宠物源大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrD的研究

 【目的】对临床分离的宠物源大肠杆菌进行质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrD的检测,并对该基因进行序列分析和传播机制的研究。【方法】采用微量稀释法对阳性菌株进行15种抗生素的最小抑菌浓度试验;通过PCR对基因克隆,并对克隆产物和菌株阳性质粒进行转化;同时对菌株进行接合转移试验。【结果】从164株宠物源大肠杆菌中检测出1株qnrD阳性菌株(GP2009-036),GP2009-036对14种兽医临床常用抗生素耐药严重,表现为多重耐药(14耐);PCR产物经连接PMD19-T载体后可转化入DH5α感受态细胞中;接合转移试验成功地将质粒转移到大肠杆菌J53中;可从GP2009-036与其转化子中抽提出阳性质粒。【结论】该qnrD阳性菌株对临床常用抗生素耐药严重,且阳性质粒可在病原微生物间进行水平传播,其水平传播机制可能使该基因在宠物临床上进行传播。     

兽药使用过程中相关问题的分析

近年来我国的畜牧养殖业取得了可喜的成绩,但随着中国加入世贸组织和与国际市场的接轨,兽药残留、食品安全等话题日益突显成为焦点,人们越来越关注自己的餐桌上的食品是否绝对安全,越来越关注从整个养殖周期到食品加工整个过程的各个环节。在《兽药使用过程中相关问题的分析》一文中,作者从原料药的使用问题及其弊端分析、兽药使用过程中休药期的相关问题分析、目前兽药不合理应用的危害的主要表现形式及解决方法三个方面进行了阐述。     

对母猪使用风味剂如何提升仔猪生产性能

仔猪的自然断奶过程通常需要数周甚至数月时间,现代养猪业不仅将其断奶时间提早到3～4周龄,断奶时间也大大缩短。这导致仔猪断奶后的最初几天生长速度减慢甚至体重减轻。有研究表明,断奶后向仔猪提供与产前和围产期母猪日粮相同的风味剂可减少仔猪断奶腹泻。     

川西北高原牦牛和藏猪源大肠杆菌生物被膜表型、耐药基因、整合酶基因和毒力基因检测

【目的】对329株采自川西北高原牦牛和藏猪源大肠杆菌进行生物被膜形成能力、抗生素耐药基因、整合酶基因、毒力基因和遗传谱系分型分析,以期了解其耐药现状、毒力特性和优势遗传谱系分布等生物学特征。【方法】利用麦康凯培养基和15e肠杆菌科细菌生化编码鉴定管对牦牛和藏猪粪便和胃肠道内容物样本进行大肠杆菌分离和鉴定;采用改良结晶紫半定量染色法和微量肉汤稀释法分别对分离菌株进行生物被膜形成能力鉴定及其对24种抗菌药物的敏感性试验;采用普通PCR或多重PCR方法对28个耐药基因、2个整合酶基因、15个毒力基因进行检测和遗传谱系分型分析。【结果】（1）从471份牦牛、藏猪粪便和胃肠道内容物样本分离鉴定329株大肠杆菌,分离率为78.9%。（2）329株大肠杆菌大多表现出弱或无生物被膜形成能力,仅2株为强成膜能力表型（其中牦牛和藏猪源各1株）。（3）329株大肠杆菌对24种抗菌药物多表现出一定的耐药性并呈现多重耐药现象,其中对磺胺甲口恶唑、磺胺二甲嘧啶、链霉素、氯霉素、氨苄西林、利福平和土霉素耐药率较高,对氨基糖苷类（卡那霉素、阿米卡星和壮观霉素）、β-内酰胺类（头孢噻呋、头孢曲松、头孢唑啉）、喹诺酮类（萘啶酸、沙拉沙星、恩诺沙星、环丙沙星、达氟沙星、左氧氟沙星）和多黏菌素B 等敏感。（4）除cat1、cat2、bla_CMY-2、bla_SHV、tetC、tetG、tetX等7个耐药基因外,其他21个耐药基因检测结果均为阳性,其中以aac(6')-Ib最为流行,其次是sul1和floR,检出率均在30%以上。藏猪源大肠杆菌对喹诺酮类抗生素耐药与qnrA相关,牦牛源大肠杆菌对β-内酰胺类耐药性与bla_TEM和bla_DHA相关。（5）整合酶基因intⅠ1和intⅠ2的检出率分别为30.09%（99/329)和4.56%（15/329),其中10株大肠杆菌（牦牛源2株,藏猪源8株)同时检测到intⅠ1和intⅠ2。（6）毒力基因agn43、sitA、ompT、eaeA、bcsA、fimC、LT、fyuA和irp2均有阳性检出,但stx1、stx2、ehxA、bcsB、hlyA和hlyE未检测到; 329株大肠杆菌共存在38种不同的毒力谱型,其中285株至少携带除agn43和bcsA外7个毒力基因中的1个,最多携带6个毒力基因。（7）21个耐药基因中,A型和B1型分布的耐药基因种类较B2型和D型丰富;A型中sul3、qnrS、tetM耐药基因分布最广,B1型中sul1和aac(6')-Ib分布最广,不存在tetM和qnrA;7个毒力基因主要分布于A型和B1型,fimC、sitA和ompT主要分布于A型和B1型,eaeA、fyuA和irp2的主要分布于B1型,LT主要分布于A型(仅1株分布于D型)。【结论】329株大肠杆菌耐药较为严重,且耐药基因谱型和毒力谱型呈现多样化,本研究能够为川西北高原牦牛和藏猪源大肠杆菌病治疗、发病机制探讨及抗菌药物合理使用提供数据支持和理论依据。     

细菌生物被膜定性和定量研究方法

细菌生物被膜是浮游细菌和生物被膜细菌共同分布于同一生存空间内的特殊生长方式,能够逃避抗生素和机体免疫系统的清除而得以继续生存。对细菌生物被膜定性和定量方法进行了综述,比较和分析了其优缺点,旨在评价各种方法在生物被膜研究中的适用性。     

不同来源沙门氏菌的分离鉴定及其耐药谱型比较

利用亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)、沙门氏-志贺氏属琼脂培养基(SS)、科玛嘉沙门氏菌显色培养基、Reveal沙门氏菌检测试剂盒和分子生物学方法对不同动物的粪便样本进行沙门氏菌(Salmonella)的分离和鉴定.采用微量肉汤稀释法对分离菌株进行恩诺沙星、安普霉素和氟苯尼考等17种抗菌药物敏感性试验,试验数据采用Whonet5.4软件统计以比较不同来源沙门氏菌的分离率和耐药谱型差异.结果表明,不同动物来源沙门氏菌的分离率和耐药谱型差异较大,其中牦牛源沙门氏菌的分离率和耐药率最低,禽源和犬源沙门氏菌的分离率差别不大,但耐药谱型差异较大.     

广州、成都宠物源性大肠杆菌生物被膜形成能力及耐药性调查

为了解广州、成都两地宠物源性大肠杆菌生物被膜形成能力和耐药情况,为指导宠物临床用药和耐药性监测提供依据,研究采用改良结晶紫半定量方法对300株宠物源性大肠杆菌进行生物被膜形成能力测定,同时采用NCCLS微量肉汤稀释法对之进行头孢噻呋、庆大霉素等14种兽医临床常用抗菌药物MIC值测定.结果表明:广州、成都两地宠物源性大肠...     

四种藏兽医药用植物和屎肠球菌联用对大肠杆菌E6生物被膜的影响

采用改良结晶紫半定量法和微量肉汤稀释法分别对152株大肠杆菌进行生物被膜形成能力分析和12种常用抗菌药物敏感性试验。同时,利用棋盘稀释法评价四种藏兽医药用植物(马蹄黄、偏翅唐松草、华丽龙胆和岩生忍冬)不同提取部位(甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和石油醚)、屎肠球菌乙酸乙酯提取物与高耐药率抗生素(氯霉素、土霉素、氨苄西林和磺胺甲噁唑)联合对10株多重耐药大肠杆菌(E1-E10)杀菌活性,以探讨不同药物组合对E6生物被膜的清除作用。实验结果显示：152株大肠杆菌多表现为中等成膜能力和无成膜能力表型,对氯霉素、磺胺二甲嘧啶、土霉素、氨苄西林、磺胺甲噁唑的耐药率均高于90%,对二氟沙星、环丙沙星、阿米卡星、头孢噻呋、妥布霉素和头孢曲松的耐药率均低于50%,其中阿米卡星的敏感率最高,耐药率仅为19.90%;马蹄黄甲醇提取物、偏翅唐松草乙酸乙酯提取物、华丽龙胆甲醇提取物和岩生忍冬乙酸乙酯提取物、屎肠球菌S16和S17乙酸乙酯提取物对E1～E10的MIC范围分别为3.93～15.63、3.93～31.52,7.81～15.63、7.81～31.52、0.42～13.38和0.45～3.63 mg/mL;四...     

宠物源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类耐药基因流行性检测

【目的】对广州分离得到的宠物源(主要是宠物猫、狗)大肠杆菌进行质粒介导喹诺酮类耐药PMQR基因qnr、qepA和aac(6′)-Ib-cr基因的流行性检测。【方法】采用琼脂平板稀释法对164株临床分离的宠物源大肠杆菌进行15种抗菌药物的最小抑菌浓度测定。通过PCR检测qnr、qepA和aac(6′)-Ib-cr基因。建立大肠杆菌基因指纹图谱并对指纹图谱进行分析。【结果】164株宠物源大肠杆菌对12种兽医临床常用抗生素耐药率较高,且表现为多重耐药(5-14 耐)。在164株宠物源大肠杆菌中检测到3个菌株同时携带qnrA、qnrB和qnrS基因,其中2株也携带aac(6′)-Ib-cr基因。阳性菌株均能扩增出指纹图谱,具有两个以上PMQR基因的菌株多分布于B型和C型。【结论】广州市宠物源大肠杆菌对临床常用抗菌药物耐药较为严重,检测结果显示喹诺酮类耐药基因在本市宠物医学临床上传播广泛,PMQR基因的产生能力与其基因型有密切的关系。     

免疫增强剂的研究应用（上）

据有关部门调查，目前我国禽病已达80余种．其中许多疾病具有免疫抑制性．鸡群一旦感染，往往造成免疫系统如胸腺、法氏囊、骨髓和脾脏的萎缩及相关功能紊乱，严重损害了机体的免疫功能．增加了细菌性疾病、霉形体、寄生虫病的易感性，造成了复杂的混合感染．大幅增加了家禽的发病率和治疗难度．因此研究和开发有效的免疫增强剂，保证和维持鸡体免疫系统的完整和正常功能．可有效防制禽类传染病的发生．提高机体对其他疫苗的免疫接种发生更为有效的反应。