奶牛X性控冻精的卵胞质内精子注射研究

探讨奶牛X性控冻精的卵胞质内单精子注射(ICSI)技术的可行性及显微操作条件对奶牛X性控冻精ICSI效果的影响.结果表明,注射运动性控冻精ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率均高于不运动组,但差异不显著(P>0.05).分别用5%、8%和10%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的精子操作液处理性控冻精,进行ICSI操作,ICSI卵的卵裂率差异不显著;但PVP在5%和10%时,正常卵裂率分别是78.4%和69.1%(P<0.05),囊胚率分别是29.7%和20.4%(P<0.05).精子显微注射时,将卵母细胞的极体调整在相当于时钟6点与12点的位置时,所获ICSI卵的卵裂率差异不显著,但正常卵裂率(76.4%,66.7%)和囊胚率(28.6%,19.0%)明显提高(P<0.05).结论认为,进行奶牛X性控冻精ICSI操作时,应选用运动精子,并用含5%PVP的精子操作液进行处理,而且注射在卵母细胞极体置于6点的位置,有利于ICSI卵体外发育.     

宁夏农垦万只商品肉羊生产场羊群结构的优化与设计

为了稳步推进宁夏农垦企业集团百万肉羊产业化生产,笔者结合宁夏农垦生产实际,在既充分考虑宁夏农垦百万肉羊良种繁育和杂交利用体系的总体建设方案和现有建设实际,又紧密结合商品肉羊生产场目前技术力量和实际生产水平的前提下,提出了宁夏农垦万只商品肉羊生产场羊群结构优化与设计的具体方案:优秀种公羊50只,占羊只总数的0.5%,其中6月龄、1岁、2岁、3岁、4岁、5岁公羊分别占公羊总数的24%、18%、16%、16%、14%、12%;二元杂交母羊9950只,占羊只总数的99.5%,其中6月龄、1岁、2岁、3岁、4岁、5岁、6岁母羊分别占母羊总数的18.3%、16.4%、15.6%、14.5%、13.2%、11.8%、10.2%。     

18—甲基炔诺酮阴道栓诱导关中奶山羊发情试验

1 前言早在60年代初期,国外就对孕激素海绵栓诱导母畜同期发情进行了大量试验,并广泛应用于牛、羊、猪的繁殖控制。国内利用孕激素阴道海绵栓或配合促性腺激素进行家畜诱导发情的试验起步较晚,报道也较少,尤其未见到在山羊上试验的正式报道。     

布尔山羊不同季节超排效果比较研究

2002年秋季和2003年春季在山西太谷采用置入炔诺酮阴道栓+FSH+氯前列烯醇超数排卵处理方法,对12只布尔山羊进行了超数排卵处理。结果表明;布尔山羊春天夏初非繁殖季节、秋季繁殖季节的超排效果即供体羊平均回收胚胎数量、羊均可用胚胎数量、超排有效率、可用胚比率分别为20.5枚、18.3枚、100.0%、89.0%和22.8%枚、21.5枚、100.0%、94.5%,春末夏初超排效果虽稍低于秋季,但春、秋两季并无显著差异(p>0.05)。     

布尔山羊超数排卵胚胎移植试验

本试验采用置入炔诺酮阴道栓 FSH 氯前列烯醇同期发情、超数排卵处理方法，对8只布尔山羊(供体羊)、90只洪洞奶山羊(受体羊)进行了同期发情和超排数排卵胚胎移植试验。其结果如下：(1)8只供体羊回收胚胎数量、可用胚胎数量、羊均回收胚胎数量、羊均可用胚胎数量、可用胚比率分别为182枚、172枚、22．8枚、21．5枚、94．5％；(2)90只受体羊共有81只羊达到同期发情效果，发情同期率为90．0％；(3)150枚可用胚胎共移植洪洞奶山羊73只，妊娠51只，产羔80只，妊娠率69．9％，胚胎成羔率53．5％。     

从美国进境冻猪肾中捡出氯霉素

2003年4月,南海某公司进口一批美国冻猪肾,我局按规定抽样,用酶联免疫法(ELISA)检测氯霉素含量,结果发现氯霉素含量超标(1.5μg/kg).为求确保,我局两次从该批货物的样品中取样送广州局食检中心检验,结果分别为1.2、2.2μg/kg,再次确证为氯霉素超标.     

山羊乳腺上皮细胞基因转染条件的优化

为了优化外源基因转入乳腺上皮细胞的条件,本研究采用组织块培养法,从山羊乳腺组织中分离并获得了纯化的乳腺上皮细胞,通过染色角蛋白和测定生长曲线对其进行了鉴定和检测。然后利用电穿孔法将PEGFPC1载体导入乳腺上皮细胞,分别比较了在不同电压(120、140、160、180、200V)、不同电击时长(5、10、15、20ms)以及2株细胞(GMEC1、GMEC2)的不同代数(第1代、第3代、第5代、第9代)条件下的转染效率,并利用优化条件对山羊乳腺上皮细胞进行人β-防御素3基因转染,经过G418筛选,最终获得单克隆细胞,同时对获得的单克隆阳性细胞进行体外诱导表达,并对诱导产物进行Western blotting鉴定。结果表明,不同遗传背景的细胞对转染效率的影响较小,而第1代培养的细胞转染效率要显著高于传代细胞,乳腺上皮细胞在电压180V、电击时长15ms、电击1次的条件下转染效率最高,优化条件下转染、筛选和扩增后获得稳定表达人β-防御素3蛋白的单克隆乳腺上皮细胞。研究工作为乳蛋白基因表达调控机制的研究及乳腺特异性表达载体的检测提供参考资料。     

表达H7亚型禽流感HA基因杆状病毒转移载体的构建及重组病毒的鉴定

经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/PFV/Restock/1/34(H7N1)1.7kbHA基因的cDNA克隆到pMD18-T中并测序。在去除编码HA信号肽的核苷酸序列后,亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis4.5,筛选到重组质粒命名为rpBacHisH7HA。测序正确后,在脂质体介导下,与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTMDNA)共转染Sf9昆虫细胞,挑取蓝色蚀斑,经三轮蚀斑纯化,获得数株重组杆状病毒rBacHisH7HA。提取重组病毒DNA经PCR证明目的基因片段已插入杆状病毒基因组。     

抗促乳素单克隆杂交瘤细胞株的建立及鉴定

制备抗促乳素(prolactin,PRL)的单克隆抗体。应用PRL纯品免疫BALB/c小鼠,被免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选阳性克隆,将阳性克隆多次有限稀释得到抗PRL阳性单克隆细胞株,杂交瘤细胞上清分离法和诱生腹水法制备单克隆抗体,测其效价。共建立5株持续分泌抗体的杂交瘤细胞,分别命名为AA5B1、AB6C8、BB3C1、CA6E4、CE2H6。杂交瘤细胞株冻存4个月后复苏培养,形态良好,生长旺盛。培养液上清及腹水效价的OD值略有升高,说明杂交瘤细胞株稳定。5株杂交瘤细胞染色体众数均为99～105,并可见到中部和亚中部着丝点的骨髓瘤细胞标志染色体,说明5株杂交瘤细胞确为SP2/0骨髓瘤细胞与被免疫小鼠的脾细胞融合而产生的。