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81.
为建立快速特异的定量检测牛轮状病毒(BRV) VP7基因的荧光定量PCR检测方法,本研究设计扩增BRV VP7基因的特异性引物,将扩增的VP7基因片段(342 bp)克隆于pMD 18-T载体中(pMD-VP7),作为重组质粒标准品,建立EvaGreen荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法.经反应条件优化,结果表明该方法的最低检测量为8.03拷贝/μL.该方法对牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒、猪流行性腹泻病毒及牛结核分枝杆菌的检测结果均为阴性,表明其具有良好的特异性.批内和批间重复变异系数均小于3％.采用该方法对12份ELISA阳性样本检测出10份阳性,符合率83.33％.本研究建立的BVR VP7 qRT-PCR检测方法具有特异、灵敏、快速和对标本的检测能力较强等特点,可以用于临床诊断和流行病学调查. 相似文献