双向电泳检测奶牛乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质方法的建立

为研究不同激素或营养素对乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质的影响,本实验建立细胞核磷酸化蛋白质提取方法及双向电泳实验技术。结果表明,细胞核磷酸化蛋白纯化结合双向电泳技术是乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质组学研究的有效方法,可为进一步研究乳腺上皮细胞机理提供技术基础。     

高赖氨酸蛋白基因Cflr在枯草芽孢杆菌中表达

赖氨酸作为家畜限制性必需氨基酸,其饲料含量直接影响到家畜蛋白质合成。试验利用基因工程方法,从辣椒花药中克隆出高Lys蛋白基因(Cflr),与载体pHT43构建成重组表达质粒,将其转入枯草芽孢杆菌中,IPTG诱导表达,基因在mRNA水平有表达,SDS-PAGE中出现一条明显的蛋白条带,大小为24 ku;经HPLC检测赖氨酸含量,重组菌赖氨酸含量比野生型菌株提高16.05%。该重组菌为以后其作为饲料添加剂进一步应用提供技术基础。     

奶牛泌乳关键基因与乳品质关系

近年来奶牛泌乳基因组学研究快速发展,在奶牛营养基因组学领域取得很多研究成果.已确定STA T5、mTOR、SREBP等乳蛋白和乳脂肪合成正向调控关键基因及SOCS3、GSK3Beta等负向调控基因,但其作用机制尚待进一步研究,更多的泌乳关键基因尚待挖掘以阐明乳品质的形成机理.     

甘氨酰tRNA合成酶对奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响

甘氨酰tRNA合成酶(glycyl-tRNA synthetase,GlyRS)是重要的氨基酰tRNA合成酶(aminoacyl-tRNA synthetases,aaRSs)家族成员。目前,国内外关于GlyRS 在奶牛乳腺发育过程中表达及调节的研究鲜有报道。为了揭示GlyRS的表达与奶牛乳腺发育与泌乳之间的关系,本试验应用EdU免疫荧光法、流式细胞术检测GlyRS对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMEC)中DNA数目及细胞周期的影响,实时荧光定量PCR、Western blotting技术检测GlyRS对BMEC中Cyclin D1的表达影响。结果显示,GlyRS过表达时,细胞的DNA合成、处于S期和G2/M期的细胞数、细胞中Cyclin D1的表达均增加;GlyRS抑制后,细胞的DNA合成、处于S期和G2/M期的细胞数、细胞中Cyclin D1的表达均减少。表明GlyRS通过上调Cyclin D1的表达,加快细胞周期转换,增加DNA合成数目,从而促进BMEC增殖。     

产蛋氨酸益生菌的筛选和鉴定

由于益生菌产蛋氨酸的特性有利于益生菌发酵食品的开发利用,从发酵食品的酸面团、米酒、白酒曲,以及实验室提供的菌种中分离纯化出48株菌株。将这些菌株进行纯化培养,利用高效液相色谱检测各菌株发酵液中蛋氨酸的含量,筛选出蛋氨酸含量相对较高的2株菌。利用16SrDNA扩增及Blast分析、特异性引物PCR等技术鉴定这2株菌,分别为纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp).,两株菌发酵液中蛋氨酸分别为21.08、19.38g·L-1。