利用套式PCR检测牛羊乏质体

为同时检测和鉴定牛边缘乏质体、中央乏质体及绵羊乏质体,根据这3种病原体的msp4基因核苷酸序列,自行设计、合成了针对3种乏质体的2对通用引物,及分别针对三者的特异引物,通过PCR条件优化,建立了检测乏质体及分别鉴定3种乏质体的套式PCR方法,并与OIE推荐的msp5半套式PCR比较.结果显示:该方法对牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、羊莫氏巴贝斯虫、山羊泰勒虫、温氏附红细胞体、东方巴贝斯虫、刚地弓形虫、伊氏锥虫均未扩增出特异性片段.套式PCR检测乏质体DNA量为0.2 pg(相当于6个感染红细胞).检测l 119份来自6个不同地区的奶牛、肉牛、水牛及羊的临床样品,阳性106份,经鉴定边缘乏质体46份,中央乏质体15份,绵羊乏质体35份,混合感染中央乏质体和绵羊乏质体4份,混合感染边缘乏质体和绵羊乏质体3份,混合感染边缘乏质体和中央乏质体3份.首次在分子生物学水平证明中央乏质体存在于中国.同时,证明牛可以混合感染边缘乏质体和中央乏质体或绵羊乏质体,以及混合感染中央乏质体和绵羊乏质体.上述848份样品用OIE推荐的msp5半套式PCR同时检测,两者符合率为98.5％(835/848).检测结果表明,msp4套式PCR特异、敏感,可用于边缘乏质体、中央乏质体、绵羊乏质体的检测和鉴定.     

规模化猪场的成本管理

正成本是商品经济的价值范畴,是商品价值的组成部分,即指生产某一产品所耗费的全部费用之和。成本作为产品生产过程中的各项费用支出,可以反映企业经济活动中投入和产出的关系;是企业进行决策和计算盈亏的依据,也是衡量企业生产经营管理水平的一项重要综合指标。本文重点谈谈规模化猪场生产成本的管理要点。1成本管理的意义目前,很多中小规模化猪场没有完善的成本核算体系,猪场经营管理者或者不清楚成本情况,成本     

鸡贫血病毒可耐受丙酮的灭活作用

为研究丙酮对鸡贫血病毒(CAA)活性的影响,在室温下,用90％丙酮对已知滴度的鸡贫血病毒样品处理24小时。通风干燥后用无菌水将处理毒稀释至原体积进行滴定。用MDCC—MSB1细胞对用丙酮处理毒作3周8次传代培养,作终点滴定,处理毒     

胸膜肺炎放线杆菌的实时荧光PCR检测

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）引起的危害养猪业的五大疾病之一。至目前为止App共报道有2个生物型15个血清型。所有型都可能致病，但有显著差异。使用血清学方法监测猪传染性胸膜肺炎有其局限。一些猪细菌分离培养阳性，但血清反应仍为阴性，对这些猪群只能使用病原分离进行确诊。亚临床感染及处于潜伏期的动物，     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的套式PCR检测

根据猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)apxⅣA毒素基因的序列,设计了两对特异性引物P1/P4和P6/P8,建立了检测APP全部15个血清型的套式PCR方法.对APP的15个国际标准血清型和国内的APP菌株进行了PCR检测,都能得到223 bp的特异性扩增产物;检测的灵敏度可达1.3 CFU,最低检出DNA浓度为9 fg.     

黄土丘陵区白羊草群落冠层结构和多样性特征对氮磷添加的响应

为探究氮磷添加对黄土丘陵区典型草地群落冠层结构和多样性特征的影响,本研究以白羊草(Bothriochloa ischaemum)群落为研究对象,采用裂区试验设计,主区设4个氮(N)处理(0,25,50,100kg·hm^-2·a^-1),副区设4个磷(P₂O₅)处理(0,20,40,80kg·hm^-2·a^-1),测定了群落高度、叶面积指数、光合有效辐射百分比、光不对称性、地上生物量和Shannon-Wiener指数。结果表明：氮添加显著增加了群落高度和叶面积指数;氮磷添加显著增加了光合有效辐射百分比、光不对称性和地上生物量,降低了Shannon-Wiener指数。单施氮和磷分别增加了矮多年生禾本科草和多年生豆科草生物量贡献比;50和100kg·hm^-2·a^-1的氮添加水平与磷配施增加了高多年生杂类草生物量贡献比。结构方程模型表明,氮磷添加下光不对称性的增加对物种多样性的影响不显著。综上所述,黄土丘陵区在采取施肥措施促进退化草地恢复过程中,要权衡地上生物量提高和物种多样性下降的关系。     

套式PCR和实时荧光PCR在检测胸膜肺炎放线杆菌上的应用

应用胸膜肺炎放线杆菌套式PCR和实时荧光PCR检测方法分别检测了不同来源的猪鼻拭子、肺、扁桃体等494份样品。套式PCR 77份阳性,实时荧光PCR 62份阳性,前者的阳性完全覆盖了后者的阳性,两者符合率为97%(479/494)。2种方法均可应用于猪传染性胸膜肺炎的诊断和监测。     

复合PCR进行胸膜肺炎放线杆菌血清型快速分型

根据胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）各血清型之间外毒素apxⅠ、apxⅡ、apxⅢ、apxⅣA基因差异，设计6对引物，对16株标准菌株进行1次5对引物的多重PCR和1次根据apxⅣA基因设计1对引物PCR的扩增，得到各血清型特异性片段，并将片段特征相同的血清型归为同一组。通过这2步PCR分组情况的不同能将16株标准菌株中的大多数血清型区别开，但是仍然不能将血清2型和8型、血清9型和11型、血清5型中的2个亚型以及血清12型和13型区分开。又根据血清2型英膜多糖（CP）基因差异设计1对引物将血清2型和8型区分开。将此分型系统应用于23株未知病原菌检测，检测到胸膜肺炎放线杆菌9株，并全部能够将其分型。本试验PCR分型体系可以作为胸膜肺炎放线杆菌血清型分型的一种快速而有效的鉴定方法。     

猪丁型冠状病毒感染麻黄鸡的研究

为研究猪丁型冠状病毒(PDCoV)跨物种传播宿主谱及其致病性,将PDCoV(HN-17毒株)接种至6日龄SPF麻黄鸡并采集感染鸡的组织器官,通过临床症状、RT-PCR、病理组织切片分析等对其组织嗜性、组织病理学变化进行系统研究。结果表明,口服接种PDCoV的麻黄鸡出现腹泻等临床症状,在感染鸡的肺脏、空肠、直肠、肾脏中均检测到PDCoV的RNA,感染鸡的肺脏、空肠产生以出血、炎性细胞浸润为主要特征的组织病理学变化,证明PDCoV可以感染麻黄鸡并致病。证实猪丁型冠状病毒可感染麻黄鸡,为PDCoV的跨物种传播及该病防控提供参考。     

实时荧光PCR检测牛边缘无浆体方法的建立及应用

根据牛边缘无浆体表面蛋白4的保守基因序列设计特异引物AMOC9/AMOC5、AMOC10/AMOC12和特异性探针MP,首次建立了牛边缘无浆体的实时荧光PCR检测方法,检测DNA的最低限度为200 fg。对中央无浆体、绵羊无浆体、牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、羊莫氏巴贝斯虫、山羊泰勒虫、温氏附红细胞体、东方巴贝斯虫、刚地弓形虫和伊氏锥虫进行检测,无荧光检测信号。本研究用所建立的方法检测采自江苏和哈尔滨的180份抗凝血（奶牛和肉牛）,其阳性率为8.9%。结果表明,建立的实时荧光PCR检测牛边缘无浆体的方法具有较高的特异性和敏感性,可用于牛边缘无浆体病的流行病学调查、检疫和监测。