苹果属小金海棠转录因子MxMYB1基因的克隆及其原核表达

 MxMYB1是苹果属小金海棠MYB类转录因子。MxMYB1含1个重复序列及MYB蛋白特有的氨基酸组成。酶切、PCR扩增及测序分析表明构建的原核表达载体结构正确, 未出现碱基突变及移码现象。1 mmol/L IPTG诱导2 h后, 在预期的蛋白分子量38 kD处出现1条表达加强的蛋白条带, 而未经诱导的转化子没有此蛋白条带。为进一步目的蛋白的纯化和鉴定提供试验基础。     

山葡萄性别相关AFLP标记筛选及SCAR标记转化

通过AFLP分子标记方法,应用64对引物组合EcoR Ⅰ-NNN/Mse Ⅰ-NNN对山葡萄雌花、雄花和两性花植株基因池进行筛选,引物E-AGC/M-CTG在雄花和两性花植株基因池DNA中扩增出一条分子量为283 bp的特异性条带;经组池个体和其它品系验证,该特异性条带能在雄株和完全植株中稳定出现.将该特异性条带回收、克隆、测序,设计SCAR标记引物,对已知性别的85份山葡萄种质进行盲测,准确率达到97.6%,表明标记转化成功.由于该SCAR标记在绝大多数山葡萄栽培品种和有育种价值的种质资源中得到验证,可利用该SCAR标记对山葡萄杂交后代在苗期进行性别鉴定,提高育种效率.     

'寒富'苹果自花结实性分析及S基因型鉴定

 本研究以苹果‘寒富’品种及其亲本为试材,研究其自交亲和性并鉴定其S基因型。田间授粉试验结果显示,‘寒富’品种表现为自花结实,其母本‘东光’品种亦自花结实;而父本‘富士’品种自花授粉结实率极低,初步推断‘寒富’品种的自花结实性可能遗传自其母本‘东光’。利用PCR技术鉴定'寒富'品种S基因型为S1S9。由于‘东光’品种存在同名异物问题,本研究除日本‘东光’品种外,对辽宁省果树研究所、吉林省果树研究所、沈阳农业大学等单位保存的中国'东光'品种的S基因型进行了鉴定,发现除辽宁省果树研究所保存的'东光'品种S基因型为S2S19,与‘寒富’品种无亲缘关系外,其它两个单位保存的'东光'品种中均存在S9基因型,可能为'寒富'杂交育种时的原始母本。     

葡萄器官离体再生和遗传转化体系的建立

以‘森田尼无核’为试材,研究了生长调节物质、外植体类型、抑菌素等主要因素对葡萄离体不定芽再生和转化效率的影响,建立和优化了葡萄的再生和转化体系。结果表明：相对于BA和KT,细胞分裂素TDZ无论单独使用还是与生长素配合使用均可使葡萄不定芽再生频率达到最高;在MS + TDZ 2.0 mg·L^-1 、MS + TDZ 4.0 mg·L^-1 或MS + TDZ 4.0 mg·L^-1 + IAA0.1 mg·L^-1培养基上均可以较好地诱导森田尼无核葡萄再生不定芽,再生频率分别为37.4%,40.2%和50.0%;叶盘、茎段和叶柄都可以诱导再生不定芽,在同一种培养上再生频率有差异,但差异不大;采用根癌农杆菌介导的叶盘法转化葡萄时,卡那霉素抗性筛选浓度为20 mg·L^-1;抑菌抗生素使用头胞霉素适宜浓度为400 mg·L^-1,而使用羧苄青霉素时以300 mg·L^-1最佳;获得转化芽45个,部分株系用PCR和Southern 杂交证实,外源基因已整合在葡萄基因组DNA上。     

小金海棠类黄色条纹蛋白基因(MxYSL5)启动子的克隆与表达

为探明小金海棠(Mdus xiaojinensis)类黄色条纹蛋白基因(MxYSL5)的表达和调控机制,应用Tail-PCR技术从小金海棠中克隆了翻译起始位点上游891 bp的启动子序列.生物信息学分析表明,该启动子片段中存在光响应元件、乙烯应答元件、赤霉素响应元件、TATA-box、CAAT-box等顺式作用元件.以GFP为报告基因,构建了含MxYSL5基因启动子的植物表达载体MxYP5-GFP.将MxYP5-GFP用基因枪法转化洋葱(Allium cepa)表皮细胞,瞬时表达结果表明,该启动子能够驱动GFP在洋葱表皮细胞中的表达,可以用于MxYSL5的表达示踪.     

水分胁迫诱导平邑甜茶叶片衰老期间内肽酶活力的变化及其生化特性研究

 平邑甜茶叶片在水分胁迫下内肽酶活力的变化可分为低值缓降期和速升期 ,对应于叶绿素含量缓降期和速降期 ,用激活剂和抑制剂处理。结果表明 ,水分胁迫引起叶片老化过程中存在 3种以上的内肽酶 (巯基蛋白酶、丝氨酸蛋白酶和金属蛋白酶 ) ,而在蛋白质降解中起主要作用的是巯基蛋白酶。以牛血红蛋白、酪蛋白为底物时 ,最适 pH为 5 .2 ;以Rubisco为底物时 ,最适pH为 4 .8。这表明水分胁迫在平邑甜茶叶片衰老过程中起主要作用的是酸性蛋白水解酶 ;3种底物内肽酶的最适温度均为 4 5℃。另外 ,用不同浓度放线菌酮、激素、H2 O2 处理的试验表明 ,放线菌酮和BA可抑制内肽酶的活性 ,而ABA和H2 O2 可促进内肽酶活力的提高。     

苹果实生砧木种质资源耐缺铁和耐盐碱性评价

为了解苹果实生砧木资源抗逆性的种间、居群间和株系间差异及株系内性状分离,用8个种20份苹果资源的二年生实生苗和16个种81份苹果资源当年实生苗分别进行低铁、高盐和高pH胁迫处理,并调查缺铁黄化指数、盐害指数和碱害指数。山定子和新疆野苹果不同居群间3个性状的变异均小于苹果属种间差异,株系间、株系内实生苗3个性状分离程度最严重,但新疆野苹果同居群内株系间各性状的变异与种间差异相当。苹果属种质资源耐缺铁黄化和耐碱2个性状之间相关性显著,而缺铁黄化和耐盐之间、耐盐和耐碱之间不相关。筛选出草原海棠、小金海棠和楸子为耐缺铁黄化、耐盐、耐碱优异实生砧木资源。苹果属种质资源耐缺铁黄化、耐盐、耐碱3个性状不仅存在显著的种间差异,也存在显著的居群间变异,株系间和株系内的变异更广泛。     

利用细胞筛选方法获得番茄抗晚疫病突变体的研究

以番茄品种Alpatieva 90 5a和品系Line 1的子叶、下胚轴为外植体诱导愈伤组织进行细胞育种 ,培养基中附加不同浓度的制霉菌素 (Nystatin)用于突变体的筛选 ,结果表明 :两个品种制霉菌素的临界致死浓度 (仅存活 2 %微型愈伤组织时的浓度 )分别为 14 0mg/L和180mg/L。再生植株分别在培养皿内 (试管苗 )和温室等条件下进行了抗晚疫病鉴定 ,其突变体抗病性明显高于对照     

温度对不同苹果基因型铁离子吸收动力学的影响

以小海棠、山定子为试材,研究了不同温度处理对二个苹果基因型铁离子吸收动力学特性的影响。结果表明;小金海棠、山定子幼苗对铁离子的吸收均符合ｉｃｈａｅｌｉｓ＝Ｍｅｎｔｅｎ离子上动力学规律,除基因型外,离子吸收动力学参数平常受到介质影响;介介温度、介共铁水平无间思苗的铁吸收速率与铁吸收总量。在相同条件下,小金海棠比山定子有罗大的铁吸收速率和铁上总量。与山定子相比,小海棠对铁 的亲和力较高,吸收能力较强,     

水分胁迫下苹果实生苗茉莉酸的积累及其与水分的关系

 用气相色谱法测定苹果抗旱种新疆野苹果[Malus sieversii (Ledb) Roem. ]和较不抗旱种平邑甜茶[M. hupehensis (Pamp) Rehd.]根系、叶片和木质部汁液茉莉酸(jasmonic acid , JA) 对快速和缓慢水分胁迫的反应。结果表明, 两个种对水分胁迫反应灵敏。水分胁迫下两个种叶片气孔阻力与根系、木质部汁液中JA 含量呈显著对数相关关系, 而与叶片中JA 含量相关不显著。