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圆环病毒(circovirus)是近年来引起广泛重视的新病毒之一,感染宿主包括植物、动物和人.猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)主要侵犯机体免疫系统,临床上常呈并发或继发感染,使病情加重,以至死亡,造成严重的经济损失.近年来,国外对PCV已做了大量的研究工作,我国也有猪群感染PCV报道,并造成严重损失.下面就PCV的研究进展做一综述. 相似文献
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马立克氏病病毒648株囊膜糖蛋白gI基因的克隆和表达的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
根据马立克氏病病毒(MDV)强毒株GA的基因序列,设计和合成一对引物,以特超强毒648株基因组DNA为模板,通过PCR技术,扩增其囊膜糖蛋白gI基因阅读框(ORF)中,除去其N-端编码疏水区的165个碱基对(bp)以外的蓁部分;将PCR产物按正确的阅读框架定向克隆到表性载体pGEX-6P-1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游,将重组质粒转化进大肠杆菌BL21株,在1.0mMIPTG浓度和30℃的条件下诱导,gI-GST基因融合蛋白获得了理想的表达;经聚丙烯酰胺凝脉电泳,West-ern-blot试验,通信班下其表达的融合蛋白产物大小为预期的63KD。将表达产物回收后免疫小鼠,所得抗血清可与MDV感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)在免疫荧光试验(FA)中呈细胞膜阳性染色。试验结果表明,在大肠杆菌中表达的648株MDVgI基因的融合蛋白产物保留了天然蛋白的某些抗原性。 相似文献
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犬瘟热重组N蛋白抗原间接ELISA方法的建立及应用 总被引:2,自引:0,他引:2
本研究以纯化的犬瘟热病毒(CDV)重组N蛋白为诊断抗原,建立了犬瘟热病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为rN-CDVELISA。确定最佳抗原包被量为0.167μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1:100,其作用时间为45min,羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1:2000,作用时间为60min,S/P值≥0.208者判为阳性,S/P值≤0.16者判为阴性,介于两者之间者判为可疑。该抗原不与犬细小病毒、犬传染性肝炎、犬副粘病毒、犬波特氏杆菌等4种疾病的阳性血清反应,具有良好的特异性;批内、批间重复试验,变异系数均小于15%,具有良好的重复性;检测血清样品96份,与进口诊断试剂盒的符合率为97.1%。本研究为现地免疫犬群抗体检测和进行CDV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。 相似文献
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禽白血病病毒斑点杂交检测方法的建立 总被引:3,自引:0,他引:3
为建立禽白血病病毒(ALV)斑点杂交检测方法,本研究采用RT-PCR技术扩增ALV群特异性p27抗原基因的部分片段,并以纯化的p27PCR产物为模板,合成地高辛标记探针,以此建立了ALV的斑点杂交检测方法。用该方法对4份疑似感染ALV的现地病鸡组织样品和18枚鸡胚进行检测,结果表明所有样品均为阳性,而且与PCR检测结果的符合率达到100%。该方法具有良好的特异性和敏感性,适应于ALV临床大规模检测。 相似文献
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根据已发表的Pm70株的序列(GenBank登录号:AE004439)设计了两对引物,用PCR方法扩增了鸭多杀性巴氏杆菌标准株C48-102的外膜蛋白基因A(ompA),扩增的片段为1062bp。将测序结果与GenBank中多杀性巴氏杆菌P52、PM70、T931317、T94289的ompA序列比对结果表明,核苷酸水平上同源性为89.0%~98.9%;在氨基酸水平上同源性为90.7%~99.2%。全ompA序列在大肠杆菌中干扰蛋白的正常表达,因此截断ompA蛋白的信号肽序列,将去信号肽的ompA基因插入到pPRO-EX-Htb载体上,构建了原核表达载体Htb-ompA,转化BL21,并诱导表达,SDS-PAGE结果表明,表达蛋白约为35kDa,与预期的分子量大小相符。Western-blot结果表明,表达的蛋白具有良好的抗原活性。本研究重组蛋白ompA的获得,为敲除ompA基因多杀性巴氏杆菌突变株的血清学检测奠定基础。 相似文献
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仙台病毒F基因在昆虫/杆状病毒系统中的表达及抗原性分析 总被引:2,自引:0,他引:2
为真核表达仙台病毒(SeV)融合蛋白(F)基因,本研究根据GenBank登录的SeV F基因序列设计合成一对特异性引物,以pMD18-T-F阳性重组质粒为模板扩增F基因,并将其克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBac HTa中,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,转化感受态细胞DH10Bac,提取重组杆粒rBacmid-F,经PCR鉴定正确将rBacmid-F转染Sf9细胞,连续传代后,细胞病变明显。经SDS-PAGE分析,成功表达了相对分子量为65ku左右的F蛋白,western blot和ELISA分析表明重组F蛋白具有良好的抗原性。 相似文献
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为研究具有不同抗性的马立克氏病(MD)疫苗免疫鸡羽髓后,疫苗毒和超强毒(vvMDV)的复制动力学及两种病毒载量的相关性,本实验对经火鸡疱疹病毒(HVT)FC126疫苗株免疫1周后(1wpv),攻击vvMDV Md5株G3系和G7系鸡羽髓中的HVT和vvMDV载量进行定量检测及相关性分析。结果显示,G3系和G7系鸡群羽髓中的vvMDV载量始终高于疫苗毒。其中,G3系鸡群在免疫和攻毒后的相同时间内,疫苗毒与vvMDV载量的消长规律基本一致,均在感染后第4周(4wpi)出现峰值,6wpi降至最低水平,两种病毒载量多表现为正相关,6wpv~8wpv为持续显著正相关;G7系的两种病毒的复制动力学存在差异:vvMDV载量从攻毒后第6周呈增长趋势,而疫苗毒在4wpv出现峰值后迅速下降,两种病毒载量多表现为负相关。本研究表明,免疫遗传基因在对病毒的抵抗中起主要作用,为MDV的感染机制和疫苗免疫机理的研究提供实验依据。 相似文献
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3株鸭肝炎病毒Ⅰ型结构基因VP1的克隆及序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
通过RT-PCR方法扩增鸭肝炎病毒DHV-1:161/79/V、YH、HN株的VP1基因的核苷酸序列.系统发育分析表明,3株病毒与已发表的DHV-1结构基因VP1核苷酸和氨基酸的同源性分别为92.7%~96.9%和95.4%~96.6%,与DHV-1变异株核苷酸和氨基酸序列的相似性均分别低于75%和88%,表明3株病毒属于DHV-1,与变异株是不同的血清型.强毒DHV-1:161/79/V的VP1蛋白第49和第183位氨基酸为T和H,弱毒DHV-1:YH、HN为S和Q,推测这2处位点的改变可能与病毒的强弱有关;DHV-1和其变异株的VP1蛋白均没有保守的RGD序列;变异株N-DHV:90D、04G在第50和51位比DHV-1多2个氨基酸(Q和D),在第147和185位各缺失1个氨基酸(E和L),而在变异株DHV:AP-03337、AP-04009、AP-04114、AP-04203的第145和146位比DHV-1多了2个氨基酸(G、G);不同血清型的鸭肝炎病毒在46-64位、95-149位、180-223位抗原指数差别较大,推测这些位点的改变可能影响病毒的生物学特性. 相似文献