安徽省猪呼吸道疾病五种病原的分离与鉴定

猪呼吸系统疾病目前是困扰我国养猪业主要疾病之一。为了弄清安徽省猪呼吸道疾病主要致病微生物,本研究利用细菌学鉴定技术、RT-PCR技术对2010年-2011年安徽省皖南、皖中、皖北地区采集的180份呼吸障碍性病(死)猪病料进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒、圆环病毒2型、链球菌、巴氏杆菌、副猪嗜血杆菌等5种病原进行了分离鉴定。结果显示,猪繁殖与呼吸综合征病毒感染率高达68%,圆环病毒2型感染率高达83.3%;猪繁殖与呼吸综合征病毒与圆环病毒2型混合感染率达27.8%,猪链球菌感染率为22.8%。结果提示,猪繁殖与呼吸综合征病毒缺失株、圆环病毒2型、链球菌的普遍感染是近年安徽省猪呼吸道疾病的重要致病病原,研究结果为安徽省今后猪群呼吸道疫病防控策略的制定提供了参考依据。     

聚合酶链反应技术及其应用

聚合酶链反应（PCR）技术自1985年发明至今不断得到发展和完善,在常规PCR技术的基础上,结合免疫学、计算机技术、原位杂交等技术的利用和相关仪器的运用,衍生出了各种PCR方法和技术,如原位PCR、复合PCR、反向PCR、定量PCR、不对称PCR、电子PCR及PCR芯片等。这些衍生出的PCR新类型和新方法有着独特的技术特点,解决了以往传统PCR的局限性。PCR技术作为一种革命性的新技术将不断推动分子生物学及相关学科的发展,并广泛应用于病原诊断、基因表达、遗传病检测等生命科学研究领域。     

猪繁殖与呼吸综合征的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起,以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道综合征为主要特征。近几年,由于PRRSV不断变异,毒力更强的新型PRRSV毒株严重危害着养猪业。2006年入夏以来,我国南方一些猪场暴发了一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染病,运用分子生物学方法诊断与鉴定,最后证实猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株为主要病原之一。为更好地防制猪繁殖与呼吸综合征在我国的发生与流行,笔者对PRRSV的病原学、流行病学、致病机制和遗传变异等方面的研究进展进行综述。     

猪链球菌2型安徽分离株多位点序列分型与毒力特征研究

为了解安徽地区猪链球菌2型(SS2)临床分离株毒力基因分布、分子分型特征及其与致病性的相关性,本研究收集了58株源自临床患病猪的SS2,应用PCR技术检测其毒力基因:胞外蛋白因子基因(epf)、溶菌酶释放蛋白基因(mrp)和溶血素基因(sly),应用多位点序列分型方法(MLST)对其进行基因分型,并分析其与动物致病性之间的相关性。结果显示,58株分离菌,epf^+/mrp^+/sly^+型为44.83%(26/58),epf^+/mrp^-/sly^+型为25.86%(15/58),epf^-/mrp^+/sly^+型为18.97%(11/58),epf^-/mrp^-/sly^+和epf^-/mrp^-/sly^-型均为5.17%(3/58)。共分出10种ST型,其中ST1 26株(44.83%),ST7 18株(31.03%),ST28 6株(10.34%),ST117、ST156和ST308均为1株,各占1.72%,另有4种新发现的ST型,即ST958 2株(3.45%),ST957、ST959、ST970各1株(1.72%);分为4种克隆复合物(ST1 complex、ST27 complex、ST87 complex、ST188 complex)。ST1以epf^+/mrp^+/sly^+型为主(69.23%),其中23株(88.46%)分离自全身感染病猪;ST7以epf^+/mrp^-/sly^+型为主(55.56%),其次为epf^+/mrp^+/sly^+型(38.89%),其中13株(72.22%)分离自全身感染病猪。通过对斑马鱼、昆明鼠感染试验和LD50的测定,筛选出的6株强毒菌株分为ST1型(2株)和ST7型(4株)。结果表明,epf^+/mrp^+/sly^+是安徽地区SS2的优势毒力基因型,其次为epf^+/mrp^-/sly^+型。获得10种ST型,其中4种为首次发现,并且ST1和ST7为优势型。具有ST1/epf^+/mrp^+/sly^+遗传特征的菌株在临床上均倾向于导致全身感染。本研究结果揭示了安徽地区SS2毒力基因型、MLST遗传特征与毒力、动物临床症状之间的相关性,为开展SS2流行病学研究,区分不同菌株间毒力差异的研究提供参考依据。     

89株副猪嗜血杆菌临床分离株血清型、基因型鉴定与分析

旨在明确副猪嗜血杆菌（HPS）临床分离株分离部位的组织分布,进而探讨其血清型和基因型的流行分布特点及相关性,为猪格氏病（Glässer's disease）的有效防控提供科学依据。针对临床分离鉴定的89株HPS,利用PCR技术鉴定血清型,统计各血清型HPS在不同分离部位的菌株分布数量;应用多位点序列分型（MLST）方法进行序列类型（ST）鉴定分析、位点多态性分析、BURST分群统计和UPGMA系统发育树聚类分析。89株HPS临床分离株共鉴定出9种血清型（1、2、4、5、7、11、12、13、14）以及未定型（NT）,血清4、13、7和5型为优势血清型,分别占比28.09%、22.47%、13.48%和10.11%,有64株HPS分离于肺,占比71.91%;24种ST型,ST267、ST268、ST387和ST365为优势基因型,分别占比26.97%、21.35%、8.99%和5.62%,每个基因位点存在3~13个等位基因,多态性位点从3（g3pd）到71（6pgd）不等,BURST分析中划分为2个单个ST型和11个克隆群（CC）,UPGMA系统发育树被分为4个分支,优势ST型处于2、3、4三个分支中,均对应具有毒力血清型的HPS分离株。HPS临床分离株流行血清型和基因型呈现多元化,具有明显的遗传异质性,同时,ST型与血清型存在一定的交叉性,且与HPS临床致病力相关。     

猪丹毒丝菌CbpB基因的克隆表达及其间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

利用表达纯化的猪丹毒丝菌(ER)胆碱结合蛋白B(CbpB)建立一种检测ER抗体的间接ELISA方法.克隆扩增ER的CbpB基因并与原核表达载体pGEx-6P-1连接,经PCR、双酶切及测序鉴定,将阳性重组质粒转入E.coil BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot鉴定产物.以纯化重组Cb...     

猪传染性胸膜肺炎二价(血清7型+血清8型)灭活疫苗的制备及对小鼠免疫效果的评价

为制备猪传染性胸膜肺炎(PCP)二价(血清7型H170株+8型HB1株)灭活疫苗，并评价其对小鼠的免疫效果，本研究以2株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)(编号/血清型分别为H170/APP7、HB1/APP8)为疫苗株，复苏培养后调整活菌浓度分别为1.0×10⁹cfu/m L、2.0×10⁹cfu/m L、4.0×10⁹cfu/m L，甲醛灭活后相同浓度的两种菌液等体积混合，再与等体积ISA 201 VG矿物油佐剂乳化后制成PCP二价灭活疫苗，分别命名为A-1、A-2和A-3。以昆明鼠为实验动物模型，将A-1、A-2、A-3和PCP商用二价灭活疫苗均以0.2 m L/只分别经颈背部皮下多点注射免疫小鼠(A～D组)，对照组小鼠(E组)注射等体积灭菌生理盐水。于首免后21 d和二免后14 d收集各组小鼠血清，采用间接ELISA测定各组小鼠血清中Ig G抗体水平和相关细胞因子(IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-β、MCP-1)含量；同时采用血清杀菌试验测定各组小鼠血清中功能性抗体水平。分别于首免后21 d和二免后14...