鸡恒定链功能片段跨物种增强小鼠对新城疫F2抗原免疫作用的研究

【目的】研究恒定链(Invariant chain,Ii)功能片段作为载体的跨物种免疫增强作用及其潜在机制。【方法】构建基于鸡Ii功能片段与新城疫病毒抗原表位F2的嵌合体(Ii-F2、Cyt/Tm/Ii-key/F2/AP、Tm/Ii-key/F2/AP、Ii-key/F2/AP、Ii-key/F2),将其定向克隆至原核表达载体pET-32a中,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)并用IPTG诱导表达,嵌合体融合蛋白纯化后免疫小鼠,用ELISA法测定血清抗体效价。同时,分别构建含鸡Ii和小鼠MHCⅡ类分子基因的真核表达载体,并将其共转染COS7细胞,通过激光共聚焦显微镜观察其在细胞内的共定位。【结果】用F2与Ii-key等Ii功能片段连接的融合蛋白免疫的试验组小鼠的抗体效价,较单独用F2抗原肽免疫的对照组小鼠产生的抗体效价提高了1.5~3倍。显微观察发现,鸡Ii和小鼠MHCⅡ分子在细胞内可以共定位。【结论】Ii具有跨越物种限制增强免疫的作用。     

猪促炎细胞因子多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立及应用定量检测猪促炎细胞因子mRNA表达水平的方法,从分子水平研究脑心肌炎病毒(EMCV)的致病机制,分别构建含有猪促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α以及管家基因β-actin基因片段的重组质粒标准品,建立了检测IL-1β/β-actin、IL-6/β-actin、TNF-α/β-actin的多重TaqMan real-time PCR检测方法。标准曲线的相关系数均达到0.998以上;初始模板的检出下限均达到10拷贝/μL;只有以目标cDNA为模板,并加入特异性引物和探针的反应才能检测到荧光信号;组内与组间的变异系数均小于2%。应用所建立的检测方法,对猪源EMCV GXLC株感染仔猪心肌中IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA的表达水平进行检测。结果表明,所建立的多重TaqMan real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于猪IL-1β、IL-6、TNF-α基因的检测及定量分析。     

枯草芽孢杆菌草酸脱羧酶转化拟南芥研究初报

多种真菌在致病过程中会分泌草酸，这些草酸产生菌寄主范围广，可以导致上百种植物病害，造成世界范围农作物的严重减产。草酸可以通过氧化与脱羧两种途径降解。该研究克隆了枯草芽孢杆菌的草酸脱羧酶基因Yvrk，并构建其植物表达载体，通过农杆菌浸花转化拟南芥，收获种子，用除草剂Basta筛选获得15株转基因植株，对其中的11个株系分别离体接种菌核病菌，24h后量病斑，发现有6株转基因植株的病斑显著小于野生型。PCR验证发现大部分转基因植株确有Yvrk的存在，实验结果说明草酸脱羧酶基因确能一定程度上缓解真菌病害。     

浅析韩国的农产品贸易影响因素以及对我国农产品贸易的发展启示

中韩两国隔海相望,地形地貌接近,农业发展模式较为相似。因此从韩国农产品贸易出发,研究影响韩国农产品贸易因素对于我国农产品贸易发展具有重要意义。有利于促使我国农产品贸易更加重视提高农业生产效率和国际竞争力、增加农民收入、慎重贸易保护以及加强宣传引导等因素,必将会促进我国农产品贸易健康有序发展。     

高致病性FAdV-4分离株fiber2结构蛋白表达 和细胞内定位的分析

初步鉴定一株高致病性4型禽腺病毒（fowl adenovirus serotype 4, FAdV-4）并研究其生物学特性。应用PCR、动物实验、免疫印迹技术和激光共聚焦鉴定其致病性和传播途径,分析fiber2蛋白的表达特性及其在细胞内定位。结果显示,所分离的毒株为FAdV-4型强毒株,对鸡的致死率达100%,对鸭无明显致病性;病毒可以经过滴鼻点眼感染而非经过口腔感染;PCR扩增的fiber2基因的大小为1 440 bp,所构建的含fiber2基因的重组真核和原核表达质粒均可正确表达;共聚焦结果显示,fiber2蛋白主要定位于细胞核。结果可为进一步研究安徽省地区高致病性禽腺病毒的感染和疫苗制备提供基础。     

兽医实验室质量控制方法

从内部质量控制和外部质量控制2个方面介绍了兽医实验室质量控制,并从实验室人员、仪器设备与计量器具、实验材料、实验方法、环境条件的质量控制等方面具体阐述了内部质量控制的内容,以期为做好兽医实验室质量控制以确保检测结果的公正性、准确性提供参考。     

分光光度法测定苹果中硝酸盐含量的不确定度评定

[目的]建立分光光度法测定水果中硝酸盐的不确定度评定方法。[方法]通过对分光光度法测定苹果中硝酸盐含量的过程的研究,确定了测定结果的不确定度,建立了不确定度的数学模型,对各不确定度分量进行了合成和扩展,最终建立了苹果中硝酸盐含量的不确定度评定方法。[结果]影响苹果中硝酸盐含量测量结果的不确定因素主要包括:称量不确定度、体积不确定度、曲线拟合不确定度、测量重复性引起的不确定度。苹果中硝酸盐含量不确定度报告为:(70.72±7.07)mg/kg,包含因子k=2。[结论]研究可为准确测定水果中硝酸盐含量提供科学依据和理论支撑。     

鸡Rab7b在细胞晚期内吞体定位和结合恒定链的分子特征

Rab蛋白是介导胞内活性蛋白转运的分子家族。恒定链（invariant chain，Ii）具有协助抗原肽转运、B细胞成熟和作为细胞因子的受体等免疫学功能。前期研究发现，鸡（Gallus gallus）Rab5a在细胞早期内吞体中与Ii结合，但不清楚是否还有其他转运蛋白有该特性。基于Rab7b分子定位于晚期内吞体，并与胞内分子转运相关，本研究探索了鸡Rab7b与Ii结合的分子结构特征。首先，用自行设计的引物扩增了鸡和小鼠（Mus musculus）Rab7b基因，并进行了氨基酸同源性比对分析；构建了含鸡Rab7b及其67位氨基酸突变体Rab7bQ67L的原核和真核重组质粒。其次，将含红色荧光蛋白和目的基因的重组质粒转染鼠巨噬细胞系Raw264.7，培养后用绿色荧光素（FITC）标记的鼠抗晚期内吞体蛋白1（LAMP1）抗体染色，观察目的蛋白在内吞体的定位。进一步将鸡Rab7b和Rab7bQ67L分别与Ii共转染293T细胞，观察它们与Ii的共定位。最后用拉下法和免疫印迹检测鸡Rab7b及Rab7bQ67L与Ii的结合。结果表明，所克隆获得的鸡Rab7b基因与预期大小一致，其开放阅读框为624 bp，编码208个氨基酸。鸡和鼠的Rab7b蛋白质结构相似性为74%。尽管鸡Rab7b和突变体Rab7bQ67L均能结合Ii，但只有Rab7b可以定位于晚期内吞体，而突变体却改变了该定位特性。综上所述，鸡Rab7b与Ii不仅在晚期内吞体共定位，而且还能互相结合；鸡Rab7b的第67位氨基酸影响其在细胞内定位而不影响与Ii结合。综上表明，Rab分子参与了Ii在细胞内细胞器的转运，为进一步研究Ii在细胞内的转运机制提供了新的途径。     

鸡MHC Ⅰ类分子克隆及其二聚体融合

为进一步研究MHCI类分子作用机制,以及为制备MHCI基因工程疫苗奠定基础,克隆鸡MHCⅠ基因,并构建MHC Ⅰβ2m-a融合基因进行原核表达.运用RT-PCR方法,克隆鸡MHC Ⅰa和β2m链基因,并通过编码连接肽(Gly4 Ser).的基因序列将两者头尾相连,构建了pET-32a-MHC Ⅰβ2m-a重组质粒,经PCR扩增、双酶切和测序鉴定后,重组质粒在E.coliBL2 Ⅰ细胞进行IPTG诱导表达融合蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting方法分别检测表达产物.结果表明,成功克隆了MHCⅠa和β2m链基因,长度分别为1014和300 by;构建的融合基因MHCⅠβ2m-a长度为1194 by,经原核表达,融合蛋白分子质量约为62.0 ku,能与相应的抗体结合,具有一定的免疫学活性.     

储藏年限对棉花种子发芽率的影响

2005-2006年对棉花种子在适宜的储藏条件下的发芽率与储藏年限的关系进行了研究,旨在给棉花种子管理部门、棉花种子代储单位提供决策依据,也有助于棉花种子经营企业安全贮藏种子及充分利用种子资源。