鸡传染性贫血病毒CRISPR/Cas13a检测方法的建立及初步应用

为了快速、准确和简便地检测鸡传染性贫血病毒(chicken infectious anemia virus, CIAV),本研究参照GenBank中CIAV的VP2基因设计了特异的RPA引物和用于LwCas13a反应系统的crRNA,通过优化反应条件建立了检测CIAV的CRISPR/Cas13a方法，并验证了该方法的特异性、敏感性和复合性。结果显示，该法对感染鸡的其他常见病毒的检测均为阴性，特异性良好无交叉反应；灵敏度为50 copies/μL;与PCR的检测结果有很好的符合率。本研究建立的CRISPR/Cas13a检测方法配合试纸条显色在1.5 h内可对CIAV进行快速的鉴别诊断，为该病的诊断及防控净化提供了强有力的技术支撑。     

基于价值—风险的阜平县生态分区研究

为了探究阜平县生态风险，以2010年、2015年、2020年土地利用数据为基础，采用生态系统服务模型、景观生态风险模型，对二者的时空演变特征进行了定量分析，通过Z-score标准化划分了4类生态分区，揭示了阜平县生态环境时空演变特征。结果表明：(1)6种地类均有不同程度的改变，耕地增加最多，草地减少最多。高价值区主要分布于夏庄乡、龙泉关镇西部等林地、草地植被覆盖度高、水热条件较好的地区。阜平县以调节服务为主，且林地提供价值最高。(2)阜平县以较低生态风险区为主，占总面积的50%以上。在空间上呈“东南高、西北低”的分布特征。高生态风险区分布于北果园乡、王林口镇等区域，此区域人口数量多、景观类型细碎、零散分布。(3)4类生态分区变化程度较小，表明阜平县处于较为稳定的状态，高生态系统服务价值—低生态风险区(Ⅳ)占比最高，低生态系统服务价值—低生态风险区(Ⅲ)占比最低。通过生态分区研究，可为防范和降低区域生态风险与协调人地关系提供理论基础。     

硼对酸性环境中枳砧幼苗不同部位矿质元素含量及根H+相关酶活力的影响

以柑橘枳壳砧木苗为试验材料,设置硼浓度为0(-B)和10μmol/L(+B)以及营养液pH值分别为4(酸性环境)、6(适宜pH)等4种处理,研究硼对酸性环境中枳壳砧木不同部位各元素含量及根系MDA、可溶性蛋白、胞内H~+相关酶活力等的影响。结果表明,不论缺硼或低pH均抑制枳砧的株高、根长和干物质积累。低pH(pH=4)条件下施硼仍可增加株高、根长及地下部干物质量;低pH(pH=4)条件下加硼能够提高根、茎、叶中的K、Ca、Mg、Fe、Mn和B等元素含量,缓解因过量H~+导致的阳离子失衡。pH=4时,缺硼处理根系MDA含量比加硼时升高4.5倍,可溶性蛋白增加38.8%。并且,低pH(pH=4)时,加硼使根系细胞NADP-ME与H~+-ATP酶活力分别提高114.7%和80.8%,而PEPCase酶活力降低了51.4%。因此,低pH条件下施硼,可提高枳砧幼苗根、茎、叶中多个元素含量,调节细胞内H~+相关酶活力,维持胞内pH稳定,避免高H~+活性引起的损伤。     

氮添加和封育对华北落叶松人工林生长和草本多样性的影响

[目的]为揭示氮沉降背景下放牧对华北落叶松人工林及林下草本植物多样性的影响。[方法]本研究以河北省木兰围场常年受到放牧影响的华北落叶松人工林为研究对象，通过设置对照、封育、施肥、施肥+封育4种处理，测定样地内乔木胸径、树高、冠幅增长量和林下草本生物量及多样性等指标，探讨了2 a封育和施肥对华北落叶松人工林生长和草本多样性的影响。[结果]与对照样地相比，封育、施肥和施肥+封育处理均对乔木生长有促进作用，树高增长分别约31.7%、17.6%和47.5%，其中，施肥+封育处理与对照差异显著；封育、施肥和施肥+封育处理均促进了草本生物量的增长，草本地上生物量分别提高5.3、0.4、4.1倍，草本地下生物量分别提高4.9、0.1、4.3倍，总草本生物量分别提高5.1、0.2、4.2倍；封育和施肥处理下，草本多样性变化不大，但不同处理使物种优势度发生显著变化。[结论]本研究表明，短期氮添加和封育促进了华北落叶松林乔木和草本生长，但未对草本多样性产生影响，却显著改变了草本植物的组成。     

鸡TBX6过表达和干扰载体构建及干扰载体效率检测

研究旨在构建TBX6的过表达和干扰载体，为后续研究TXB6在精原干细胞（Spermatogonial stem cells,SSCs）形成过程中的功能奠定基础。通过qRT-PCR检测TBX6在胚胎干细胞（Embryonic stem cells,ESCs）和SSCs的表达水平，根据NCBI上提供的TBX6 CDS区的序列，设计引物扩增目的片段，将其连接到经线性化的慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro上，构建TBX6的过表达载体；同时，根据TBX6 CDS区设计三个干扰靶点，在退火后将其连接到经线性化的干扰载体pLVX-shRNA2-puro上，并且进一步将三个干扰载体转染鸡成纤维细胞系（DF-1），观察荧光表达情况并通过qRT-PCR检测其干扰效率。结果显示，TBX6在SSCs上的表达量显著高于ESCs(P<0.05)，测序和双酶切验证显示成功构建TBX6过表达及干扰载体；干扰载体转染DF-1细胞后均能稳定表达EGFP荧光蛋白，且shRNA2-TBX6的干扰效果最好。结果表明，TBX6过表达及干扰载体构建成功，且经定量检测后确定shRNA2-...