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根据枯草芽孢杆菌WHNB02植酸酶phyC基因全序列设计一对引物,采用PCR法从含有该基因的pUC18-phyC质粒上获得不含有信号肽序列的phyC基因表达片段,亚克隆到毕赤巴斯德表达载体pPIC9K的多克隆位点,并电转化毕赤巴斯德酵母GS115.经MD和MM平板筛选、酶活性测定,获得了阳性转化子PP9KC.首次在毕赤巴斯德酵母中实现了有生物学活性芽孢杆菌植酸酶的分泌表达,去糖基化试验表明该植酸酶的分子量为53.5 kD和50.9 kD糖基化程度不同的两种糖蛋白.用麦芽汁半合成培养基对PP9KC进行诱导培养,培养48 h后酶活可达到2453 U/mL,表达量为出发菌株的10.5倍.酶学性质分析表明,其酶促反应最适pH值为7.0,最适反应温度为65℃,经90℃处理10 min,残留酶活性为37℃时的78.2%. 相似文献
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为研究杂交三倍体泥鳅Misgurnus anguillicaudatus的形成机制,探寻其产业化生产的有效途径,通过对GISH的多项试验参数进行优化,建立杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系,并对天然四倍体泥鳅(4n=100)与大鳞副泥鳅Paramisgurnus dabryanus(2n=48)正、反杂交后代进行GISH分析。结果表明:杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系中,探针DNA在温度为105℃、持续时间为2 min时,片段化后探针DNA片段长度为500~1000 bp;封阻DNA在温度为110℃、持续时间为10 min时,片段长度为100~500bp;标记后的探针DNA与片段化后的封阻DNA混合比(P/B)在1∶25和1∶50时均可以得到较好的杂交信号;以大鳞副泥鳅全基因组DNA为探针DNA、天然四倍体泥鳅全基因组DNA为封阻DNA,与二者正、反交后代进行基因组原位杂交试验,结果显示,来源于亲本大鳞副泥鳅24条染色体在着丝点处均有杂交信号,无杂交信号染色体50条,来源于亲本泥鳅。该研究结果不仅为杂交三倍体泥鳅后代的鉴定提供了最直观的证据,也为中国天然四倍体泥鳅是含有四套染色体组的遗传四倍体并能产生2n的配子提供了分子细胞遗传学基础数据,对泥鳅三倍体育种研究具有一定的指导意义。 相似文献
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为了表达牛环形泰勒虫(Theileria annulata)截短HSP70基因编码蛋白并研究该蛋白的结构与功能特性,本研究扩增牛环形泰勒虫HSP70目的基因并构建重组质粒pMD18-T-HSP70,选取其他种的同源HSP70蛋白序列构建系统进化树;利用生物信息学方法分析HSP70基因编码蛋白的氨基酸组成、基本理化性质、亲疏水性、跨膜区结构、信号肽、可能的磷酸化位点、亚细胞定位及蛋白的二级结构和三级结构;对重组蛋白HSP70进行蛋白互作网络分析;构建原核表达载体pET28a-HSP70,筛选诱导表达条件,镍柱纯化重组蛋白及检测反应原性。结果显示,牛环形泰勒虫HSP70蛋白序列与小泰勒虫的序列同源性较高,蛋白分子质量为42 ku,理论等电点(pI)为5.61,属于酸性亲水性蛋白,无跨膜区及信号肽;蛋白功能预测结果显示,HSP70包含32个可能的磷酸化位点,亚细胞定位分析显示该蛋白主要分布于细胞质。蛋白质二级结构中α-螺旋、β-转角、无规则卷曲、延伸链分别占39.18%、8.51%、30.41%和21.91%。蛋白互作网络构建结果显示,与HSP70相互作用的蛋白主要为HSP90家族成员,另外还有伴侣蛋白GrpE同系物,预示着HSP70可能在细胞内与HSP90形成复合体发挥作用。本试验成功构建原核表达载体,获得了大小约为48 ku的融合蛋白,以0.6 mmol/L IPTG于37 ℃诱导5 h,蛋白表达较好;点状印迹及Western blotting结果表明,表达产物可被自然感染的牛环形泰勒虫阳性血清识别,具有良好的反应原性。本试验结果为进一步探讨牛环形泰勒虫HSP70功能机制提供了理论依据。 相似文献
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杂交籼稻与其亲本低温障碍耐冷差异的相关性分析 总被引:2,自引:0,他引:2
在较高海拔地区采用分期播种的自然低温胁迫方法,以平均结实率和相对冷敏指数(CRI)为指标,对以3个不育系与5个恢复系组配的15个不完全双列杂交籼稻组合的障碍型耐冷性进行了初步研究。结果表明:(1)自然低温胁迫下,相同恢复系与不同不育系、相同不育系与不同恢复系组配系列杂交组合间平均结实率和CRI值的差异达到极显著水平,且耐冷性前者呈A/R5〉A/R3〉A/R2〉A/R1〉A/R4,后者呈A3/R〉A1/R〉A2/R的趋势,表明杂交籼稻障碍型耐冷性的表达既与恢复系有关又受不育系的影响;(2)杂交组合不同播期之间的低温平均结实率和CRI值存在显著或极显著的正相关。其中,低温平均结实率的相关系数在Ⅳ期与Ⅲ、Ⅱ期之间分别为0.6030^*和0.6620^*,在Ⅲ期与Ⅱ期之间为0.5641^*;而CRI值的相关系数在Ⅳ期与Ⅲ、Ⅱ期间分别为0.7439^*和0.9770^*,在Ⅱ期与Ⅲ期之间为0.7267^*。 相似文献
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开展田检路查,是农机监理机关的一项基础性工作。下面谈谈在田检路查中,农机监理人员如何排除外界干扰的问题。 1.机手的干扰 在巡检中,有时机手无法出示驾驶证和行驶证 (以下简称“两证” ),他们有的说:“两证放在家里”,有的说:“某某监理员知道我办了证”,因而对该机手属无证无照驾车还是“两证”没带在身上,真假难辨。对此,应向机手严肃指出:出车随身携带“两证”,是对驾驶员最起码的要求,否则无论有否,都属于违反《道路交通管理条例》的行为;另一方面,农机监理人员可以复印一份拖拉机和驾驶员档案带着下乡,以便… 相似文献