fat-1基因密码子优化及在家兔胎儿成纤维细胞中的初步表达

根据家兔基因密码子使用偏好性,对引自GenBank的秀丽隐杆线虫fat-1基因编码序列进行密码子优化,通过全基因合成的方法获得优化后的fat-1基因(命名为opfat-1);从秀丽隐杆线虫中RT-PCR扩增获得fat-1.将扩增的fat-1和合成的opfat-1基因分别构建到绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1中.采用脂质体LipofectamineTM转染法将fat-1和opfat-1基因转入家兔胎儿成纤维细胞(Rabbit fetal fibroblast cells,rFFCs)中.对比不同DNA和转染试剂用量以及细胞暴露于DNA、转染试剂中作用时间探讨影响rFFCs转染效率的参数,经过优化,最优的rFFCs转染条件为:LipofectamineTM用量2～3μl,DNA量0.8～1.0μg,LipofectamineTM与DNA、细胞共培养时间为8 h.通过绿色荧光标记和RT-PCR检测转染细胞中融合蛋白和目的基因的表达.密码子优化的opfat-1与fat-1相比,体外瞬时表达效率有极为显著的提高;G418抗性筛选获得转基因单克隆细胞,RT-PCR初步验证fat-1和opfat-1基因均在家兔胎儿成纤维细胞中稳定转录表达.     

鸡传染性鼻炎与喉气管炎混合感染的防治

山西省忻州市解原乡张某饲养了1000只蛋鸡，按正常程序免疫，进行了马立克、新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊等疫苗的免疫，但未免传染性喉气管炎疫苗。2004年11月28日100日龄鸡群突然发病，及时投服阿莫西林、环丙沙星等药物，不见疗效，病鸡增多，死亡率增高，每天死亡50只左右，3天共死亡150多只。畜主遂带病死鸡到我站动物门诊一部诊治。通过剖检、化验及综合性的诊断，确诊为传染性鼻炎与传染性喉气管炎混合感染，立即采取综合性防治措施，使疫情很快得到控制。     

高产棉田全程精细整枝六要

高产棉田全程精细整枝六要陈德令，袁洪法，周玲娣（江苏省邳州市岱山农技推广站江苏省邳州市农业局）高产棉田是“爬坡攻尖”棉田，其整枝技术要力求精细，力争一株一枝争“贡献”、一节一铃创高产。根据多年栽培经验，高产棉田的全程整枝技术，要做到如下六要。１．要保...     

抡救重危病马采取两输一纠抗休克疗法的体会

在临床实践中通过对休克发生、发展规律的认识,使用了两输(输液、输氧)、一纠(纠正酸中毒)的抗休克疗法取得了较好的治疗效果。急性重危病马病因各异、但其发病机制与病理基础相类似,都有全身循环衰竭,有效循环血量不足和微循环障碍。往     

1GQL-80型多功能旋耕起垄机的正确使用与维护

马铃薯、玉米全膜覆盖双垄集雨栽培技术,抗旱增产效果显著,增幅在38％以上,投入产出比1：2．03。但是,它需要经过起垄、覆膜、压土、点种等多道工序,工作量大,仅仅依靠人工畜力劳作方式难以达到全膜覆盖双垄集雨栽培技术的农艺要求,因此实现作业机械化是该技术大面积推广的难题。     

根艺品应突出自然美

自然美是根艺的灵魂。因而要求根艺作者在创作时,从选料到定型制作,都要尽力发现、挖掘、利用能表现自然美的木纹、疤结、根孔、断裂和颜色。以照片上这只鹿为例。当我从湖边烂泥中把已被水淹死的树根挖出时,发现几处树皮已自然脱落,     

山西省发展大果榛子需要注意的问题

近年来大果榛子在北方地区大量发展,山西省从2002年开始引进,生产中出现了一些问题。为了促进山西省榛子产业健康发展,结合10多年引种栽培经验,从温度、土壤、降水、品种、苗木等方面阐述了发展榛子应该注意的问题。     

早熟桃胚培养试验简报

<正> 早熟桃胚发育过程较短,积累的干物质少,播种后常常不出苗。为解决早熟桃的成苗问题,近年来国内不少单位进行了这方面的研究,但获得成苗的多是果实生育期在80天以上的品种,80天以下的早熟桃品种胚萌发和