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22.
乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒的构建 总被引:7,自引:0,他引:7
设计1对引物从含有乙型脑炎病毒NS1基因的质粒pNS1上亚克隆NS1基因,将NS1基因插入到中间转移载体pUSK中,获得重组中间转移质粒pUSK—NS1。将pUSK—NS1与伪狂犬病毒Ea株TK/gG/LacZ^ 突变株基因组共转染真核细胞IBRS-2,通过空斑纯化得到了乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒株TK/gG^-/NS^ 1。经检测,重组病毒能表达具有生物活性的NS1蛋白。该重组病毒可作为猪乙型脑炎和伪狂犬病双价基因工程疫苗用毒株。 相似文献
23.
伪狂犬病病毒感染诱导和抑制细胞凋亡 总被引:3,自引:0,他引:3
用伪狂犬病病毒 (pseudorabies virus,PRV)鄂 A株感染非免疫健康初生仔猪 ,5 d后出现典型的伪狂犬病临床症状。从感染 PRV鄂 A株仔猪的肾脏、肝脏、扁桃体、胸腺、腹股沟淋巴结、颈部淋巴结等组织细胞提取的 DNA,经琼脂糖凝胶电泳呈现大小不等的 180~ 2 0 0 bp整倍数的寡核苷酸片段梯状条带 ,经 PCR方法鉴定为 PRV DNA。末端脱氧核苷转移酶原位标记 [terminal deoxynucleotidyl transferase(Td T) - conjugated d UTP nick end labelling,TUNEL ]法显示 ,部分凋亡的阳性细胞呈现染色质凝聚、细胞核固缩、染色质靠核膜边聚集等形态学变化 ,说明 PRV诱导细胞凋亡是造成急性感染时组织器官广泛损伤的重要原因之一 ;而 PRV感染的大脑、小脑、嗅球及脊髓等神经系统组织中未观察到上述细胞凋亡特征 ,说明 PRV可以抑制急性感染时神经细胞发生凋亡。本试验结果显示 ,在 PRV急性感染状态下 ,病毒诱导细胞凋亡是杀伤细胞的重要途径之一 ,同时这一过程又可通过神经系统病毒基因隐性感染及潜伏期的建立而受到抑制 相似文献
24.
副猪嗜血杆菌的分离培养和血清型鉴定 总被引:70,自引:0,他引:70
从全国十多个省市送检的疑似患多发浆膜炎与关节炎猪的病料中分离到32株细菌,进行了细菌形态观察、培养特性和生化特性鉴定;根据副猪嗜血杆菌16S rRNA序列设计引物进行PCR扩增,将822bp扩增片段连入T-载体后测序,再与GenBank(M75065)中的序列进行比对,表明其与国外副猪嗜血杆菌菌株16S rRNA序列的同源性为97%以上,确定为副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)。将其中的15株按Kieletein-Rapp-Gabriedson(KRG)琼脂扩散血清分型方法进行血清型鉴定,结果为血清5型3株、血清4型4株、血清13型2株、血清12型2株,另外有4株不能进行分型。该结果表明副猪嗜血杆菌在我国广泛存在。 相似文献
25.
本研究以纯化的多杀性巴氏杆菌毒素基因片段的原核表达产物作为抗原免疫小鼠制备单抗,并利用表达蛋白和多杀性巴氏杆菌毒素单抗酶结合物建立了竞争ELISA方法检测多杀性巴氏杆菌毒素抗体。经过研究确定抗原包被浓度为223ng/mL,待检血清最佳稀释度为1:2,酶标单抗工作浓度为1:3200,血清抑制率大于50%为阳性。应用单抗竞争ELISA和细胞毒性中和试验同时对82份血清进行猪多杀性巴氏杆菌毒素抗体检测,竞争ELISA的检出率为40.2%,细胞毒性中和试验检出率为36.6%,两者符合率达91.5%。试验结果表明,该ELISA方法特异性强,敏感性高,稳定性和重复性好,操作简便。本方法的建立在实验室诊断的标准化、猪群萎缩性鼻炎疫苗免疫效果的评价及流行病学调查方面具有应用价值。 相似文献
26.
伪狂犬病病毒Bartha株TK-/LacZ+突变株的构建及其生物学特性研究 总被引:2,自引:1,他引:2
本研究将伪狂犬病病毒Bartha株基因组与含有LacZ标志基因的TK基因转移质料pUEKPZ共转染猪肾传代细胞PK-5,细胞出现病变后,反复冻融3次收毒,按1:5稀释接种于IBRS-2细胞。在X-gal存在下挑取蓝斑,蓝斑筛选3次,再进行空斑试验,同时用PCR扩增LacZ基因,经3次空斑纯化,随机挑取的空斑均能扩增出LacZ基因,证实所获得的重组病毒为伪狂犬病病毒Bartha株TK^-/LacZ^ 突变株。TCID50试验表明,TK失活对Bartha株在细胞上增殖无影响;Balb/C小鼠试验表明,该突变对Balb/C小鼠的安全性明显高于Bartha亲本毒株。 相似文献
27.
人类一方面要保护野生动物及其生存环境,另一方面,对野生动物相关产品的需求(如裘皮、肉类、滋补品等)却日益增加,同时,人类也不能为消费动物资源而牺牲自身的健康。缓解其中矛盾的唯一办法是开展合法健康的人工养殖,也就是理性保护与科学利用动物资源。 相似文献
28.
牛流行热(Bovine Ephemeral Fever),又叫三日热,暂时热,是由弹状病毒科水疱病毒属的病毒引起的牛的一种急性、热性传染病。临床上,以高热、流泪、流涎、鼻漏,呼吸困难和四肢关节疼痛而引起跛行为其特征。病程较短,预后良好。但是能造成部分牛的死亡,怀孕母牛的流产,以及奶牛产奶量下降或淘汰,治疗费用高,治疗期间抗生素残留乳的废弃,经济损失相当严重。因此,对于该病的及时诊断和防治,显得尤为重要。现将该病的诊断和防治作一简介,以供参考。 相似文献
29.
表达猪繁殖与呼吸综合征病毒修饰型GP5m蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其在小鼠的免疫反应 总被引:3,自引:0,他引:3
猪伪狂犬病毒(PRV)是一种良好的兽用活病毒疫苗载体。但以PRY基因缺失疫苗株TK^-/gE^-/LacZ^+为载体表达PRRSV GP5的重组病毒TK^-/gE^-/GP5^+免疫实验动物后难以激发抗PRRSV的中和抗体。为了进一步增强这种重组病毒的免疫效力,本研究用具有更好免疫原性的修饰的ORF5基因(ORF5m)代替天然ORF5基因,构建了表达PRRSV的修饰型GP5m蛋白的重组伪狂犬病毒TK^-/gE^-/GP5m^+。经PCR、Southem Blot、Western blot证实构建正确,并能表达具有活性的GP5m蛋白。将TX^-/gE^-/GP5m^+与TK^-/gE^-/GP5^+分别免疫Balb/c小鼠,结果TK^-/gE^-/GP5m^+免疫小鼠不仅产生了较高水平的抗PRRSV的中和抗体(3/6只达到了1:16),而且在诱导PRRSV特异性细胞免疫方面也显著优于TK^-/gE^-/GP5^+,表明TX^-/gE^-/GP5m^+是一种极有希望的PRRSV和PRV二价基因工程候选疫苗。 相似文献
30.
胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)是一种严重危害世界养猪业的重要病原菌,至少有15种血清型,根据所有血清型菌株仅在感染猪体内产生外毒素ApxIV的特点,建立了一种能够区分感染猪与免疫猪的鉴别诊断方法ApxIV-ELISA。本研究将该诊断方法进一步研制成试剂盒,对其特异性、敏感性、重复性和稳定性进行了测试,与间接血凝试验及IDEXX公司的CHEKIT-APP-APXIV试剂盒进行了对比研究,并用该试剂盒检测了来自中国、英国、丹麦、美国、加拿大和澳大利亚的临床猪血清1453份。结果表明ApxIV-ELISA试剂盒具有很高的特异性和敏感性,与CHEKIT-APP-APXIV试剂盒的检测符合率为91.37%;三批试剂盒的批内和批间的重复性良好(变异系数均<15%);试剂盒在2~8℃保存9个月内稳定性良好;ApxIV-ELISA试剂盒能够有效区分APP感染猪与三价灭活疫苗或亚单位疫苗免疫猪。 相似文献