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禽白血病劳斯肉瘤病毒衣壳蛋白P27基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备 总被引:6,自引:0,他引:6
从人工感染禽白血病劳斯肉瘤病毒的SPF鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物中提取RNA,通过RT-PCR方法扩增出720bp的gag P27基因片段,克隆至pMD18-T载体,酶切鉴定后进行序列测定和分析,表明该片段编码序列与国外RSV分离株(JO2342)的同源性达97.3%.将该片段亚克隆至pGEX-6 P-1原核表达载体,转化受体菌BL-21,经IPTG诱导表达,12%SDS-PAGE凝胶电泳,考马斯亮蓝染色,证明目的基因得到高效表达,所表达蛋白是大小为56kD的融合蛋白,占菌体总蛋白的23%.表达产物经Glutathion Spharose4 B树脂亲和层析法纯化后,每100 mL菌液最终可获得5 mg重组t27蛋白,蛋白纯度在90%以上.用兔抗自然P27蛋白阳性血清进行Western blot检测,表明重组P27蛋白有抗原反应活性.用纯化的重组P27蛋白免疫兔子制备多克隆抗体,产生的抗体与禽白血病全病毒抗原可以发生特异性反应.所制备的重组P27蛋白和多克隆抗体将为禽白血病的诊断及ELISA试剂盒的研制奠定基础. 相似文献
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兔病毒性出血症基因工程苗研究概况 总被引:5,自引:0,他引:5
由于兔病毒性出血症 (RHD)组织灭活苗涉及的成本、生物安全及动物福利等问题 ,国内外学者正致力于 RHD新型疫苗的研制和开发。以 VP60表达为基础的亚单位疫苗经历了最初的原核、真核表达 ,目前正寻求在转基因植物中进行表达 ,以期获得大量、低成本的口服疫苗 ;而以牛痘、金丝雀痘病毒、黏液瘤病毒等作载体的重组活载体苗 ,无疑使 RHD疫苗正在向更安全、实用及对家兔、野兔均有保护作用方向发展 ,具有很大的发展潜力和前景。国外学者在RHD基因工程苗方面研究较为广泛和深入 ,而国内尚未有此方面报道 相似文献
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猪传染性胃肠炎病毒重组N蛋白抗原间接ELISA抗体检测方法的建立 总被引:5,自引:0,他引:5
本研究以纯化的原核表达猪传染性胃肠炎病毒N蛋白为诊断抗原,建立了猪传染性胃肠炎病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为mTGE-ELISA。该抗原不与其他常见10种猪病的阳性血清发生交叉反应。批内和批间重复性试验的变异系数均小于15%;对仔猪免疫后不同时间的血清检测结果表明mTGE-ELISA与纯化病毒ELISA符合率达95.0%;mTGE-ELISA相对于VN试验的敏感性为96.3%、特异性为92.2%:现地试验中,mTGE-ELISA与Svanova TGEV/PRCV antibody diagnosis Kit的符合率达87.0%,通过中和试验复核结果表明,mTGE-ELISA的假阳性低于Svanova TGEV/PRCV antibody diagnosis Kit。本试验建立的mTGE-ELISA诊断方法具有良好的敏感性和特异性,为免疫猪群抗体监测和TGE流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。 相似文献
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山羊痘病毒疫苗株ORF64~ORF67的分子特征 总被引:3,自引:1,他引:3
为构建胸苷激酶(Thymidine kinase,TK)基因缺失活载体疫苗,对山羊痘病毒(Goatpox virus,GPV)疫苗株(AV41)ORF64-ORF67进行了克隆和序列分析。结果表明:在全长3460bp的DNA序列中,包含4个完整的开放阅读框(Open reading flame,ORF)。ORF64核苷酸序列全长396bp,编码病毒膜蛋白;ORF65核苷酸序列全长444bp,ORF64和ORF65有44个碱基重叠。ORF66核苷酸序列全长534bp,编码胸苷激酶,具有保守的ATP结合位点和细胞中TK特征序列。ORF67核苷酸序列全长594bp,编码宿主范围相关蛋白。ORF64-ORF66在脊索动物痘病毒亚科中是完全保守的。与参考的国外GPV进行序列比较,ORF64~ORF67有一些差异,如突变和插入等。同源性分析显示:与羊痘病毒属比较,核苷酸和氨基酸同源性均较高(94.7%~100%)。我国的GPV不同毒株TK同源性为100%。与脊索动物痘病毒亚科中其他成员同源性差异较大(17.3%~65.2%)。将GPV AV41TK与鸡、小鼠和人类的TK氨基酸序列进行比较,分析GPV AV41TK进化关系表明,GPVTK基因在进化上可能起源于宿主细胞的TK1基因。本研究结果显示,在分子水平上我国GPV AV41与国外毒株存在差异,推测可能是GPV AV41疫苗株在致弱过程中发生一定程度的变异。 相似文献
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产气荚膜梭菌α毒素研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
产气荚膜梭菌 (Clostridium perfringens)α毒素是第一个被赋予酶活性的细菌毒素 ,194 1年Mac Farlane和 Knight将其命名为磷脂酶 C。产气荚膜梭菌是一类革兰氏阳性厌氧粗大杆菌 ,大小 3~4μm× 1~ 1.5μm,分布广泛 ,恶劣时可产生高抵抗力的内生性孢子。该菌产生的外毒素有α、β、γ、δ、ε、η、θ、ι、κ、λ、μ、ν 12种以及肠毒素 (也称为芽胞相关蛋白 ) ,但主要起作用的是α、β、ε、ι4种。根据细菌产生外毒素的种类差别 ,可将产气荚膜梭菌分成 A、B、C、D、E等 5型。各型菌均可产生α毒素 ,其中以 A型菌产生的最多。毒素… 相似文献
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高效安全的新型禽流感灭活疫苗(H5N1亚型,Rel株)对鸭的免疫抗体检测初报 总被引:2,自引:0,他引:2
目前常规的禽流感H5N1灭活疫苗大都采用高致病力的H5N1亚型分离株接种鸡胚收获鸡胚尿囊液,这种原液不仅病毒含量低,而且存在散毒危险,对家禽,尤其水禽的禽流感防制存在极大隐患已被农业部停业使用。国家禽流感参考实验室科研人员将GD/1/96株(H5NI)经基因定点突变、删除HA基因裂解位点与高致病力相关的碱性氨基酸的两个表面基因HA和NA的供体和流感病毒。PR8的6个内部基因的供体.利用反 相似文献
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确定了MTT法测定鸡脾淋巴细胞转化实验的最佳条件,并用此法检测了人工感染新城疫病毒雏鸡和LaSota免疫雏鸡受到强毒攻击时脾淋巴细胞的转化率。实验表明,在两种情况下,雏鸡脾淋巴细胞对ConA和PHA的反应性与对照组比较有显著的差异,提示在新城疫感染和免疫中,淋巴细胞具有一定作用。 相似文献
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本研究旨在获得伏马毒素B1特异性适配体并利用其和胶体金的作用建立伏马毒素B1的快速检测方法。通过非固定靶标的指数富集配体系统进化技术筛选获得伏马毒素B1的适配体,并用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法测定所获适配体的亲和力和特异性,建立基于适配体的胶体金快速定量检测方法。结果表明:筛选得到的伏马毒素B1适配体F102亲和力解离常数为(42.1±4.0)nmol/L;建立的胶体金检测方法简便、快速、特异性强;样品检测结果与液相色谱结果的相对误差低于15.7%。因此,本研究利用筛选得到的适配体建立了可用于谷物和饲料中伏马毒素B1含量的快速定量检测方法。 相似文献