加工环节控制和流通销售环节控制)等四个方面进行了综述,以期为鲜猪肉的卫生安全保障提供参考。     

兔多杀性巴氏杆菌16S rRNA PCR检测方法的建立

为建立一种快速准确检测兔多杀性巴氏杆菌(P.multocida)的PCR方法,本研究以P.multocida的高度保守的16S rRNA为靶基因,参考已公布的P.multocida的16S rRNA基因设计1对特异性引物,优化PCR反应条件,建立了P.multocida PCR快速检测方法。该PCR方法的敏感性达到60 cfu/mL,采用该PCR方法扩增P.multocida标准株和分离株均能扩增出643 bp的目的片段,扩增兔大肠杆菌、支气管败血波氏杆菌结果为阴性,证明本实验所建立的P.multocida PCR检测方法快速、敏感、特异、可靠,可用于P.multocida的快速鉴定与诊断。同时用建立的PCR方法对临床疑似病兔的脏器分离菌进行扩增,可扩增出目的条带,与细菌的分离结果相一致。     

支气管败血波氏杆菌外膜蛋白双向电泳图谱的建立

为建立支气管败血波氏杆菌(Bb)外膜蛋白(OMPs)双向电泳(2-DE)图谱,本研究利用碳酸钠法提取OMPs,并分别对裂解液、pH值、上样量、聚焦条件、染色方法等进行优化。2-DE结果表明,用裂解液5 MUrea、2 M Thiourea、2%CHAPS、2%SB3～10溶解蛋白,pH4～7的13 cm线性胶条考染上样量为750μg、银染上样量为75μg,聚焦条件为500 V,2 h,1 000 V,1 h,8 000 V,2∶30 h,8 000 V,4 h时,能获得聚焦良好、分离清晰的Bb OMPs图谱。本研究首次建立了Bb OMPs的2-DE图谱,为其蛋白质组学研究奠定了基础。     

甘薯膳食纤维提取工艺的研究

试验模拟甘薯淀粉提取过程获得甘薯渣,通过单因素与正交试验研究了各种酶添加量对膳食纤维提取率的影响,确定糖化酶为主要酶,并且通过正交试验确定了糖化酶酶解条件(温度、时间、pH值)的最优组合。试验结果表明,各种酶的最适添加量分别为:α-淀粉酶1.4mL/g、胰蛋白酶0.5mL/g、糖化酶为5.0mL/g,其中,糖化酶是影响提取率的主要酶。糖化酶酶解的最佳工艺条件为:温度60℃,时间40min,pH值4.5。在最优工艺条件下制备甘薯渣膳食纤维产品,对产品进行分析表明,总膳食纤维提取率为81.6%,其中可溶性膳食纤维提取率可达25.7%,甘薯渣膳食纤维的膨胀力和持水力分别达到3.42mL/g和665%。     

两种处理工艺对蚕蛹品质影响的研究

 试验采用正已烷处理法(S2)和水煮处理法(S3)两种工艺对蚕蛹粉(silkworm pupae meal,SM)进行脱脂处理,以未经任何处理的蚕蛹粉(S1)为对照,通过比较三种蚕蛹粉物理性状、常规营养成分、氨基酸组成及必需氨基酸评分和脂肪酸组成,评价两种处理工艺对蚕蛹品质的影响。结果表明,正己烷处理的蚕蛹粉无臭,无色,容重、粗蛋白、粗灰分含量显著提高(P<0.05),粗脂肪含量显著降低(P<0.05),水煮处理法对蚕蛹粉脱脂和脱色效果甚微(P> 0.05),但有除臭效果。正己烷处理后显著提高了蚕蛹粉氨基酸总量、必需氨基酸和鲜味氨基酸含量(P<0.05),且处理后的蚕蛹粉更接近FAO/ WHO 规定的理想蛋白源标准。正己烷处理显著影响蚕蛹粉脂肪酸组成,其中C18∶0、C18∶2n-6水平较其他两组显著提高(P<0.05),C18∶3n-3水平显著降低(P<0.05),C18∶1n-9水平显著低于对照组(S1),但与水煮法组(S3)差异不显著。综上所述,正已烷脱脂不但操作简便,费用低廉,且可以达到除臭、脱色、脱脂、生产优质蚕蛹蛋白粉应用于饲料工业中的目的。     

豫章名园—南昌杏花楼植物配置研究

杏花楼是南昌市区目前保存较为完整的古典园林,对其植物配植进行实地调查分析,探讨其植物种类、配植特点及历史意义。     

兴安、华北落叶松速生丰产栽培技术综述

兴安落叶松和华北落叶松作为重要用材林树种,在林业生产中的作用十分突出。为了满足2种落叶松速生丰产的需求,本文主要从造林地选择、整地方法、造林苗木选择、造林方法等方面对2种落叶松的造林技术进行总结和分析,并对新的研究技术进行剖析,旨在探讨出科学、合理、适用的2种落叶松速生丰产栽培技术,使其更加科学地指导林业生产,促进林分发挥更大效益。     

刺槐AFLP分析体系的建立与优化

以10份刺槐种质资源为试材,通过对影响AFLP反应体系关键因素的优化,建立了刺槐AFLP分析的反应体系,即15ng/μL模板DNA在37℃下双酶切(MseI、EcoRI各0.15U/μL)2h,0.075U/μL T4DNA连接酶连接12h,连接产物、预扩增产物稀释10倍后扩增效果最佳。并利用该体系筛选出引物E+3/M+3,构建了刺槐种质资源的AFLP指纹图谱。