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本研究旨在探明鸡恒定链(invariant chain,Ii)与内吞体转运蛋白Rab5a和Rab7b结合的结构域和在细胞内共定位的特征。首先,用PCR和基因突变技术将Ii胞浆区与跨膜区[Ii(Cyt-Tra)]、Ii CLIP (class Ⅱ-associated invariant chain peptide)-三聚体区[Ii(CLIP-TRIM)]和Ii突变体[Ii(M81-87aa)、Ii(M91-99aa)和Ii(M81-99aa)]分别插入pET-32a和pEGFP-C1构建相应的原核和真核重组质粒。其次,将构建的含有绿色荧光蛋白的重组质粒与实验室保存的含有红色荧光Rab5a和Rab7b的重组质粒共转染至人胚胎肾细胞系293 T,观察它们的共定位。将构建的原核重组质粒进行表达和纯化,最后用拉下法和免疫印迹检测Ii与Rab5a和Rab7b的结合域。结果表明,成功构建Ii结构域及Ii突变体的重组质粒。Ii(Cyt-Tra)及Ii突变体均能与Rab5a和Rab7b在细胞内共定位,而Ii(CLIP-TRIM)与空载体却不能。Ii的胞浆区和跨膜区是与Rab5a和Rab7b结合的功能结构域,而不是CLIP与三聚体区。综上所述,鸡Ii与Rab5a和Rab7b共定位和结合的区域是其胞浆区和跨膜区,而不是内质网腔区。这些结果提示Rab分子参与了Ii在胞内细胞器的转运机制,为进一步研究Ii及其载体在细胞内的转运机制和功能提供了新的途径。 相似文献
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为探明鸡恒定链(invariant chain,Ii)的胞质区/跨膜区[Ii(Cyt/Tra)]作为载体是否可携带抗原肽在细胞内结合MHCⅡ类分子和进入转运途径的细胞器(内吞体),构建4个基因目的片段[Ii、Ii(Cyt/Tra)、F2(新城疫病毒F蛋白片段)和Ii(Cyt/Tra)/F2],分别将它们插入原核表达载体pET-32a和真核表达载体pmCherry-C1/N1中,构建8个重组质粒,再转入工程菌(E.coli)和人肾细胞系(293T),并应用拉下法(pull-down)检测目的蛋白与MHCⅡβ的结合,应用激光共聚焦确定它们在真核细胞与MHCⅡβ的共定位以及在内吞体的定位。结果表明,构建的重组质粒均能相应地原核或真核表达相应目的蛋白;Ii、Ii(Cyt/Tra)和Ii(Cyt/Tra)/F2不仅能够与MHCⅡβ结合,还能进入细胞内吞体;但是F2既不能与MHCⅡβ结合,也不能进入内吞体。Ii活性片段Cyt/Tra不仅本身具有结合MHCⅡβ的作用,而且还可以携带抗原肽与之结合并一起转入细胞内吞体而进入抗原递呈途径。该结果为进一步研究Ii载体转运抗原提供了理论依据。 相似文献
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沉默权制度的建立是保障人权和司法正义的要求。虽然各国的相关规定不尽相同,但很多国家已经在立法中确立了沉默权制度。简要阐释了沉默权的含义,并着重从中国国情出发,对沉默权制度在中国的确立进行了利弊两方面的分析,并在具体实施方面提出意见。 相似文献
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MHC分子多态性的起源、演变与抗病机理 总被引:1,自引:0,他引:1
主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)的概念源于解释异体间组织排斥和相容现象,现已拓展为与抗感染以及所有免疫反应相关的基因群。MHC是现有物种形成前就存在的原始基因。在进化过程中,MHC基因在物种之间和种群的个体之间都产生了明显差异。物种之间的差异主要是基因结构的不同,如有无基因框架和高度可塑性区、单一或重复基因座,还包括等位基因的排列方式以及不同数量的基因座和等位基因。亲缘关系较近的物种之间MHC基因结构相近,其差异表现在有无基因组单元重排方式和假基因。同种动物的MHC等位基因表现高度多态性序列。MHC基因是脊椎动物多态性最高的基因,其遗传基础是等位基因的点突变,即核苷酸发生替换。产生MHC多态性的原因主要是环境中病原压力。许多研究已经探明了与特定病原抗病相关的MHC的单倍型或MHC分子中的特定位点。MHC分子中肽结合区(Peptide binding region,PBR)是多态性最高的区段,PBR和抗原肽之间的亲和力与动物的抗病性/易感性关系最密切。分子生物学和生物信息学技术提供了研究MHC多态性,特别是探明MHC与抗原肽互相作用机理的理想工具。 相似文献
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应用PCR方法对广西公猪精液的伪狂犬病、圆环病毒2型和细小病毒混合感染情况的检测 总被引:1,自引:0,他引:1
应用PCR技术,2006年对广西11个猪场的公猪精液235头份进行猪伪狂犬病(PRV)、圆环病毒2型(PCV2)和猪细小病毒(PPV)混合感染情况的检测。结果,235份样品中PRV阳性率为5.53%,PCV2阳性率为17.02%,PPV阳性率为13.62%;PRV与PCV2、PPV均存在不同的混合感染现象。结果表明,我区公猪精液PRV、PCV2和PRV带毒情况比较严重,成为当前造成母猪繁殖障碍和规模场猪群发病的主要原因,这将为今后种猪场对PRV、PCV2和PRV的控制与净化工作提供了依据。 相似文献
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采用田间小区试验法开展机械水直播稻田随播随用芽前除草剂防除杂草效果及其对水稻的安全性评价研究。结果表明:4%双唑草腈SC 1 500 m L∕hm2 对千金子、异型莎草、耳基水苋菜和陌生菜防除效果优异,10%嘧草醚WP 450 g∕hm2 对稗草防除效果优异,两者混用能够有效扩大杀草谱,并可安全应用于机械水直播稻田。4%双唑草腈SC 1 500 m L∕hm2 +300 g∕L丙草胺EC 1 125 m L∕hm2 、4%双唑草腈SC 1 500 m L∕hm2 +10%嘧草醚WP 375 g∕hm2 于水稻机械直播后随播随用,对稗草、千金子、异型莎草、耳基水苋菜和陌生菜等稻田主要杂草的防效均可达96.7%—100%,且对水稻出苗率、株高和地上部鲜重均无不良影响,防除效果和安全性与常用对照药剂30%苄嘧·丙草胺OD 1 500 m L∕hm2 +专用安全剂375 m L∕hm2 无显著差异,生产上可进行交替使用。 相似文献
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为研究铁观音提取物和荆芥提取物联用在抗氧化方面的协同作用,采用水浸提法分别萃取铁观音和荆芥得其抗氧化活性成分。以芦丁为标准品检测两种提取物类黄酮含量,其中铁观音提取物为15.13 mg/g,荆芥提取物为0.87 mg/g;以没食子酸为标准品检测两种提取物的总酚含量,其中铁观音水提物为50.87μg/mg,荆芥水提物为47.40μg/mg。用2,2-二苯基-1-苦基肼(DPPH)和2,2'-二氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)法评估两种提取物联合应用时的抗氧化活性,结果表明,在较低浓度时,铁观音与荆芥提取物联用具有协同增强抗氧化作用。 相似文献