猪Lipin基因克隆及其组织分布的研究

采用逆转录PCR、电泳检测等方法,成功克隆得到了猪的Lipin1、Lipin2和Lipin3基因。这3个基因与小鼠的相应基因均具有较高的同源性,达83．2％～86．7％。组织分布结果显示：Lipin1广泛分布在猪的多种组织中,但Lipin2和Lipin3仅在肌肉、肺、回肠和睥中有分布。     

生态文明建设中转基因科普体系的探索

生态文明建设的目标之一是实现人与自然和谐相处,在开展生态文明建设的大背景下,阐明转基因技术与生态文明间的相互关系,开展转基因技术的科普宣传已成为当务之急。本文就生态文明建设与转基因技术及科普宣传间的关系进行探讨,分析了我国科普宣传的现状,并从顶层设计方面探讨转基因科普体系建立的内容和策略。     

合理认识和正确对待转基因

随着越来越多的转基因产品投放到市场,关于转基因安全的问题逐渐为人们所关注。由于人们对生物技术与转基因的了解不一,所以对转基因食品消费和安全的认知也有差异。本文对转基因技术、转基因安全及国家相关法律进行了阐述,以期增强广大群众对转基因的认识,使转基因发挥更大的社会效益。     

高效液相色谱法检测乳品中谷氨酰胺的研究

试验建立了高效液相色谱法检测乳制品中谷氨酰胺的方法.通过谷氨酰胺与双(1,1-三氟乙酸基)碘苯(BTI)反应后酸水解,再用异硫氰酸苯酯衍生后,用HPLC检测不同乳制品中谷氨酰胺的含量.结果显示,纯牛奶中的谷氨酰胺含量最高.     

妊娠和泌乳期大鼠血清激素水平的变化

[目的]探讨大鼠血清糖代谢激素与生殖激素的关系及其与生殖周期活动的相关性。[方法]以妊娠中晚期和泌乳早中期的24只雌性处女SD大鼠和12只雄性SD大鼠为研究对象,用放射免疫法测定大鼠血清FSH、LH、胰岛素和胰岛素抗体的水平。[结果]FSH从妊娠中期到泌乳早期呈现先下降,再升高,后下降的趋势,泌乳中期降至最低,差异不显著;LH从妊娠中期到泌乳早期变化不大,从泌乳早期到泌乳中期有所上升,且差异显著;胰岛素和胰岛素抗体结合率从妊娠中期到妊娠晚期呈上升趋势,从妊娠晚期到泌乳早期急剧下降,泌乳早期降至最低,至泌乳中期迅速升至妊娠中晚期水平。[结论]大鼠血清胰岛素及其抗体与LH在妊娠和泌乳期的变化一致,与FSH的变化相反。     

地塞米松对小鼠脂肪组织中孤啡肽及其受体基因表达的影响研究

目的:探讨地塞米松对孤啡肽及其受体mRNA在小鼠附睾脂肪组织中表达的变化。方法:将12只雄性昆明小鼠,随机分为正常组和地塞米松组,分别采集其脂肪组织,用RT-PCR方法检测孤啡肽及其受体mRNA水平的变化。结果:与正常组相比,地塞米松组孤啡肽及其受体的mRNA表达水平明显下降(P<0.05)。结论:地塞米松可能抑制孤啡肽及其受体基因的活性和合成,对孤啡肽及其受体基因的表达可能具有强烈的下调作用。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5/M蛋白可溶性表达及免疫原性分析

为表达出高可溶性的GP5/M蛋白并检测其免疫原性,本试验将高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)HN07-1毒株ORF5和ORF6基因序列上GP5和M蛋白的编码核苷酸序列进行密码子偏爱性优化设计,构建了GP5/M融合Grifin、GST、MBP、NusA、Sumo、Thioredoxin、γ-crystallin、ArsC、PpiB、CeHSP17共10种不同可溶性标签的表达重组载体。分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导,SDS-PAGE电泳对融合蛋白的可溶性表达进行检测,筛选出高可溶性表达的GP5/M融合蛋白。重组蛋白通过Ni-NTA Agarose亲和纯化,免疫家兔,对获得的兔抗GP5/M血清进行间接ELISA和病毒中和试验。结果显示,成功构建10个GP5/M表达载体,10个标签中,MBP与GP5/M蛋白相融合的可溶性表达效果最好,并获得了高纯度的MBP-GP5/M重组蛋白质;通过免疫家兔,检测重组蛋白具有免疫原性并能刺激机体产生较高水平的中和抗体。结果表明,试验成功建立了稳定获得GP5/M重组蛋白质的方法,初步鉴定了重组蛋白的免疫效力,为PRRSV亚单位疫苗的后续研究及大量制备奠定基础。     

O型口蹄疫病毒衣壳蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及电镜检测

本试验旨在表达出高可溶性的O型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白,并通过电镜检测,以期望形成纳米样颗粒。根据O型FMDV核酸序列,得到FMDV O/GER/Wup/82株的衣壳蛋白基因,并进行截短和优化,共133个氨基酸;同时,从肠道沙门菌(Salmonellaenterica)中分离得到135个氨基酸铁蛋白(Ferritin)基因片段,将O型FMDV衣壳蛋白与铁蛋白串联,设计并合成了FMDV衣壳蛋白-铁蛋白基因片段,命名为SeFnt16599。构建了SeFnt16599融合Grifin、GST、MBP、Sumo、Thioredoxin、γ-crystallin、ArsC、PpiB、CeHSP17等9种不同可溶性标签的表达重组载体。分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导,SDS-PAGE电泳对融合蛋白的可溶性表达进行检测,筛选出高可溶性表达的SeFnt16599融合蛋白。重组蛋白通过Ni-NTA Agarose亲和纯化,进行电镜检测。结果表明,成功构建9种SeFnt16599表达载体;9个标签中,MBP与SeFnt16599蛋白相融合的可溶性表达效果最好,并获得了高纯度的MBP-SeFnt16599重组蛋白质;电镜结果显示,MBP-SeFnt16599形成了纳米样颗粒。本试验建立了稳定获得SeFnt16599重组蛋白质的试验方法,为FMDV衣壳蛋白新型结构疫苗的开发及后续研究奠定了基础。     

鸡Muslin cDNA克隆与序列分析

基于电子延伸序列,本试验克隆并分析了鸡Muslin基因。肌肉组织提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD19-T连接后转化E.coliDH5α,检测阳性克隆并测序;克隆的Musclin基因与人、大鼠、小鼠同源性分别为74%,73%,70%,推测的氨基酸序列同源性分别为58%,54%,50%,氨基酸序列含有"KKKR"结构和与小鼠ANP,BNP,CNP蛋白的同源性区域。试验成功克隆了鸡Musclin基因并注册GenBank(EF551041)。