猪肠黏膜保护因子HO-1的短小芽孢杆菌表达系统建立与分析

【目的】 对猪黏膜保护因子——血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）基因进行克隆及原核表达,为研究高表达HO-1在肠黏膜损伤中的保护作用提供技术支持。【方法】 根据GenBank中公布的HO-1序列（登录号：NM_001004027.1）,利用Primer Premier 6.0设计1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增HO-1基因片段,将其与pMD19-T克隆载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行PCR鉴定;将载体pNCMO2与重组载体pMD19-T-HO-1进行Sal Ⅰ和Kpn Ⅰ双酶切,使用T4 DNA连接酶连接,利用电击转化技术将重组表达载体pNCMO2-HO-1转入感受态短小芽孢杆菌,使用IPTG进行诱导表达,应用SDS-PAGE和Western blotting分析HO-1在短小芽孢杆菌中的融合表达情况。【结果】 猪HO-1基因全长897 bp,编码298个氨基酸。双酶切后在约5 200和897 bp处分别观察到pNCMO2载体片段和HO-1基因片段,证明成功构建基因表达载体pNCMO2-HO-1;电转后的双酶切结果表明,在相同的位置观察到pNCMO2和HO-1片段,证明重组表达载体pNCMO2-HO-1成功导入短小芽孢杆菌。SDS-PAGE和Western blotting鉴定结果发现,在36.5 ku处出现了明显的蛋白印迹,表明成功表达了HO-1的重组蛋白,且为胞外分泌。【结论】 本研究成功构建了HO-1的重组原核表达载体,pNCMO2-HO-1重组载体可以在短小芽孢杆菌中诱导表达。     

豆浆脂肪氧合酶测定方法的优化及酶动力学的研究

本文以前人所确定的大豆中LOX酶活力测定方法为基础,对生豆浆中LOX活力测定方法进行稳定性方面的优化,研究热处理过程、不同浓度豆浆对LOX活力的影响,并确定LOX的最大反应速率、米氏速率常数和不同金属离子抑制剂及激活剂等酶反应动力学参数,研究结果表明:待测样品稀释300倍时,LOX活力值的变化趋势较为明显,且结果稳定;对10个不同地域大豆进行制浆,在300倍稀释倍数下测定不同加热温度的豆浆发现,LOX活力在40℃时最高,当加热至80℃时完全失活,故选择对LOX测定方法进行样品稀释300倍,加热至40℃的优化处理。优化后的方法较其它已报到方法相比,能够快速、准确地测出不同豆种所制豆浆中LOX活力值,且试验结果重复性好,稳定性高。通过对LOX酶促反应动力学的研究,确定了LOX酶促反应最大反应速率V_(max)=1. 99ΔA·min~(-1),R~2=0. 942 8,米氏速率常数K_m=452. 49μmol·L~(-1);金属离子中,钙离子、镁离子对LOX起抑制作用,当锌离子在浓度为0. 002 mol·L~(-1)时,对LOX起抑制作用,而当锌离子浓度大于0. 004 mol·L~(-1)时,则对LOX起激活作用。     

辣椒果实硬度性状的主基因+多基因遗传分析

以辣椒软果自交系830( P1)和硬果自交系832(P2)为双亲,构建P1、F1、P2、B1、B2和F2共6个家系世代群体,应用植物数量性状主基因+多基因混合遗传模型对该6个世代群体进行多世代联合分析,结果表明:辣椒果实硬度遗传符合1对加性主基因+加-显性多基因遗传模型.主基因的加性效应为0.159,多基因的加性效应和显性效应均为负向效应.且在分离世代中,多基因的遗传率均比主基因的遗传率高,环境方差对表型方差的影响占很高比重,即环境对果实硬度的遗传影响较大.     

猫肠闭结症的手术治疗

2011年9月,1只重约2．5kg的2岁母猫1个月前食了大量的鸡肉、鸡骨后不见排粪,饮食逐渐减少,精神不振,最后不食,只饮少量水,频频做排粪姿势,但无粪便排出。     

樱桃番茄新品种黄樱1号的选育

黄樱1号是以自交系HKC-1-0-0-1为母本、XH-0-0-3-1为父本配制而成的一代杂交番茄新品种。该品种中熟,植株为无限生长类型,生长势旺盛,花序长,且呈多岐排列,坐果性好,果实高圆形,平均单果质量20 g,青果果肩深绿色,成熟果为浅黄色,口感好,品质优。感青枯病和病毒病,田间表现耐热、耐寒、耐旱性强,耐涝性中等。从播种至始收103 d,每667 m~2产量2 000 kg左右,适合我国华南地区春秋季露地和保护地栽培。     

油绿80天菜薹航天诱变后变异株系的RAPD分析

利用RAPD技术对油绿80d菜薹种质航天诱变后的3份优良株系及其原始对照种进行遗传变异性分析,结果表明:3份优良株系在分子水平上都发生了不同程度的遗传变异,其中优良变异株系B的差异带最多,变异程度最大,其次为株系C,株系A变异最小.     

重庆倒置山区稻飞虱和捕食蜘蛛发生动态 及其影响因素探讨

[目的]明确重庆倒置山区稻飞虱和捕食蜘蛛的发生动态及其影响因素,为合理利用捕食蜘蛛对稻飞虱进行生物防控提供参考依据.[方法]采用平行跳跃取样法,对移栽中稻田褐飞虱(Nilaparvata lugens St?l.)、白背飞虱(Sogatella furcifera Horv.)和捕食蜘蛛(Aranea Clerck)的数量进行拍查,每点系统拍查2丛,10个点,共20丛,分析其发生动态,并探讨其影响因素.[结果]褐飞虱若、成虫的发生动态均呈单峰曲线,分别在水稻乳熟后期(4030头/百丛)和分蘖末期(865头/百丛)达峰值;白背飞虱若虫、成虫的发生动态也呈单峰曲线,均在水稻孕穗期(分别为1285和645头/百丛)达峰值;稻飞虱总量的发生动态呈双峰曲线,分别在水稻孕穗期(3870头/百丛)和乳熟后期(4030头/百丛)达峰值;捕食蜘蛛的发生动态与稻飞虱群体发生动态基本一致.相关性分析结果表明,稻飞虱总量的发生程度与日最低温度、日最高温度和日均温度呈极显著正相关(P<0.01,下同),与日均相对湿度呈极显著负相关;捕食蜘蛛发生程度与日最低温度、日最高温度和日均温度呈极显著正相关,与日均相对湿度呈显著负相关(P<0.05).[结论]重庆倒置山区中稻田稻飞虱主要以若虫为害水稻孕穗期和乳熟后期,前期以白背飞虱为主,后期以褐飞虱为主;捕食蜘蛛的发生动态与稻飞虱群体的发生动态基本一致,有明显的跟随效应;在20.6~35.0℃、相对湿度56.4%~87.7%内,温、湿度与稻飞虱和捕食蜘蛛发生程度紧密相关.     

不结球白菜小孢子胚成苗及倍性变异研究

以不结球白菜小孢子胚为外植体,对胚发育成苗过程中基本培养基、激素配比、基因型及生根条件进行了研究,并对再生植株的染色体倍性进行了鉴定。研究表明：适于小孢子胚芽分化的培养基为B5＋GA30.1 mg/L＋蔗糖3%＋琼脂1.2%,在此培养基上6号、14号、31号的子叶型胚状体的出芽率分别为53.33%,85.24%,75.55%,平均出芽数分别为5.66,3.83,3.28个;为了诱导获得健壮新根,提高植株再生率,最适宜的生根培养基为MS＋IBA 0.1 mg/L＋蔗糖3%＋琼脂0.6%,生根率达100%,平均根数9.70条。对133株再生植株进行了染色体倍性鉴定,结果发现不结球白菜自然加倍率很高,且倍性变异情况比较复杂,其中四倍体植株所占比例最高,达到56.39%,二倍体植株占39.10%,三倍体植株占3.01%,而单倍体植株仅占1.50%。     

有棱丝瓜新品种‘夏胜 1 号’

 ‘夏胜1 号’为有棱丝瓜杂交一代新品种。生长势强,抗性好,连续坐果能力强,商品率高。 短棒形,棱沟浅,皮色绿白,有花点,瓜条直,瓜长35 ~ 40 cm,横径约5 cm,单瓜质量250 ~ 350 g, 口感脆,味甜,耐贮运。中早熟,一般产量在45 000 kg · hm-2 以上;耐寒,适宜华南地区春、秋季种植。     

预混料生产质量的三大要求

预混料作为配合饲料的重要组成部分,也是提高饲料质量的关键部分,可以使动物有效地利用各种微量成分。为了实现预混料的这一用途,除要求预混料的配方组成合理外,还应具有均匀性、稳定性和安全性,本文就预混料的这三大要求分别进行了阐述。