我国马立克氏病研究进展

马立克氏病是危害养禽业健康发展的主要疫病。本文从马立克氏病的流行病学、致瘤基因、诊断技术、疫苗研究等几个方面,对国内马立克氏病的研究进展进行了综述。     

3A蛋白间接ELISA试验检测猪口蹄疫感染抗体的研究

用表达的口蹄疫3A蛋白作为包被抗原，建立了间接ELISA试验，对口蹄疫病毒感染血清、免疫血清和其它非口蹄疫病毒血清进行了检测研究。结果表明，3A蛋白间接ELISA试验对口蹄疫具有较好的特异性，可以区分感染口蹄疫病毒的猪血清和疫苗免疫猪血清。     

比较3种间接ELISA试验检测口蹄疫感染抗体的研究

将3种检测口蹄疫非结构蛋白抗体的间接ELISA试验进行了比较。这3种间接ELISA试验检测田间血清样品的最低符合率为96％，最高符合率达98％：有2种间接ELISA试验可以检测到感染口蹄疫第10天后血清中的口蹄疫感染抗体．有1种间接ELISA试验可以检测到感染口蹄疫第14天后血清中的口蹄疫感染抗体；这3种间接ELISA试验检测12份已知口蹄疫阳性血清的试验结果吻合。研究表明．这3种间接ELISA试验方法对于检测口蹄疫感染抗体具有较好的特异性．其中猪口蹄疫3A蛋白间接ELISA诊断试剂盒在灵敏性、特异性和符合率方面更优于另外2种试剂盒。     

鸵鸟输精方法初探

采用手臂引导法给５只鸵鸟进行阴道内输精,共输精１６次,并在２周内收蛋１７枚,其中有受精蛋８枚,受精率为５０%,经孵化获得雏鸟７只。试验初步认为,对母鸵鸟进行训练后,用此方法进行输精是可行的;对鸵鸟这样大型的鸟类,进行阴道浅部输精效果较好。     

部分集约化养禽场肉鸡马立克氏病横断面调查

为了解肉鸡马立克氏病的流行特征,从6个集约化养殖场随机选择未免疫马立克氏病疫苗的20日龄和45日龄肉鸡各360只,分别采集其羽髓和血清样品,用琼脂免疫扩散试验和PCR试验进行马立克氏病检测。琼脂免疫扩散试验检测结果为:20日龄肉鸡马立克氏病阳性率为3.33%~6.67%,45日龄肉鸡马立克氏病阳性率为5.00%~8.33%;PCR试验检测结果为:20日龄肉鸡马立克氏病阳性率为5.00%~10.00%,45日龄肉鸡马立克氏病阳性率为8.33%~13.33%。统计这两种试验均为阳性的数据,结果显示20日龄肉鸡双阳性率为3.33%~5.00%,45日龄肉鸡双阳性率为5.00%~6.67%。检测结果表明,所调查的肉鸡群存在一定的马立克氏病感染,提示要加强肉鸡马立克氏病防疫,降低其感染发病率。     

食品中产单核细胞李斯特菌PCR检测方法的建立

根据产单核细胞李斯特菌hlyA基因设计引物,进行PCR扩增,检测该方法的特异性和灵敏度。人工污染样品经Half-fraser和Fraser增菌后进行PCR检测。结果表明,产单核细胞李斯特菌扩增出234bp的条带,对照菌未扩增出目的条带。该方法的灵敏度为104cfu/mL。人工污染样品的检出限为8cfu/25g,说明PCR方法检测食品中产单核细胞李斯特菌具有快速、特异、敏感等特点,具有较高的实用价值。     

非洲猪瘟间接ELISA诊断试剂盒的研究

用带有编码非洲猪瘟病毒衣壳蛋白Ｐ７２ 基因的重组杆状病毒（Ｂａｃｐ７２）作载体,在ｓｆ９细胞中表达并得到重组Ｐ７２蛋白,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ可得到分子量在 ７２ｋＤａ左右的电泳带。用标准阳性非洲猪瘟血清对 Ｐ７２蛋白进行 ＥＬＩＳＡ检测,证明该蛋白具有生物学活性。用Ｐ７２作为间接法的包被抗原,对ＥＬＩＳＡ反应条件进行了优化。确定最佳包被液为ＰＢＳ（ｐＨ７．２）、最佳封闭液为１％ＰＣＴ、最佳血清稀释液为４％ＰＥＧ６０００／ＰＢＳ、最佳冲洗液为０．５Ｍ ＮａＣｌ／０．５％Ｔｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳ（ｐＨ７．２）。本实验反应体系采用５０μｌ的微量法,可节约试剂及抗原。反应在２小时内即可完成,达到了快速诊断的目的。包被了抗原并用封闭液封闭后的酶标板密封后保存于－２０℃的冰箱中,至少可以保存５个月。阻断试验和交叉试验表明ＥＬＩＳＡ法有良好的特异性。间接ＥＬＩＳＡ比Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法具有更高的灵敏性。血清学调查没有得到阳性结果,与我国实际情况相符。用Ｂａｃｐ７２表达的非洲猪瘟病毒Ｐ７２蛋白抗原作为间接ＥＬＩＳＡ的检测抗原来检测非洲猪瘟血清具有快速、简单、无感染的特点。本实验为非洲猪瘟ＥＬＩＳＡ检测试剂盒的最终组装提供了实验依据。     

一株猪瘟病毒田间株E0蛋白基因的克隆和序列分析的研究

采用RT-PCR技术,扩增猪瘟病毒田间株XN株的E0蛋白基因,构建E0基因的重组质粒,序列分析表明,该病毒E0蛋白DNA序列与国内几株流行株的同源性高达99%,与CSFV-1、CSFV-2群猪瘟病毒的差异较大,该病毒E0蛋白191～227段DNA和氨基酸序列与国内流行株比较同源性相对较高,而与不同基因群CSFV国外流行株比较时同源性相对较低。     

应用PCR检测羊接触传染性脓疱性皮炎病毒

设计合成了1对引物，建立用于检测羊接触传染性脓疱性皮炎病毒的PCR方法。结果表明，PCR对羊接触传染性脓疱性皮炎病毒细胞培养毒的检测与细胞培养CPE、电镜检测的结果相一致。经对扩增产物进行序列分析，与已报道NZ—2株的核苷酸序列同源性高达97％。用此PCR方法扩增羊痘病毒、口蹄疫病毒、蓝舌病病毒，结果均为阴性。此方法用于检测羊接触传染性脓疱性皮炎病毒是可行的、特异的。     

水疱性口炎病毒糖蛋白基因主要抗原表位区在大肠埃希氏菌中的高效表达及纯化

利用PCR技术扩增编码水疱性口炎病毒印第安纳型（VSV—Ind）糖蛋白基因的主要抗原表位区，通过引入其两端的EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点，定向插入到pET30c质粒T7启动子下游的多克隆区，构建重组质粒pET30c—vsvG，并转化至宿主菌BL21（DE3）株中。用1mmol／LIPTG诱导后，SDS—PAGE电泳表明，重组蛋白在大肠埃希氏菌中得到了高效表达，经过4h表达即可达到高峰；融合蛋白的相对分子质量为57ku。重组蛋白含有六聚组氨酸尾，主要以包涵体形式存在，Ni柱纯化后的蛋白经Western—blotting鉴定，具有良好的抗原性和特异性。