葡萄VvGW2基因的克隆及表达

为了从葡萄品种美人指中克隆VvGW2基因,并对其结构特征及表达模式进行分析.在NCBI中查找与水稻粒形基因OsGW2同源性最高的葡萄序列,根据葡萄的GW2基因序列设计特异引物.采用改良CTAB法提取美人指花序中总RNA,运用RT-PCR技术进行克隆.利用NCBI数据库中的BLASTn和BLASTp程序进行相似性分析;利用Bioxm2.6推测分析蛋白质分子量和等电点;根据NCBI中Conserved Domains程序进行蛋白质保守域结构预测;用ExPaSy提供的在线SOPMA程序进行蛋白质二级结构预测;利用实时荧光定量RT-PCR研究该基因表达模式.结果显示,从美人指中克隆得到1个GW2基因同源序列,命名为VvGW2基因.VvGW2基因开放阅读框长度为1 272 bp,共编码423个氨基酸,预测蛋白质分子量为46 960,理论等电点为4.68.该基因编码的氨基酸具有GW2蛋白质保守的环指结构域,该环指蛋白质为C5HC2类型.与GenBank中登录的其他植物GW2蛋白质序列相似性为47％ ～53％.根据VvGW2基因所编码的氨基酸序列构建系统进化树,结果显示,葡萄与可可聚为一类.实时荧光定量RT-PCR分析结果显示,VvGW2基因在美人指花或果实的各时期均有表达,其中在开花期基因表达量最高.不同葡萄品种中,VvGW2基因的表达量存在差异,在指形葡萄品种美人指的表达量最高,在圆形葡萄品种中的表达量很低.表明VvGW2基因在不同时期和不同品种中的表达量差异可能与葡萄果实形状相关.     

4种夏黑葡萄花穗整形方法的比较

以夏黑葡萄为试验材料,开花前1周分别采用留1穗、留2穗、留穗尖、留副穗4种花穗整形方法并统计每种方法修剪10个花穗所用的工作时间。分别测定4种方法的成熟果实纵径、横径、果形指数、单果质量、可溶性固形物含量、可滴定酸含量及L、a、b、C、h等果皮着色指标,从4种花穗整形方法对果实品质的影响、工作效率、操作难易等角度分析比较4种整穗方法,以期为生产实践提供较佳方案。综合比较可知,留穗尖为夏黑葡萄最适宜的花穗整形方法,生产上推荐采用以“留穗尖为主,留1穗、2穗为辅”的花穗整形方法,在提高工作效率的同时可有效提高果实品质。     

葡萄栽培中主要架式、树形及南方地区发展趋势

当前我国葡萄生产中常用架式有柱架、篱架和棚架等,而常用整形方式有扇形、龙干形、单干双臂形、"干"字形、"高、宽、垂"整形("T"形)、"FI"形、"H"形、"一"字形和"V"形等。不同架式和整形方式,根据不同立地条件和生产要求,各地都有存在。对于葡萄栽培冬季非埋土地区,"H"形或"一"字形为基本树形的双"H"("王"字形)、"W"形以及改良"一"字形等树形将会逐步推广应用,与之相配套的极短梢修剪技术也会逐渐得到研究和应用。     

巨峰葡萄查尔酮合成酶基因4的克隆及表达特性的RT-PCR分析

克隆了葡萄查尔酮合成酶基因4(CHS4),并采用半定量RT-PCR技术,以actin为内参,分析了CHS4在巨峰葡萄果实发育阶段不同组织的表达。对CHS4的序列分析表明:CHS4含有1个内含子,2个外显子;与CHS1、CHS2、CHS3在核苷酸水平的同源性分别为99.3%、92.6%和76.0%。半定量RT-PCR分析结果表明:CHS4在果皮、果肉、种子、叶片和根系中均有表达,在花后30d的果皮中表达强烈,随后迅速降低,到花后70d表达又增强;CHS4在花后30～45d的果肉中表达强烈,随后迅速降低;在花后45d的种子中也表达强烈,随果实发育,其表达逐渐下降。高温处理抑制CHS4在巨峰葡萄幼叶中的表达,但诱导CHS4在幼根的表达。     

超声波辅助对农杆菌介导“美人指”葡萄遗传转化中GUS瞬时表达的影响

通过超声波辅助农杆菌介导法,优化"美人指"葡萄遗传转化体系。利用GUS瞬时表达的方法研究了不同功率、时间条件下的超声波处理,外植体类型以及AS浓度对"美人指"葡萄遗传转化效率的影响。结果表明:外植体茎段在含75mg/L AS农杆菌悬浮液中侵染4 min,并在此期间,用功率为90 W的超声波处理14 s,获得最佳GUS瞬时表达率42.8%。     

果树基因转化技术的选用和转基因植株的鉴定与性状分析

植物基因工程为果树育种开辟了一条新途径,在果树重要性状遗传改良方面具有重要意义。果树转基因是一个复杂而长期的工作,包括从对外源基因功能的全面认识、高效表达载体的构建、基因转化、以及转基因植株的鉴定与性状观测等多个重要环节。应该说,每一个环节甚至每一实验步骤都需严格把握。迄今,鉴于已经有大量果树再生体系成功建立的报道,笔者在总结实际研究经验的基础上,结合文献的报道,有针对性地对果树基因转化技术和转基因植株的鉴定与性状分析进行简要介绍,为果树基因转化技术的选用,以及进行高效转基因植株的鉴定与性状分析提供一定的参考。     

GA3和CPPU对钟山红葡萄果实品质的影响

本试验以钟山红葡萄为材料,于盛花期使用不同浓度（12.5mg/L,25mg/L,50mg/L）的GA3处理,结合盛花后11天分别用25mg/L GA3 2mg/L CPPU和25mg/L GA3 5mg/L CPPU处理,研究了不同组合处理对钟山红葡萄果实品质的影响。结果表明,各处理都显著提高了果实的品质,盛花期25mg/L GA3,花后11天用25mg/L GA3 2mg/L CPPU处理的效果对果实大小及果形指数影响最大,纵、横径,单果重都显著高于对照未处理且达到了最大值。盛花期25mg/L GA3 ,花后11天用25mg/L GA3 5mg/L CPPU处理的效果对果实风味影响最大,可溶性固形物达到最大。从GA3和CPPU对钟山红葡萄处理后的综合性状看来,以盛花期25mg/L GA3且盛花后11d 用25 mg/L GA3 5mg/L CPPU的处理效果较适宜。     

CPPU对夏黑葡萄果实生长的影响

以夏黑葡萄为试材,于盛花期和花后2周分别使用0、2、5、10 mg/L CPPU结合50 mg/L GA3 的混合溶液处理,研究不同时期不同浓度的CPPU对夏黑葡萄果实的生长发育的影响。结果表明：盛花期添加10mg/L CPPU,花后2周添加2mg/L CPPU对夏黑葡萄膨大的效果最显著,其单粒重为对照的141.78%;当2次处理的CPPU总浓度达到15mg/L及以上时,对夏黑葡萄果实膨大的效果减弱。在葡萄果实生长发育过程中,CPPU能有效延长夏黑葡萄果实的快速生长期。此外,使用不同浓度CPPU处理均降低了可溶性固形物含量,升高了可滴定酸含量。     

一种简便的果树夏秋梢硅胶干燥叶DNA提取方法

以硅胶干燥的杨梅秋梢叶片为试材,对基因组DNA提取方法进行了研究。通过对涡旋、16℃离心、预磨样等方面的改进,提取的杨梅DNA含蛋白质、RNA、多糖等杂质较少,A260/A280在1.72~1.92之间,完全能满足酶切、PCR等试验的要求。同时对梅、枇杷、桃、樱桃、杏等果树较老的叶片、秋梢、鲜叶等样品进行了通用性检验,同样高效快速地获得了高质量的DNA。     

不同葡萄砧木对矢富罗莎葡萄嫁接苗光合作用的影响

在避雨条件下,以盆栽试验观察不同砧木(巨峰、1202、5BB、110R、99R、华佳8号、8B和SO4)对矢富罗莎葡萄叶片光合日变化的影响。结果表明,不同葡萄砧木矢富罗莎嫁接苗叶片净光合速率(Pn)的日变化基本呈双峰型曲线。叶片净光合速率日变化存在差异,99R、华佳8号和1202砧穗组合嫁接苗叶片的净光合速率(Pn)明显高于其他组合,最高峰值(11:00时)分别高出对照128.8%、106.0%和77.3%;叶片气孔导度(Gs)值1202、110R、99R和华佳8号组合较高,9:00时分别达到对照的8.5、8.0、7.5和6.5倍;99R、华佳8号、110R和1202组合的叶片蒸腾速率(Tr)显著高于其他组合和对照,巨峰和8B组合居中。