甘蓝型油菜BnaABI4基因CRISPR/Cas9编辑载体的构建及甘蓝型油菜转化

ABI4(Abscisicacid-insensitive4)是ABA响应途径中重要的转录因子。本研究以甘蓝型油菜全基因组数据库为基础,借助拟南芥ABI4蛋白的氨基酸序列,通过序列比对,获得了甘蓝型油菜的2个BnaABI4,分别命名为BnaABI4-A (GenBank登录号为BnaA03g18970D)和BnaABI4-C (GenBank登录号为BnaC03g725-10D)。在这两个基因的CDS序列上寻找一段长度为20 bp、序列相同的片段作为基因编辑的目标位点,构建CRISPR/Cas9基因编辑载体pCAMBIA1300-sg RNA/Cas9-BnaABI4;借助根癌农杆菌介导的油菜下胚轴遗传转化法,成功将BnaABI4的基因编辑表达框转入甘蓝型油菜‘湘油15’中,共获得转基因植株13株,这将为深入研究甘蓝型油菜BnaABI4的生物学功能提供科学依据。     

7种芸香科植物的RAPD分析

[目的]构建芸香科植物7个种12个材料的聚类分析树状图,为芸香科植物系统学的研究提供分子水平上的证据。[方法]以芸香科植物7个种12个材料为研究对象,利用RAPD技术对其亲缘关系进行分析。[结果]在建立适合芸香科植物PCR-RAPD反应体系的基础上,从21条随机引物(10 mer)中筛选出10个,对所有供试材料进行扩增,共获得10张DNA指纹图谱,85条DNA谱带,其中84条为多态带,多态性谱带比例为98.82%。[结论]建立了基于RAPD的芸香科植物亲缘关系树状图,该结果与经典的芸香科植物的起源、分类基本一致。     

油菜RAPD反应体系的优化研究

针对RAPD反应体系中Taq聚合酶，dNTP和引物这3个影响较大的因素，设计了一组3因素3水平试验，根据试验结果，筛选了油菜random amplified polymorphic DNA(RAPD)反应体系中3因素的最佳浓度配比，即Taq 1.6U,dNTP 0.2mmol/L，引物0．3umol/L。     

小麦Germin蛋白的研究现状

小麦Germin蛋白是一种具有草酸氧化酶活性的糖蛋白.已经被广泛的研究应用.综述了Germin蛋白的发现及其结构特点与功能的关系.详细介绍了Germin蛋白及其蛋白家族的结构特点的异同,以及它在植物发育、抗逆和防御过程中的作用.     

iMyAP基因过表达载体转化甘蓝型油菜

本研究以甘蓝型油菜湘油15号叶片cDNA为模版,克隆油菜黑芥子酶协助蛋白iMyAP基因全长CDS,目的片段序列和GenBank上报道的甘蓝型油菜序列iMyAP12-Y10156同源性达到100%。将得到的iMyAP基因片段与pMD19-T载体连接,命名为T-1152。用BamHⅠ和XbaⅠ双酶切T-1152和pHB载体,回收片段经T4DNA连接酶连接得到iMyAP基因过表达载体pHB-1152。通过农杆菌介导将pHB-1152转化至甘蓝型油菜湘油15号,PCR鉴定显示成功获得2株转基因植株。本实验为进一步研究iMyAP基因的功能奠定了良好的基础。     

AtTPS03基因RNA干扰载体的构建及拟南芥转化

本研究以拟南芥DNA为模板,将罗勒烯合成酶AtTPS03基因的一个目的片段克隆到T-载体上.对克隆片段测序后,进行Blast比对,结果目的片段的序列与GenBank上报道的序列同源性达到100%.根据RNA干扰的基本原理,将目的片段正反向连到干扰载体pFGC5941查尔酮内含子的两侧,经限制性酶切和PCR扩增检测,证明已成功构建了干扰载体P-2AT03.利用农杆菌介导的浸花法转化拟南芥.收获的种子在含草丁膦的培养基上筛选抗性苗,通过对抗性苗的PCR检测,已成功获得了12株转基因苗.这些转基因苗为进一步研究罗勒烯和罗勒烯合成酶的功能奠定了良好基础.     

禽流感抗原基因NA导入生菜的研究

以生菜子叶为转化受体材料,利用农杆菌介导的方法将禽流感抗原基因NA导入生菜,通过用特异引物进行PCR检测,获得6株转基因植株。经PT-PCR检测,证明外源基因已整合到了生菜基因组中,且能够正常表达。     

甘蓝型油菜病原核盘菌菌核的结构观察

对菌核结构的详细研究有利于了解菌核超强的抗逆能力和开发防治菌核病的新方法。通过电镜扫描观察油菜核盘菌菌核的结构,结果表明,菌核可以分为3层：外表皮、皮层和髓部。外表皮最外层是菌丝体交织成的网状结构,这层菌丝体网覆盖在大小不同的凸面体上,不同大小的凸面体交错排列,与菌丝体网一起形成菌核的外表;皮层在外表皮下面,是由与外表皮平行生长的菌丝体紧密排列而成;髓部是由变形膨大的菌丝体构成的疏松蜂窝状结构,类似植物的储藏组织。     

蓖麻栽培品种的遗传多样性及蓖麻籽脂肪酸组分分析

收集20份蓖麻栽培品种,以湖南永州野生种为对照,利用RAPD标记和GC MS法分析亲缘关系,并测定蓖麻籽脂肪酸组分。结果显示:①21条有效引物RAPD PCR扩增获得的总谱带数为75条,多态性谱带数为45条,多态性谱带比例为54.27%,利用UPGMA类平均法对扩增出的谱带进行遗传聚类分析,当遗传距离为0.146 8时,21份材料能较好地聚类;②蓖麻籽油主要含蓖麻油酸、油酸、亚油酸和少量的棕榈酸、硬脂酸、亚麻酸;在蓖麻籽脂肪酸中,蓖麻油酸含量为72.82%～89.54%、油酸2.97%～8.54%,亚油酸3.47%～10.55%,棕榈酸、硬脂酸含量约为1%,亚麻酸含量约为0.5%,品种间蓖麻油酸的含量差别较大。     

2株油菜菌核病拮抗内生细菌的筛选鉴定及其拮抗活性初步分析

油菜菌核病是一种严重危害油菜生长的病害。于2017年3月从湖南农业大学生物科学技术学院试验田采集油菜湘油15盛花期植株的根茎叶,采用纯培养法对内生细菌进行分离纯化,共分离得到68株内生细菌;采用基于16S rRNA基因序列的系统发育分析法对内生菌株的多样性进行分析研究;利用琼脂扩散法对内生菌株进行抗菌活性筛选,共筛选出7株抗菌活性较强菌株,分别为Y171004、Y172014、Y173005、Y174007、Y174017、Y177001和Y177002;利用平板对峙法对油菜菌核病病原菌核盘菌的拮抗菌进行筛选,筛选出2株(Y171004和Y177002)油菜核盘菌的拮抗细菌,经初步鉴定为芽孢杆菌(Bacillus),继而对其拮抗活性进行初步分析,其中菌株Y171004的抗菌物质经鉴定为热不稳定性蛋白。研究结果能为该地区油菜内生细菌资源的进一步研究及其在油菜菌核病生物防治等方面的应用提供试验依据和理论指导。