低含量血清培养IBRS-2细胞及其增殖猪细小病毒N株的研究

依次采用含8%、4%、2%、1%小牛血清MEM培养基驯化IBRS-2细胞,并在驯化好的IBRS-2细胞上接种猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)N株,确定PPV N株在该培养体系下的生长情况。结果显示,用含8%、4%、2%小牛血清MEM培养基各进行5代次驯化,IBRS-2细胞能完全适应且生长状态良好。当血清浓度降至1%时,仅传代1次,细胞就无法保持良好状态,细胞出现贴壁较差、拉网、生长停滞等现象。各血清浓度培养体系中细胞生长曲线测定结果显示,在细胞培养的0、24、48、72、96 h,各组细胞密度与常规培养的对照组差别不明显。因此用MEM培养基培养IBRS-2细胞时,血清最低含量为2%。用该体系培养IBRS-2细胞接种PPV N株后,通过TCID_(50)和HA测定病毒滴度。结果显示,2%血清培养的PPV N株病毒滴度平均值与常规条件培养(6%~10%血清)无明显差别,表明该体系可用于PPV N株的增殖。本研究成功驯化出能在低含量血清培养条件下生长良好的IBRS-2细胞,血清浓度可以降低到2%,且PPV N株在该低含量血清培养的IBRS-2细胞中能良好增殖。     

近年广西猪流行性腹泻的流行特点与防控存在问题分析

猪流行性腹泻(Poiineepidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrheaviru—PEDV)引細-种|性高度接触性肠道传染病。以呕吐、水样腹泻和脱水为特征,发病仔猪死亡率高。当前由PEDV主导的猪群腹泻是猪场重点防控的重要疫病之一,严重影响猪场经济效益及养猪业健康发展,其防控形势依然严峻。1971年英国首次报道PED,1977年比利时分离到病毒(经典代表毒株CV777)。     

2016—2018年广西猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查和PRRSV ORF5基因的遗传变异分析

为了解广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行和变异情况,试验应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法对2016—2018年广西14个地区规模化猪场的1 564份主要脏器进行了PRRSV检测,选取部分阳性样品进行ORF5基因的扩增并进行序列分析。结果表明:共检测出PRRSV阳性样品467份,阳性率为29.9%。在广西14个地区规模化猪场送检的样品中均能检测到PRRSV。从年份上看,2016年的PRRSV阳性率最高,为43.9%;2017年为26.9%;2018年最低,为23.7%。获得的25条PRRSV ORF5基因序列中有1株与NADC30株同源性较高,1株与GM2株同源性较高,其余23株均与高致病性PRRSV同源性较高。在25株PRRSV中有21株与TJM、JXA1、HuN等高致病毒株亲缘关系较近,并位于同1个分支;2株处于经典株和变异株之间,分别形成2个分支;1株与NADC30株亲缘关系较近,位于同1个分支;1株与GM2株亲缘关系较近,位于同1个分支。PRRSV ORF5基因编码氨基酸序列分析结果表明,25个毒株均为毒力较强的野毒株。说明广西地区仍以高致病性PRRSV为主要流行毒株,但2018年新发现类NADC30毒株和类GM2毒株的流行。     

马山黑山羊支原体肺炎病原的鉴定

为了了解马山黑山羊支原体肺炎的病原,给马山黑山羊支原体肺炎的防控提供依据,本研究采用形态学观察、生化特性、生长抑制、PCR扩增测序和动物致病性试验对从马山黑山羊支原体肺炎病原中分离到的菌株进行鉴定,并进行药物敏感试验。鉴定结果表明马山黑山羊支原体肺炎的病原为绵羊肺炎支原体。药物敏感试验结果表明其对壮观霉素、卡那霉素、庆大霉素、阿米卡星、林可霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明、氟苯尼考高度敏感。     

一例肺炎克雷伯氏菌引起山羊死亡诊断报告

从出血羊肺中分离出的1株菌,对该菌进行形态鉴定、16s r RNA测序、致病性试验和药物敏感性试验,鉴定为肺炎克雷伯氏菌。该菌除对孢曲松高度敏感和对环丙沙星等5种药物中度敏感外,对强力霉素等4种药物不敏感;此外,该菌能使小鼠死亡。结果表明,该例山羊死亡是由肺炎克雷伯氏菌引起的,经过用药进行防治,其他山羊未发生死亡。     

猪圆环病毒2型及3型快速二重PCR检测方法的建立及其应用

针对猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)基因的保守序列设计了2对扩增PCV2和PCV3的特异性引物,通过优化各反应条件,建立同时检测PCV2和PCV3的二重PCR检测方法。敏感性和特异性结果显示,1.08×10~(-8)μg/μL是对PCV2和PCV3的最低检测限具有较好的灵敏度;而对猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病病毒(PRV)、大肠杆菌、链球菌、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌的检测结果均无条带,表明所建立的方法具有较好的特异性。应用该方法检测了2017年9月—2018年8月从广西14个地市猪场采集的533份病猪死猪内脏组织,结果显示:PCV2阳性率为23.8%,PCV3阳性率为14.8%, PCV2和PCV3混合感染率为2.8%。广西14个地市中有12个地市的猪场送检样品检测出PCV2,有10个地市的猪场送检样品检测出PCV3,表明PCV2和PCV3在广西受检猪群中普遍存在,要重视和做好PCV2和PCV3感染的防控工作。     

羔羊奇形变异杆菌与支原体混合感染的诊断

2014年8月6日,实验室接诊了一起以初生羔羊发病而死亡的病例,经流行病学调查,临床症状、病原学分离鉴定,诊断为奇形变异杆菌与绵羊肺炎支原体混合感染,现报道如下。1流行病学调查该养殖户现有存栏150多只,免疫过山羊痘、口蹄疫和梭菌三联四防苗,此前部分成年羊有流涕、咳嗽现象,但羊群没有出现发病和死亡的现象。2014年4月份后,产出的羔羊有如下表现：羔羊出生后的第1~2d活泼、强壮,第3d后出现不吃,四肢无力、卧地不起等现象,其他未见异常。     

马山县黑山羊伪结核病流行病学调查与诊治

为给马山县黑山羊皮下浅表淋巴结肿大、化脓性疾病提供防控指导,2014年4月—7月期间,笔者针对此病开展了流行病学调查和病原分子生物学诊断以及治疗。结果:从3份淋巴结干酪样脓汁中,分离出3株多形态、无荚膜、无芽胞的革兰氏阳性的球杆菌,经病原菌培养特性、生化试验、动物致病性试验和PCR检测和测序,鉴定3株菌均为伪结核棒状杆菌,诊断为山羊伪结核病;流行病学的调查表明,山羊伪结核病在马山县黑山羊年均发病率为10%左右,但死亡率很低,全年均可发生,以春夏季发病严重、成年羊发病为主。并根据药敏试验的结果对病羊进行治疗,提出了综合防治措施。