马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B基因原核表达产物单抗的制备

用大肠杆菌BL21表达了马立克氏病病毒（MDV）强毒GA株的囊膜糖蛋白B（gB)基因，通过SDS－聚丙烯酰胺凝胶龟泳（SDS－PAGE）分离表达蛋白条带，切下并碾碎后作为免疫原制备单克隆抗体。通过酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光试验（IFA），得到1株GA株阳性的单克隆抗体杂交瘤细胞株7C8。该单抗腹水的ELISA效价为1：2^12，IFA效价为1：800，与MDV不同致病型毒株CVI988、GA、RB1B、MD11、648A株感染的鸡胚成纤维细胞（CEF）均呈IFA阳性。1：100稀释时与GA感染的CEF在斑点酶联免疫吸附试验（dot-ELISA)中呈阳性。     

鸡抗病毒Mx基因的克隆与序列分析

用干扰素诱导剂poly（I）／（C）诱导鸡胚成纤维细胞,提取细胞总RNA,采用RT—PCR方法扩增了北京白鸡Mx基因全长编码区序列。序列分析表明：该基因编码区长2118bp,编码705个氨基酸残基,其第631位为天冬酰胺,理论上推测具有抗病毒活性。通过与GenBank中已登录的7个品系鸡Mx基因进行核苷酸系统进化树分析,结果显示,北京白鸡Mx基因与WL—N品系鸡Mx基因的亲缘关系最近。北京白鸡Mx基因序列与其他动物Mx基因序列的比较结果显示,核苷酸同源性为49．5％～76．8％,氨基酸同源性为44．1％～61．6％。据此可以推断：克隆的Mx基因具有抗病毒活性的分子特征和特征性功能结构,不同种属动物Mx基因的同源性与其亲缘关系呈正相关。     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白I原核表达产物单克隆抗体的制备

以重组质粒 p GEX-MDg I在大肠杆菌 BL2 1中表达马立克氏病病毒 (MDV)特超强毒 64 8A株的囊膜糖蛋白 I(g I)完整基因 ,通过 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离相应的蛋白条带 ,切下并碾碎后作为免疫原免疫小鼠 ,用以制备针对MDV64 8A g I糖蛋白的杂交瘤细胞株。以 MDV感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)为检测抗原 ,用间接免疫荧光抗体反应(IFA)筛选到 9株杂交瘤细胞株 ,选其中 3株 2 H7、6F1 0、2 H3制备腹水 ,其 IFA效价均达到 1∶ 1 50 0以上 ;与 I型 MDV不同致病型的毒株 CVI988/ Rispens、GA、RB1 B、Md1 1株感染的 CEF测 IFA,均呈现特异性荧光 ,但反应强度不同。腹水经 PBS稀释后与 MDV感染的 CEF做斑点酶联免疫吸附试验 ,呈特异性显色。对 MDV感染的 CEF裂解物做 West-ern-blotting,可检测出 1条特异性条带     

3株鸭肝炎病毒Ⅰ型结构基因VP1的克隆及序列分析

通过RT-PCR方法扩增鸭肝炎病毒DHV-1:161/79/V、YH、HN株的VP1基因的核苷酸序列.系统发育分析表明,3株病毒与已发表的DHV-1结构基因VP1核苷酸和氨基酸的同源性分别为92.7%～96.9%和95.4%～96.6%,与DHV-1变异株核苷酸和氨基酸序列的相似性均分别低于75%和88%,表明3株病毒属于DHV-1,与变异株是不同的血清型.强毒DHV-1:161/79/V的VP1蛋白第49和第183位氨基酸为T和H,弱毒DHV-1:YH、HN为S和Q,推测这2处位点的改变可能与病毒的强弱有关;DHV-1和其变异株的VP1蛋白均没有保守的RGD序列;变异株N-DHV:90D、04G在第50和51位比DHV-1多2个氨基酸(Q和D),在第147和185位各缺失1个氨基酸(E和L),而在变异株DHV:AP-03337、AP-04009、AP-04114、AP-04203的第145和146位比DHV-1多了2个氨基酸(G、G);不同血清型的鸭肝炎病毒在46-64位、95-149位、180-223位抗原指数差别较大,推测这些位点的改变可能影响病毒的生物学特性.     

鸡马立克氏病病毒毒力变异及疫苗的发展状况

鸡马立克氏病 (Mark's Disease,MD)最早由匈牙利病理学家 Marek于 1907年报道,描述为外周神经和脊神经根单核细胞浸润造成的瘫痪。 1967年分离到病原,为严格细胞结合性的γ－疱疹病毒,命名为马立克氏病病毒 (MDV),鸡是最重要的自然感染宿主。随着病毒毒力增加 ,引起的病理变化也不同：经典株即强毒株引起鸡的淋巴增生性疾病,表现为内脏器官、肌肉和外周神经广泛的淋巴增生性浸润;超强毒可以引起早期死亡综合症 (急性溶细胞感染所致 )及更高比例的内脏肿瘤发生,而特超强毒则造成更严重的淋巴器官萎缩和组织病理学变化。 　　根据…     

番鸭细小病毒与鹅细小病毒PCR鉴别诊断方法的建立

根据番鸭细小病毒（MDPV）和鹅细小病毒（GPV）基因组的非同源序列各设计了1对引物MDPVF1／R1和GPVF1／R1，建立了一种PCR方法，用该PCR方法分别对GPV、MDPV、鸭瘟病毒（DPV）、鸭肝炎病毒（DHV）、鸭呼肠孤病毒（DRV）、犬细小病毒（CPV）和猫泛白细胞减少症病毒（FPLV）的病毒培养物及其核酸进行扩增。结果，引物MDPVF1／R1仅特异性扩增出MDPV的900bp核酸片段，引物GPVF1／R1仅特异性扩增出GPV的465bp核酸片段。表明，建立的PCR方法可用于GPV和MDPV的鉴别诊断。     

犬瘟热病毒F1蛋白的原核表达及其抗原性分析

为表达和鉴定犬瘟热病毒(CDV)F1蛋白,本研究通过RT-PCR扩增了CDV HLJ2-07株F1基因,并将其克隆至pET-30a(+)载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下获得大小约为47.5ku以包涵体形式表达的F1重组蛋白,重组蛋白占菌体总蛋白31.5%。Western blot分析表明,表达产物能够被兔抗CDV阳性血清所识别,具有良好的抗原性。间接ELISA检测表明,重组蛋白与犬细小病毒、犬副流感病毒、犬传染性肝炎病毒及犬波特氏杆菌等疾病的阳性血清无交叉反应。本研究为进一步建立检测CDV抗体间接ELISA方法及研制F1蛋白亚单位疫苗奠定了基础。     

抗犬瘟热病毒重组核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

以纯化的重组犬瘟热病毒(CDV)N蛋白免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术获得两株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为A_4C_6C_(12)和A_5B_8H_7。间接ELISA检测腹水效价分别为1:10~6、1:10~5;亚类鉴定结果分别为IgG2a、IgG2b,轻链均为κ型;Western blot和ELISA分析结果显示2株单克隆抗体均能与重组N蛋白和CDV发生反应,而与犬细小病毒及犬腺病毒等无交叉反应;ELISA叠加试验的增值结果表明两株单克隆抗体识别的抗原位点不同。特异性抗CDV-rN的单克隆抗体的获得,为进一步用于临床诊断研究奠定了基础。     

马立克氏病病毒广西株G2囊膜糖蛋白gI基因的克隆和表达

根据马立克氏病病毒（MDV）强毒株GA的基因序列，设计并合成了1对引物，以强毒株G2基因组DNA为模板，通过PCR技术，扩增其囊膜糖蛋白gI基因阅读（ORF）中，除去其N－端编码水区165个碱基对（bps)以外的部分，将PCR产物按正确的阅读框架定向克隆到表性载体pGEX-6P-1中谷胱甘肽转移酶（GST）基因的下游，将重组质粒转化入大肠杆菌BL21株，在1.0mmol/LIPTG浓度和30℃的条件下诱导，gI-GST基因融合蛋白获了理想的表达，经聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western-blotting试验，验证其表达的融合蛋白产物大小为预期的63000，将表达产物回收后免疫小鼠，所得抗血清可与MDV感染的鸡胚成纤维细胞（CEF）在免疫光试验（FA）中，呈细胞膜阳性染色，试验结果表明，在大肠杆菌中表达的G2株MDVgI基因的融合蛋白至少保留了天然蛋白的部分抗原性。