V型杂种小麦及亲本三系幼苗同工酶研究

以V型杂种小麦及亲本三系为材料,对其幼苗酯酶(EST)、过氧化物酶(POD)、ATP酶同工酶进行了研究。结果表明,V型不育系(V-59A)与相应保持系(V-59B)幼苗的酯酶、过氧化物酶、ATP酶同工酶谱型都存在较大差异。说明这3种酶的表达都是核质互作的结果。综合分析供试材料幼苗POD、EST、ATPase同工酶的变化,发现单用一种同工酶不能将杂种及亲本三系完全区分开。     

小麦ramosa2基因的克隆与序列分析

为了研究ramosa2基因在小麦中的功能,以普通小麦(Triticum aestivum L)中国春基因组为模板,玉米、高梁、水稻和大麦中ramosa2基因保守序列为参考设计引物,扩增到1条全长为771 bp的目的片段.序列分析表明,该核酸序列与高梁、玉米、水稻和大麦中ramosa2基因的同源性高达82.9%～95.2%;其预测编码的氨基酸序列与高粱、玉米、水稻和大麦ramosa2基因的氨基酸序列同源性达79.2%～95%.     

小麦尿卟啉原合酶的分离和纯化

以40%～70%饱和度硫酸铵分级沉淀、DEAESepharoseiCL-6B、SephadexG-100、羟基磷灰石、PhenylSepharoseCL-4B和制备电泳分离纯化了小麦的尿卟啉原合酶(UROS)。酶的亚基分子质量为54ku,全酶分子质量为66ku,酶的等电点6.3,在pH8.2时比活为257μmol/(mg·min),最适反应温度40℃,5mmol/L的巯基乙醇和Mg2 促进酶活,纯化的小麦UROS在-20℃下0.1mol/L,pH8.5的Tris-HCl,内含质量分数为50%的甘油,5mmol/L的巯基乙醇和MgCl2中贮藏7d酶活损失90%。     

小偃6号高分子质量麦谷蛋白14和15亚基来源分析

运用 SDS- PAGE和 PCR分析了小偃 6号及其亲本中高分子质量麦谷蛋白亚基 (HMW- GS)组成。结果表明 ,小偃 6号的 2个亲本 ST2 4 2 4 /464和小偃 96中都存在 1 4和 1 5亚基 ,而远缘种长穗偃麦草中不存在 1 4和 1 5亚基。从而证明长穗偃麦草并非小偃 6号1 4和 1 5亚基的来源 ,而 ST2 4 2 4 /464和小偃 96均有可能是 1 4和 1 5亚基的提供者。通过PCR分析发现了偃麦草中 1个不同于普通小麦的麦谷蛋白基因。     

小麦尿卟啉原Ⅲ合酶的分离和纯化

外源大赖草DNA直接导入普通小麦,诱导小麦籽粒蛋白质组成及过氧化物酶、酯酶、超氧化物歧化酶同工酶谱带发生了显著变化,蛋白质分别增加44,67,85ku新组分,蛋白质和氨基酸含量分别提高16.82%,15.62%,赖氨酸增长42.94%,同工酶不同程度出现了差异谱带,酶带缺失,酶活性增减的明显变化。导入DNA的变异小麦的籽粒色泽、硬度、胚乳粉质等生物学性状都有一些改变,其变异现象在连续后代中依然表达。     

小麦不同外植体离体培养与再生研究

为了研究小麦组织培养的影响因素,对6个小麦品种的幼胚、幼穗以及成熟胚进行组织培养,研究不同基因型、外植体以及培养基对愈伤组织诱导及分化再生的影响.结果表明,不同小麦品种幼胚、幼穗以及成熟胚愈伤组织诱导率均在90%以上,且差异不大,而分化率和再生率却表现出很大差异.总体来说,供试外植体幼胚再生率最高,幼穗次之,成熟胚最低.绵阳19幼胚再生率最高,为54%,其最佳激素培养基为MS KT 1.0 mg/L IAA 1.0 mg/L;其次为小偃107和小偃22的幼胚愈伤组织.幼穗愈伤组织中绵阳19愈伤组织再生率最高,为27.5%,其次为洛阳8716.成熟胚愈伤组织培养中陕354再生率最高,为25.1%,优于其幼穗愈伤组织,其次为绵阳19的成熟胚愈伤组织.     

银杏果仁抗菌蛋白的分离纯化及其基因克隆和原核表达初步研究

通过40%及80%(NH4)2>SO4>分级盐析,CM Sephorose F.F.离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤层析;从银杏(Ginkgo biloba)种仁中分离纯化到一种表观分子量约为12 KD的抗菌蛋白.经过MALDI-TOF-MSPMF鉴定表明,该蛋白与一种新型抗菌蛋白Gnk2(ginkbilobin-2)具较高匹配率(P<0.05);根据ESI-MS/MS内肽氨基酸测序结果设计简并引物,扩增该蛋白基因一段,经比对发现与Gnk2基因序列相似性也达99%.按照Gnk2基因序列设计同源引物,利用RT-PCR克隆该抗菌蛋白全长基因,提交GeneBank(Accession No.FJ865399),并以此构建原核表达载体pGEX-GK2-1转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),SDS-PAGE和Western blot分析表明,融合蛋白在大肠杆菌中能够高效表达.     

共转化法剔除转基因小麦中的bar基因

利用PCR检测了268株转小麦黄花叶病病毒复制酶基因T3代植株,初步筛选出只含有功能基因(WYMV-Nib8基因)而不含有筛选标记基因(bar基因)的转基因小麦植株28棵,为转基因小麦的安全性种植提供了保障。同时对无标记基因的转基因植株进行了叶片涂抹除草剂验证,探讨了叶片涂抹除草剂结合目的基因PCR检测筛选无选择标记转基因植株     

哈密瓜ACC合成酶基因cDNA的克隆及全序列分析

 以新疆哈密瓜(Cucumis melo L. ) 幼叶为材料, 根据已报道的甜瓜ACC合成酶3(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid synthase, ACS) 基因片段设计特异引物, 采用RT-PCR和RACE (Rapid Amplification cDNA Ends, cDNA末端快速扩增) 等技术, 克隆得到编码哈密瓜CM e2ACS3基因的全长cDNA 序列,长1 895 bp, 编码482个氨基酸, 分子量约为54.12 kD, 等电点8.45, GenBank登录号为FJ383171。利用软件MEGA4构建进化树, 发现哈密瓜ACS3基因与黄瓜中的同类基因亲缘关系最近。哈密瓜CMe-ACS3基因的克隆及序列分析为认识此基因在甜瓜中的功能研究奠定基础。     

小麦返白系叶绿体DNA多态性研究

运用ＲＦＬＰ对小麦返白系及其亲本矮变１号的叶绿体ＤＮＡ进行多态性分析,结果显示,两者的ＥｃｏＲⅠ,ＢａｍＨⅠ,ＰｓｔⅠ和ＳａｌⅠ４种限制性内切酶酶切图谱没有差异,仅ＨｉｎｄⅢ酶切图谱的１９ｋｂ处存在差异,说明返白系叶绿体ＤＮＡ和矮变１号存在差别,这可能是导致返白系返白的直接或间接原因。