柑橘新品种早蜜椪柑的选育

早蜜椪柑是我们在 2004年由辛女椪柑（8306）芽变得到的优良椪柑品种,表现为早熟、风味浓郁、固形物含量高、低酸、少籽或无籽、果大、丰产性强等特点。经过几年观察,该品种遗传性状表现稳定,适应性强,综合性状优良,适合在南方椪柑适栽区推广栽培,该品种已获湖南省非主要农作物品种登记,品种登记证号XPD003-2012。     

抗PthA-NLS多肽单克隆抗体的制备及单链抗体基因的构建

 【目的】制备抗PthA-NLS多肽单克隆抗体并构建其单链抗体（single chain variable fragment,ScFv）基因,为从PthA角度进一步研究柑橘溃疡病致病机理创造条件,并为构建单链抗体基因植物表达载体,尝试利用转基因和植物抗体技术创制抗溃疡病柑橘新种质奠定基础。【方法】利用PthA-NLS重组多肽免疫Balb/c小鼠,制备抗PthA-NLS多肽单克隆抗体,从分泌抗PthA-NLS多肽单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA,采用RT-PCR和重叠延伸PCR（splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR）法构建其单链抗体基因,并克隆到pGEM-T载体和原核表达载体pET32a(+)中,重组原核表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导重组蛋白的表达。【结果】获得了3株能稳定分泌抗PthA-NLS多肽的单克隆抗体杂交瘤细胞株1C8H1、2D12B6、3D8A10。成功构建了单链抗体基因ScFv,获得的ScFv基因大小约750 bp,其中重链可变区（VH）基因有360 bp,轻链可变区（VL）基因有342 bp,中间连接肽基因45 bp,经过IPTG诱导ScFv原核表达,获得了大小为44.5 kD的ScFv重组蛋白。【结论】试验获得了3株能稳定分泌抗PthA-NLS多肽的单克隆抗体杂交瘤细胞株,成功构建了ScFv基因,并实现了原核表达,为进一步探索PthA的致病机理和下一步利用抗体技术获得抗溃疡病柑橘种质的研究打下了基础。     

沙田柚与枸橼CO5杂交后代的形态学与SRAP标记鉴定

以沙田柚为母本,枸橼CO5为父本进行杂交,采用形态学与SRAP分子标记方法对杂交后代2年生幼苗进行早期鉴定。结果表明,形态学鉴定可将286株F1代幼苗分为偏父本型51株、偏母本型23株和中间型212株,SRAP标记鉴定可将F1代幼苗分为偏母本型23株和中间型263株。286株杂交幼苗中有235株的SRAP标记鉴定与形态学鉴定的分组结果一致。