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为了制备抗鸭肠炎病毒(DEV)VP22蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究以DEV Clone-03基因组DNA为模板,通过PCR方法扩增UL49基因并克隆至pMD-18载体.重组质粒经测序鉴定后,将UL49基因亚克隆于原核表达载体pET-30a,构建重组表达质粒pET-30a-UL49.重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,在大肠杆菌中获得表达,并对表达的重组蛋白VP22进行western blot鉴定.结果显示,表达的重组蛋白分子量约为36 ku,与预期的大小一致.重组蛋白能够被鼠抗DEV阳性血清所识别,表明该重组蛋白具有良好的免疫原性.将重组蛋白纯化、复性后免疫BALB/c小鼠,制备MAb,经间接ELISA、western blot和间接免疫荧光试验进行筛选及鉴定.获得4株能够稳定分泌抗DEV VP22蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2810、2G1、3F10和3G2.其MAb亚类分别属于IgG2b、IgG2b、IgA和IgM.4株MAbs都能够与DEV Clone-03发生特异性反应,表明能够识别天然构象的VP22蛋白.这4株MAb可用于DEV VP22蛋白功能研究及抗原表位的研究. 相似文献
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对不同处理时间下不同浓度秋水仙素处理对罗汉果[Siraitia grosvnorii (Swingle)C.Jeffrey]愈伤组织的诱导效果进行了研究,结果表明,随着处理时间和秋水仙素浓度的增加,愈伤组织死亡率增加,变异植株细胞诱导率在一定范围内随着处理时间及秋水仙素浓度的增加有所升高,但秋水仙素浓度超过一定量时,变异植株细胞诱导率则下降,以0.5 g/L秋水仙素处理48 h最佳,对愈伤组织造成的伤害程度小.获得的变异材料与正常植株相比,叶片变大,生长减缓,气孔变化不明显,通过染色体分析初步鉴定为多倍体. 相似文献
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甘草种子SCAR标记的建立 总被引:3,自引:0,他引:3
甘草是一种常用中药材,药典记载的甘草药材来源植物有三种,即:乌拉尔甘草、光果甘草和胀果甘草。目前人工栽培用的甘草种子有些来自人工培育,有些来自野生收集,因此容易造成种子的混杂。通过将收集到的5种甘草种子进行RAPD(随机扩增多态性DNA)PCR扩增,对RAPD电泳图谱上具有差异性的条带进行克隆测序,根据序列信息设计序列特异的引物,建立甘草种子的SCAR(序列特异的扩增区域)标记。初步建立了几种甘草种子的SCAR标记:GC1F/GC1R,GC2F/GC2R,和GC3F/GC3R。 相似文献
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精准林业技术的设计与实践 总被引:20,自引:4,他引:20
为了阐明精准农业是农业现代化的重要标志之一,精准林业则是以精准农业思想为基础而产生的观点,该文主要介绍了精准农业和精准林业的特点,建立了精准农业的技术流程,设计了精准林业的技术路线.侧重讨论了精准林业与精准农业的相同点和差异,分析了实现精准农林业所要解决的关键问题.同时介绍了北京市小汤山精准林业示范工程和北京林业大学在精准林业方面的一些研究进展,展示了精准农林业技术的广阔发展前景. 相似文献