大豆花芽mRNA差异显示技术体系反应条件的优化

为建立适用于大豆花芽的mRNA差异显示体系,以“吉农18”花芽突变体为材料,采用RNAiso Plus试剂盒提取了大豆花芽的总RNA,并对DDRT-PCR体系中的Mg2+、dNTP及Taq酶的用量进行了优化.试验结果表明:适合大豆花芽mRNA差异显示的PCR体系(25 μL)为反转录产物用量2.0μL,锚定引物50 pmol/L,随机引物50 pmol/L,Mg2+ 1.5 mmol/L,dNTP 0.2 mmol/L,Taq酶1.5U.     

建德市农业循环经济的发展现状及对策

简要介绍了建德市近年来发展农业循环经济的现状,对建德市现有的农业循环经济模式进行了归纳,指出了整个农业循环经济发展中存在的问题,并提出了相应的解决方法。     

湟鱼体内发现绦虫

20 0 0年 2月笔者在平安市场购买湟鱼一条 (扎陵湖产 ) ,拿回取鳃 ,剖腹取出内脏后发现体腔底部有一些白色长带状物 ,后连同鱼一起送青海大学农牧学院兽医系寄生虫学教研室鉴定。共从鱼体内取出 4条虫体 ,鉴定为假叶目绦虫的中绦期实尾蚴阶段 ,又称为裂头蚴。这在湟鱼体内尚属首次发现。裂头蚴寄生在鱼、蛇、蛙、鸟以及一些哺乳动物 (包括人 ) ,成虫则寄生在犬、狼、猫等食肉动物的小肠内。其生活史是由于感染绦虫的食鱼鸟类在水面飞行时 ,将虫卵随粪便排列水里 ,在适宜温度的水中发育成为钩毛蚴 ,钩毛蚴被第一中间宿主剑水蚤吞入 ,在其体内…     

马传染性贫血病毒疫苗株EIAV_(FDDV)穿膜蛋白GP45的截短突变

为研究中国马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗致弱过程中基因组的进化特征,作者对EIAVFDDV前病毒的囊膜基因env进行了分析。使用PCR方法体外扩增EIAVFDDV前病毒DNA的env,并随机挑取PCR的阳性克隆子进行测序和序列比对分析。结果表明,随机挑取的PCR阳性克隆中,29/30的克隆子在第2 128-2 130位核苷酸处存在TGG→TGA(翻译中止密码)的突变。该基因对应的EIAV穿膜蛋白gp45的氨基酸数在突变株中较未截短株中减少154,变成259个aa。对EIAVFDDV进行Western blot分析时发现,EIAVDLV45 ku的gp45条带被约35 ku的条带取代。由此推测,EIAVFDDV疫苗株绝大多数病毒颗粒的gp45是截短型。对该代次疫苗株免疫马匹第15和40天体内EIAV前病毒DNA和基因组RNA的序列进行分析,结果表明该截短毒株具有在体内和体外进行复制的能力。由于已有研究表明细胞嗜性改变与gp45的截短有关,因此,推断EIAVFDDV的gp45的截短是其适应在体外培养的驴胎皮肤细胞上复制传代的结果。综上所述,本研究发现EIAVFDDV的gp45存在高比例截短突变,证明该截短突变毒株具有在体内和体外进行复制的能力。但该截短突变是否可通过改变EIAVFDDV在免疫马体内的细胞嗜性,进而影响其毒力和免疫原性,还有待进一步验证。     

玉米顶腐病发病原因研究及防治方法建议

玉米顶腐病的初侵染来源是种子、土壤、病残体带菌,其中种子带菌是远距离传播的主要途径。缺乏抗病品种和耕作质量下降是发病严重的主要原因。系统侵染是该病害发生的主要方式,再侵染发生在感病品种抽穗前后的新叶上,对植株生长和产量形成无重要影响。采取种植抗病品种、轮作倒茬、秋翻灭茬、增施磷、钾、钙元素等保健栽培技术和化学农药喷洒相结合的生态控防措施,可取得较好的防治效果。     

水貂肠炎病毒的分离及鉴定

应用细胞培养技术,从2006年山东某貂场送检的水貂病料中分离出1株水貂病毒,经PCR及VP2测序分析证明为水貂肠炎病毒(ZYL-MEV-1);动物感染试验表明是一株强毒株,培养1～20代细胞培养物对猪的红细胞血凝结果表明具有低血凝性,与2009年在大连地区流行的水貂肠炎病毒VP2的基因测序相比较同源率100%,提示此分离株可能为我国目前水貂肠炎病毒的主要流行株。     

5匹马外周血单个核细胞表达MHC-I类分子的差异分析

基于RT-PCR方法,扩增了用于马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)减毒疫苗株CTL表位研究的5匹马的编码经典MHC-I类分子的大部分基因,具体包括编码肽结合区大部分区域、α3区、穿膜区及胞浆区蛋白的基因,并进行了PCR产物的克隆和测序。试验马匹外周血单个核细胞(Peripheral blood mono-nuclear cells,PBMC)的总RNA提取物经RT-PCR扩增,并将所得产物进行T-A克隆。从每匹马的所有克隆中,分别随机挑取鉴定为阳性重组质粒的21~23个克隆用于测序分析。研究结果表明,5匹试验马匹各自具有3~5个等位基因,由于MHC-I分子等位基因表达的共显性特征,可以推测马的基因组内可能存在2~3个基因座对应于这些等位基因,这与国外已有研究结论基本一致。另外,不同马匹PBMC表达的MHC-I类分子的差别水平不一致。除了6号与7号和10号马之间MHC-I类分子的差异较大,无相同或高度相近的经典MHC-I类分子序列外,各马匹间均表达具有1个或1个以上的相同或高度同源的对应经典的MHC-I类分子的mRNA。以上研究结果既可作为正在开展的EIAV减毒疫苗株CTL表位研究的基础性、支持性数据,又可进一步丰富国内马的经典MHC-I分子多态性方面的相关研究。     

北方早春如何防治猪传染牲胃肠炎

猪传染性胃肠炎是一种高度接触性传染病,以呕吐、严重腹泻、脱水为特征,15日龄内仔猪死亡率较高,是一种养殖户所说的“腹泻性”症状的病毒性传染病。     

转录因子JunD在HIV-1前病毒DNA转录调控中的作用研究

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)潜伏感染的形成与AP-1家族蛋白的转录调节作用密切相关。为研究AP-1家族成员JunD分子在HIV-1潜伏感染形成中的作用,本研究基于可支持HIV-1复制的T细胞系Jurkat,构建敲除JunD和稳定(过)表达JunD的细胞系;拯救HIV-1假病毒并分别感染对照细胞、JunD敲除以及JunD稳定表达的细胞系,通过荧光素酶技术检测HIV-1前病毒DNA转录水平的变化。结果显示,与对照组相比,JunD敲除显著抑制了HIV-1的复制,而过表达JunD则促进了HIV-1的复制。该结果表明,JunD参与了HIV-1前病毒DNA的转录调控,并可能由此影响HIV-1在宿主细胞内的复制。本实验为研究激活HIV-1细胞潜伏感染的靶点提供了实验数据。     

应用ViewRNA技术特异性检测感染细胞中的不同马传染性贫血病毒株

为了对体外培养细胞感染的不同马传染性贫血病毒(EIAV)株进行特异的鉴别检测,本研究基于一种新的RNA原位杂交-ViewRNA技术,通过设计合成针对EIAVFDDV13和EIAVUK3病毒株基因组RNA的特异性探针,并结合信号放大技术和荧光标记技术,同时通过激光共聚焦显微镜进行观察,建立了可时两种不同株的EIAV基因组RNA进行细胞内原位检测的方法.研究结果表明,两组探针能够特异地与感染细胞中EIAVFDD13和EIAVUK3的病毒RNA相结合,可在两种不同EIAV株共感染的宿主细胞中实现对两种毒株的有效鉴别和定位检测.该方法为进一步研究EIAV与宿主细胞间相互作用提供了有效手段.