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胸膜肺炎放线杆菌apxⅡCA基因的克隆、表达及ApxⅡ-ELISA检测方法的初步建立 总被引:4,自引:2,他引:4
根据国外已发表的胸膜肺炎放线杆菌 (APP) Apx 的基因序列设计了 1对引物 ,从我国 APP武汉株扩增出约3.5 kb的 apx CA基因。测序结果表明 ,该基因的大小与国外已报道的 1型和 9型 APP的 apx CA基因大小一致 ,同源性达 99%。将该基因连接到原核表达载体 p ET- 17b,构建了原核表达质粒 p ET- apx CA,并在大肠杆菌 BL 2 1(DE3)中表达出了大小约 10 5 0 0 0的 Apx 蛋白。提取包涵体蛋白作为抗原包被 EL ISA酶标板 ,对已知阳性、阴性血清和临床送检血清样品进行了 EL ISA检测 ,从而为最终建立 Apx - EL ISA检测方法奠定了基础 相似文献
94.
RT-PCR快速诊断禽流感 总被引:10,自引:0,他引:10
目前,禽流感检测方法较多,但均费时费力,且灵敏度不高.本研究立足于临床实际,选择A型流感病毒核蛋白(NP)基因序列保守区,设计了一对特异性引物,从临床病料中提取RNA,建立了一步法单管逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)快速诊断方法,该方法快速、灵敏,为RT-PCR用于禽流感的临床早期确诊和分子流行病学调查奠定了基础. 相似文献
95.
胸膜肺炎放线杆菌生物Ⅰ型标准抗血清的制备及初步临床应用 总被引:4,自引:0,他引:4
用十三种血清型的胸膜肺炎放线杆菌标准菌株免疫家兔,制备了标准抗血清,通过玻片凝集试验,琼脂扩散试验和免疫电泳试验,对抗血清的特异性、效价和保存期进行了监测,结果表明,制备的抗血清有较好的特异性,在4℃可以保存一个月、-20℃和、-80℃下保存一年无明显变化.用抗血清对从湖南,安徽,河南等地分离的胸膜肺炎菌株进行分型鉴定,分别为血清2,3,8型;而PCR检测均为阳性,说明抗血清可用于野生株的鉴定和流行病学调查. 相似文献
96.
应用在大肠杆菌中表达的猪2型圆环病毒ORF2蛋白建立一种ELISA诊断方法 总被引:13,自引:1,他引:13
根据GenBank中猪2型圆环病毒(PCV2)序列(AY035820),设计1对引物,并以包含PCV2全基因组的重组质粒pT-PCV为模板,扩增出含ORF2全基因的片段(709bp),回收PCR产物,将其克隆入pMDl8-T载体,获得重组质粒pTORF2,并对其进行序列测定。重组质粒经Bal I和Sal I双酶切,回收ORF2基因,将其插入pGEX-KG的Sma I和Sal I位点间,构建原核表达质粒pGEXORF2,阳性重组质粒转化E.coli BL21(DE3),进行原核表达。用此表达产物包被酶标板,建立EUISA诊断方法,并对临床676份送检血清进行了检测,结果表明其总阳性率为62.7%(424/676),仔猪阳性率为38.9%(74/190),肥猪阳性率为63.2%(84/133),母猪阳性率为74.6%(249/334),公猪阳性率为89.5%(17/19)。 相似文献
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1 发病情况 某场存栏生产母猪 5 93头 ,2 0 0 2年 4月份产仔 347头 ,其中弱仔 4头 ,占 1.2 % ,木乃伊 18头 ,占 6 .95 % ,死胎 5 1头 ,占 14 .7%。新生仔猪一周龄内死亡 5 7头 ,占 16 .4 % ,断奶 (30天 )前死亡 81头 ,占 2 3.3% ,共计损失 2 11头。育成率为 39.2 %。母猪返情率 2 0 %。 2 0 %左右育肥猪发病 ,死亡 8头。2 临床症状 新生仔猪表现为被毛粗乱、体表苍白 ,精神委靡不振、消瘦、喘气、腹泻 ,拉黄色水样粪便 ,体温升高 (40~ 4 1.5℃ )。少数仔猪出现转圈、发抖、四肢呈划水状等神经症状。育肥猪呈犬坐式、腹式呼吸、喘气、体温升高 (39~ 4 2℃ ) ,全身发绀 ,严重的病猪口吐白沫、四肢呈划水状、鸣叫 ,最终衰竭而死亡。3 病理变化 现场共剖检了 6头仔猪 ,主要表现为 :濒死仔猪脑膜充血、肿胀和出血。鼻黏膜肿胀、出血 ,有黏液流出 ;扁桃体肿大、充血直至溃疡。气管内有大量的渗出液。肺脏呈紫黑或暗红色变化、水肿、充血 ,表面出现大小不一的灰白色的化脓灶 ,横切面出现血样泡沫 ;胸腔积液 ,... 相似文献
98.
猪传染性胸膜肺炎新型亚单位菌苗对小鼠的效力研究 总被引:8,自引:2,他引:8
利用大肠杆菌表达猪胸膜肺炎放线杆菌的分泌毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ,提取表达产物包涵体,再加入我国流行的猪胸膜肺炎放线杆菌7型菌,和等量弗氏佐剂乳化后制成亚单位菌苗,免疫BALB/c小鼠,间隔2周加强免疫1次。每次免疫后采血检测毒素I、Ⅱ、Ⅲ的EuSA抗体和7型菌的血凝抗体,第2次免疫2周后用5LDso的猪胸膜肺炎放线杆菌1型、7型菌株进行攻毒。结果发现第2次免疫后抗体水平显著升高,用2种血清型进行攻毒后其保护力分别为83.3%和91.7%,从死亡小鼠的体内分离到了攻毒菌株,初步的动物试验表明此种新型亚单位菌苗对同型和异型的APP菌株具有较好的保护力,为进一步研制高效的亚单位菌苗打下基础。 相似文献
99.
抗猪圆环病毒Ⅱ型ORF2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 总被引:7,自引:2,他引:7
利用本室构建的质粒PGEX-ORF2特化BL21(DE3).经IPTG诱导表达.得到PCV2-ORF2的重组蛋白,经复性纯化后作为免疫原.采取常规免疫与体外脾脏免疫结合的方式免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0的骨髓瘤细胞融合.经间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选,获得了2株抗PCV2-ORF2蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞.分别命名为382F4和9C3132,其细胞培养上清效价分别为1:1024、1:512,小鼠暖水效价分别为1:204800、1:102400。ELISA结果显示,382F4和9C3D2仅与融合表达的PCV2-ORF2蛋白反应,而与PGEX-KG表达的蛋白、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不反应.说明此2株单抗特异性好。间接免疫荧光结果显示.382F4和9C3D2能与PCV2发生反应,而不与PCV1发生交叉反应.表明所获得的2株单抗是PCV2型特异性的。这2株单抗的获得为进一步研究PCV2-ORF2基因的功能.及建立准确快速的鉴别PCV1和PCV2的诊断方法提供了强有力的手段。 相似文献
100.