森林生态旅游专业森林景观植物课程教学探析

从培养学生专业兴趣、强调学习森林景观植物课的作用、做好课前准备、充分利用第一节课、合理取舍教学内容等方面入手,对森林景观植物课程的教学进行了探索,为培养合格的森林生态旅游专业人才打下基础。     

芽孢杆菌几丁质酶基因的克隆、序列分析及其在伯克氏菌B418中的表达

采用PCR技术扩增到枯草芽孢杆菌几丁质酶基因的编码序列。片段共2227bp,含有一个具有1788个核苷酸的开放阅读框架,起始密码子位于211bp,终止密码子位于1998bp,共编码氨基酸605个。序列比较发现同已发表的枯草芽孢杆菌几丁质酶核苷酸具有99.39%的同源性。将该基因与大肠杆菌-伯克氏菌穿梭质粒pRK415连接,获得重组质粒pRChi113。重组质粒电击转入伯克氏菌B418中,获得工程菌株B418-9、B418-13。与野生菌株B418相比,平板拮抗试验表明,工程菌株B418-9、B418-13对大丽花轮枝孢、立枯丝核菌、麦根腐长蠕孢、禾谷丝核菌抑菌效果明显提高。     

利用实时荧光定量PCR特异检测多环芳烃污染土壤中的外源降解菌

生物强化法修复有机污染土壤过程中,外源降解菌的丰度直接关系着修复效果,有必要开发出特定外源降解菌在土壤中的数量检测方法。针对多环芳烃降解菌PPZ-1,基于基因组测序结果,筛选可能的特异基因序列,设计对应引物。比对各组引物对菌株及污染土壤样品DNA的PCR扩增产物,确定适于实时荧光定量PCR检测的特异性基因序列和引物。以含有特异性基因序列的重组质粒为标准品,确定实时荧光定量PCR反应试验条件,建立标准曲线。将该方法应用于投加了菌株PPZ-1的多环芳烃污染土壤,验证其可行性。结果表明,所筛选的特异性引物在菌株中可以扩增出条带,在土壤样品相同位置无明显条带,具有较好的特异性。实时荧光定量PCR反应标准曲线相关系数为0.999 9,斜率为-3.365,扩增效率为98.233%,熔点曲线无杂峰。对投加了外源降解菌PPZ-1的多环芳烃污染土壤进行绝对定量检测,检测数值与理论值数量级相同,该检测方法能较准确地反映土壤中PPZ-1的数量。     

多环芳烃污染土壤微生物修复技术

微生物降解是环境中PAHs主要的降解方式.介绍了微生物的降解能力、PAHs生物可利用性、电子受体、营养物质、环境因子及植物联合等对微生物降解PAHs的影响,并且对原位处理、异位处理的修复工艺进行了简述.同时,指出今后的治理应重视污染源头控制,完善酶制剂、联合修复等有效的生物修复技术.     

土壤拮抗链霉菌R15β-1,3-葡聚糖酶的纯化与部分特性分析

拈抗链霉菌（Steptomyces spp．）R15菌株是从大白菜植株根际土壤分离得到的,其代谢产生的抗菌物质对多种植物病原真菌有很强的抑制作用。采用ABP选择性培养基诱导培养法,获得4株（R8,R15,R31和AS）产β-1,3-葡聚糖酶菌株。其中链霉菌R15菌株在ABP平板上培养7d后,透明圈最大（〉12mm）,澄清度最高。从R15菌株提取酶液,经10％～75％的硫酸铵沉淀盐析、羟基磷灰石柱层析及DEAE-52柱层析得到纯化,纯化倍数为13．98,回收率达4．031％。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该酶的分子量为41.3kDa。酶特性研究结果表明。该酶作用的最适温度为55℃,最适pH为5．0,低于55℃、pH7．5以下酶较稳定。Fe^3＋、K^＋、Cu^2＋、Hg^2＋对酶有抑制作用,而Ca^2＋、Fe^2＋、Ba^2＋、Mn^2＋、Al^3＋及Zn^2＋对酶有激活作用。     

伯克氏菌双价转化载体的构建及结构鉴定

通过PCR技术分别在已有的几丁质酶基因和内切葡聚糖酶基因前端加入了SD序列,通过酶切、连接将上述两个基因串连,构建了自杀性转座重组质粒,为进一步构建转双价基因生防菌奠定了基础。     

优质香软米品种“银香38”种性保持之探讨

为保持优质香软米水稻品种"银香38"种性,需在三圃提纯复壮常规措施的基础上,增加香味基因和软米特性的检测等环节。第1年选择具有原品种种性的单穗200个,每穗种1行,生长中期采集叶片进行香味基因检测,收获含有纯合香味基因的植株,并调查稻米透明度;第2年将第1年入选的穗行种子各取同等数量按穗系进行种植,脱粒测产;入选穗系第3年进入原种繁育基地,收获后即为原原种,可作为下年繁殖的基础种子使用。     

BtR05悬浮剂制备及其对南方根结线虫卵孵化的影响

通过对表面活性剂、防腐剂、悬浮剂的筛选和组合优化,制备了苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis BtR05悬浮剂。室温条件下储存12个月后,BtR05悬浮剂的活菌存活率为74.74%。本试验测定了室内条件下BtR05悬浮剂对南方根结线虫Meloidogyne incognita卵孵化的抑制作用;结果表明对南方根结线虫卵孵化的抑制率随悬浮剂浓度的增大以及处理时间的延长而提高;BtR05悬浮剂稀释25倍液处理2d和4d后,对南方根结线虫卵孵化的抑制率分别为85.67%和97.97%。     

通过染色体整合几丁质酶基因提高伯克氏菌生防能力

为了提高伯克氏菌Burkholderia vietnamiensis的生防能力,通过Tn5转座子介导,将其携带的来自枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis的几丁质酶基因整合到野生伯克氏菌B418染色体DNA上,获得工程菌株B418-37。对获得的转化子进行Southern杂交和几丁质酶活性检测,结果证实几丁质酶编码基因已整合到伯克氏菌B418-37染色体DNA上并能表达几丁质酶。生物学特性研究发现几丁质酶基因整合到伯克氏菌染色体中,没有影响野生菌的解磷、解钾、固氮及其在植物根际的定殖能力。平板抑菌试验和温室盆栽试验显示,与野生型相比,该工程菌株对多种病原真菌的抑菌效果增强,说明几丁质酶在植物病害的防治中具有重要作用。上述结果说明通过染色体整合几丁质酶基因是获得多功能生防工程菌的有效途径之一。     

两株毒死蜱降解细菌菌株鉴定及对萝卜种子萌发的影响

鉴定两株有较强降解毒死蜱能力的菌株N16和N432,并初步探讨此两株细菌菌液对萝卜种子萌发的影响。通过对其形态、生理生化特征及16S rDNA的分析,进行初步鉴定;以不同浓度的菌液浸泡萝卜种,之后于25℃下培养,测定发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数。通过形态特征及序列分析,这两株菌均为琼氏不动杆菌属（Acinetobacter junii）。N16细菌原液对萝卜种子发芽率、发芽指数均高于对照组,N432作用完全相反。菌株N16对萝卜种子的萌发具有促进作用,这种促进作用随着培养液的稀释,呈现逐渐降低的趋势。而菌株N432则对种子的萌发具有抑制作用,并且这种抑制作用随着培养液的稀释呈现减弱趋势。