仔猪水通道蛋白基因的克隆及断奶应激对其在胃肠道组织mRNA表达的影响

水通道蛋白(AQP)作为一种膜转运蛋白,对于调控肠道组织的水分子转运具有重要作用。本实验利用同源序列克隆法设计引物,从仔猪(Susscrofa)的消化道组织中克隆AQPs家族基因(AQP2~AQP11)(GenBank登录号分别为EU636238、EU161094、EU165525、EU192130、EU620575、EU024116、EU220426、EU220427、EU582021和EU220425),并对其进行生物信息学分析。采用荧光定量PCR研究断奶应激对于仔猪胃肠道组织中AQP1、AQP3、AQP8和AQP11的mRNA表达影响。生物信息学分析发现,猪AQPs家族基因含有高度保守的天冬酰氨-脯氨酸-丙氨酸(NPA)结构序列,基因表达分析发现,断奶组仔猪的AQP1基因在十二指肠、回肠和结肠组织的mRNA表达量与对照组相比显著上调(P<0.05);AQP3基因在胃和小肠组织的mRNA表达有显著上调(P<0.05);AQP8基因在胃和回肠组织中mRNA表达有显著上调(P<0.01),在其他组织中没有显著差异;AQP11基因在空肠组织的mRNA表达量显著上调了1.7倍(P<0.05)。这些研究结果表明,AQP基因可能在断奶应激引起的仔猪肠道腹泻中发挥重要作用。     

一例鸡新城疫与大肠杆菌混合感染的诊断和预防

鸡新城疫主要危害鸡、火鸡和鸭、鹅等禽类，特别是肉仔鸡最易感。临床上常见的病型有：胚胎和幼雏死亡、气囊炎、腹膜炎、急性败血症、心包炎、脐炎、眼球炎、关节滑膜炎、出血性肠炎、输卯管炎等。目前临床上多见新城疫与大肠杆菌混合感染，给养殖业带来了巨大的经济损失．是养殖业最严重的疾病之一。     

禁食对小鼠孤啡肽及其受体基因在脂肪组织中表达的影响

探讨禁食状态下孤啡肽及其受体mRNA在脂肪组织中表达的变化.将18只雄性昆明小鼠随机分为正常组、禁食组、再喂食组,采集其脂肪组织,用RT-PCR方法检测孤啡肽及其受体mRNA水平的变化.结果表明,孤啡肽及其受体基因均在小鼠脂肪组织中有表达,与正常组相比,禁食组孤啡肽及其受体的mRNA表达水平明显上调(P＜0.05),而...     

猪锌转运蛋白基因的克隆及其在消化道组织中的分布

slc30A编码的锌转运蛋白可将胞质锌排出细胞外或转入细胞器,从而降低胞浆锌的含量。本研究运用电子克隆设计引物,对猪(Sus scrofa)消化道组织中slc30A1~slc30A9进行克隆,将克隆的slc30A1~slc30A9序列及其编码蛋白的氨基酸序列与其他物种进行同源性比较,并对slc30A1~slc30A9在猪消化道组织中的分布进行研究。克隆结果表明,猪slc30A1~slc30A9均包含一个完整的开放阅读框架,长度为1044~2301bp,编码由348~767个氨基酸残基组成的ZnT(Zinc transporter)蛋白,GenBank登录号分别为:FJ374262.1、EU825192.2、FJ358706.1、EU835903.1、FJ230771.1、FJ237622.1、FJ237623.1、FJ588029和FJ164069.1,其中slc30A8为一个突变体;同源性分析比较发现,slc30A和ZnT蛋白氨基酸与其他种属的同源性分析结果基本一致,与牛(Bos taurus)和人(Homo sapieus)的同源性较高,与小鼠(Mus musculus)和大鼠(Rattusy norvegicus)的同源性较低,且不同异构体及其编码的蛋白也略有差异;组织分布结果表明,除slc30A8仅在回肠中有分布外,slc30A9分布最广,在食道、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠中均有分布,而slc30A1和slc30A6除了回肠,其余组织均有分布,其他几个异构体在回肠中也没有分布,而在食道、十二指肠、空肠、盲肠、结肠和直肠中有不同程度的分布。研究结果提示,slc30A在消化道中的分布具有组织特异性,可能与其在猪体内的功能密切相关。     

石参中黄酮类化合物含量的测定及抗氧化活性的研究

[目的]测定石参中总黄酮含量并对其抗氧化性进行研究。[方法]采用超声波提取技术用体积分数为80％的乙醇提取石参中的总黄酮,分光光度法测定石参中的总黄酮类含量,研究石参中黄酮类化合物对超氧自由基、羟基自由基的清除作用。[结果]石参中总黄酮含量为0．7425％,石参中黄酮类化合物对自由基清除作用随着黄酮浓度的增大而表现出明显的量效关系。总黄酮浓度为9．791×10^-4mg／ml时对超氧自由基的清除率最高,为48．91％;浓度为0．0099mg／ml时对羟基自由基的清除率最高,达到83．76％。[结论]石参总黄酮对超氧自由基、羟基自由基均具有一定的清除作用。     

猪GRIFIN基因克隆与组织分布

从仔猪的眼球中克隆GRIFIN基因,研究GRIFIN在仔猪不同组织中的分布情况。结果成功克隆出猪GRIFIN基因,全长466 bp,包含一个完整的开放阅读框架432 bp,编码144个氨基酸。组织分布结果显示GRIFIN在断乳仔猪多种组织均有分布。     

口蹄疫病毒VP1蛋白可溶性表达标签筛选

为了提高口蹄疫病毒VP1蛋白的可溶性表达,根据A型口蹄疫病毒核酸序列设计并合成了口蹄疫病毒VP1片段,将其克隆到p ET21b(+)载体上,设计1对通用引物扩增10个融合标签Grifin、GST、Nus A、SUMO、Thioredoxin、Protein G、γ-crystallin、Ars C、Ppi B、MBP,并分别将扩增的融合标签与VP1连接构建重组质粒,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),0.5 mmol/L IPTG诱导其表达。SDS-PAGE结果表明,MBP、Grifin和GST能够促进口蹄疫病毒VP1蛋白的可溶性表达,其中MBP与VP1融合表达蛋白可溶部分占60%;Western blot鉴定分析结果显示,小鼠抗His标签单克隆抗体能识别表达的重组蛋白。表明成功表达了具有免疫学活性的融合蛋白MBP-VP1。     

中华绒螯蟹卵巢EJ01基因在大肠杆菌BL21（DE3）中的表达

扩增中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）卵巢EJ01（GenBank检索号：AYl85917）的cDNA全序列得到编码区序列，并将其插入原核表达载体pET28b中，构建成表达质粒pET28b-EJ01。该表达质粒在大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）中经IPTG诱导表达，得到EJ01-HIS6融合蛋白。SDS-PAGE电泳分析表明，该融合蛋白的相对分子质量约为32000。经镍离子柱亲和层析进一步纯化得到纯度较高的EJ01-HIS6融合蛋白。     

中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1(Ers-MIH1)-GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达

蜕皮抑制激素(molt—inhibiting hormone，MIH)属甲壳动物高血糖激素(crustacean hyperglycemic hormone，CHH)家族。MIH抑制Y-器官蜕皮激素的合成。以中华绒螯蟹(Eriocheir japonica sinensis)眼柄总RNA为模板，根据中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1(Eriocheir japonica sinensis molt—inhibiting hormone-1，Ers—MIH1)基因序列设计引物，用RT—PCR的方法获得了Ers—MIH1基因成熟肽的cDNA片段。序列分析表明，Ers—MIH1基因成熟肽编码区含有228bp，编码75个氨基酸残基，与已发表的序列一致。将该cDNA片段插入到中间载体pMD18-T中，酶切后再将该片段插入到pGEX-4T-1表达载体中，构建成表达质粒pGEX-4T—MIH1。在BL21细胞中经IPTG诱导表达，得到GST—MIH1的融合蛋白。SDS—PAGE分析表明，经0．1mmol／L IPTG诱导4h，发现大量GST—MIH1融合蛋白表达，在分子量(Mr)为34kD处有1条特异的蛋白质条带。中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1融合蛋白的成功表达为进一步深入研究MIH在中华绒螯蟹蜕皮过程中的作用机制奠定了基础。     

荧光法快速检测乳品中碱性磷酸酶含量

以4-甲基伞形酮磷酸酯(4-MUP)为底物,通过荧光法检测乳制品中碱性磷酸酶的含量,并与国标法进行比较,发现荧光法批内变异系数为2.81%,批间变异系数为4.34%,精密度与国标法相似,最低检测限为0.003 U·mL-1,优于国标法;回收率100.17%,准确性较好,且操作步骤简便、快速.