果用银杏早期丰产措施

银杏是我国特有的经济树种 ,栽培历史悠久 ,其种仁营养丰富 ,具有良好的食用和医药价值。目前 ,国内外市场十分畅销 ,价格不断上涨 ;但由于银杏生长慢 ,结果晚 ,传统栽培方法不能满足市场需求。为此 ,我们总结出一套综合措施 ,希望能为银杏的发展起到一定的推动作用。1　选用优良品种为了提高银杏的商品质量 ,栽培时应选用优良的品种 ,如亚甜、宇香、郯城 5号、郯城9号等品种 ,这些品种具有种核丰满、粒大、光滑、洁白、出仁率高、品质优、结果早、丰产性好、抗逆性强等优良性状 ,因此是栽培的首选品种。对于老银杏园可进行多头高接优良品种…     

非核糖体肽合成酶腺苷化结构域在E.coli中的表达及底物特异性分析

侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)S62-9产生的抗菌肽(Brevibacillin,BBL)是一种非核糖体多肽,由非核糖体肽合成酶催化合成。本研究所用基因是从侧孢短芽孢杆菌(B. laterosporus)S62-9质粒基因组中克隆的一个非核糖体肽合成酶的腺苷化结构域(Nonribosomal peptide synthetase adenylation, NRPS-A)基因,根据此NRPS-A基因构建了pET21b-N1、pET21b-B2、pET22b-N1、pET22b-N3四个重组表达载体。将以上重组表达载体分别转化E. coli BL21、E. coli Rosetta(DE3)和E. coli Origami B(DE3)受体细胞,并用1 mmol/L异丙基β-d-硫代吡喃半乳糖吡喃糖苷(IPTG)在16°C 200 r/min下进行诱导,将诱导产物用SDS-PAGE检测分析。结果显示,4种重组载体在E.coliBL21中均无表达,在E.coliRosetta(DE3)大量表达但均以包涵体形式存在,在E. coli Origami B(DE3)均表达,但只有pET22b-N3这一重组表达载体出现了可溶性融合蛋白。可溶性融合蛋白对赖氨酸有较高的腺苷化活性,表明该A结构域负责抗菌肽BBL中的赖氨酸的识别和上载。该研究结果不仅为其它NRPS-A域的可溶性表达提供了方法,同时为研究抗菌肽BBL的生物合成机制提供依据。     

一种新型抗菌肽基因决定簇的克隆与序列结构特征

侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)S62-9菌株产生的抗菌肽BBL属于非核糖体合成肽,其生物合成涉及到一系列相关基因。为了获得完整的抗菌肽BBL基因决定簇,本研究基于部分已知的NRPS-A结构域基因序列,以S62-9菌株质粒DNA为模板,采用TAIL-PCR技术对NRPS-A结构域的上游进行扩增,得到一个大小为2.74kb的序列,该序列包含NRPS-A的5′末端序列、pp-binding序列以及1个ABC转运蛋白基因。该序列进一步与已知序列进行序列拼接及软件分析比对,最终获得一个大小为22.2kb的基因簇,该基因簇包含13个Bbl功能结构域,根据功能该基因簇分为3类功能相关基因:一类是编码转运相关蛋白,BblE包含3个ABC转运蛋白,负责抗菌肽向胞外渗透运输;二是催化短肽合成基因,Bbl F包含了pp-binding结构域和NRPS-A结构域,与氨基酸的装载和缩合有关,负责短肽的合成;三是肽链修饰相关基因,Bbl D、Bbl E、Bbl M、Bbl K等基因负责肽的修饰。     

来源于四种生鲜肉的单增李斯特氏菌的RAPD聚类分析

为了研究保定、石家庄及周边地区生肉来源的单增李斯特菌株彼此之间的亲缘关系,揭示不同来源、不同时间、不同地域的单增李斯特菌流行变化规律,为该病原菌的检测、防治以及溯源提供依据。对从生鲜肉分离出的129株食源性单增李斯特菌进行RAPD扩增,用NYSYS-PCversion 2.1分析软件采用不加权成对算数平均法(UPAMA)进行聚类分析。采用单一引物(RP1)对129株生肉来源的单增李斯特菌进行RAPD聚类分析,得到了129株单增李斯特菌的DNA指纹图谱,绘制出其亲缘关系的聚类树状图。结果表明:129株生肉来源的单增李斯特菌可分成6个基因聚类,其中第Ⅱ类为保定、石家庄地区的主要流行种群;对单增李斯特菌遗传多态性及其随时间、地域及其菌株来源的变化进行分析,表明该地区生肉来源的单增李斯特菌由于取样时间、地点不同,其基因聚类差异明显,相同时间、相同地点的单增李斯特菌株之间亲缘关系较近。本研究表明四种生肉来源的单增李斯特菌具有广泛的遗传多态性;单增李斯特菌的流行具有明显的时间性、地域性。     

3种防治剂对重茬大棚草莓生长的影响

研究了大棚土壤经溴甲烷、无公害防治剂、太阳能防治剂处理后对重茬草莓叶片的光合速率、SOD酶活性、可溶性蛋白质、叶绿素含量以及果实产量和品质的影响。结果表明:用溴甲烷、太阳能防治剂、无公害防治剂处理后草莓叶片的SOD酶活性分别比对照降低低2.39%、0.6%、3.28%,叶绿素含量分别比对照提高,12.08%、2.73%、8.88%,光合速率显著高于对照,并且草莓的产量和品质显著高于对照。综合评价认为溴甲烷有剧毒,农业部已禁止使用;太阳能防治剂处理工序复杂、费用较高,因此应用无公害防治剂是较理想的防治草莓重茬病的方法。     

单核增生李斯特菌ERIC-PCR分子分型方法的建立

以单核增生李斯特菌10403s基因组为模板,运用L16(54)正交试验,对影响ERIC-PCR的多个因素,包括Mg2+、dNTP、引物、模板和rTaq酶浓度等进行优化,并应用于不同来源的单核增生李斯菌株的ERIC-PCR,其扩增图谱表现出明显的多态性。结果表明:建立的ERIC-PCR反应体系和程序适合于单核增生李斯特菌进行分子分型。     

黑曲霉A9葡萄糖氧化酶基因克隆及其酵母表达载体构建

以黑曲霉A9基因组为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)直接对葡萄糖氧化酶(GOD)基因进行PCR扩增,再将PCR产物克隆入pMD18-T载体,经DNA测序,该基因为1 743 bp,编码581个氨基酸。该基因序列已在GeneBank注册,登录号为DQ836361。用限制性内切酶切下目的基因,插入到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建成表达载体pPIC9K-GOD。重组毕赤酵母表达载体pPIC9K-GOD的构建,可望获得超量表达的高活性葡萄糖氧化酶,为研制高品质的酶制剂奠定基础。     

药剂处理对重茬大棚草莓根际微生物的影响

在初果期、盛果期和采果末期3个时期,研究了3种处理（太阳能防治剂、无公害草莓重茬病防治剂、溴甲烷）对重茬大棚丰香草莓根际土壤微生物数量的影响,从根际土壤中分离筛选得到14个纯菌株并做了初步的菌属鉴定,试验结果表明：药剂处理后的土壤比对照真菌、放线菌数量减少,细菌数量增多,真菌与细菌的比值显著降低,并与果实产量有显著相关性;线虫数量的变化趋势为初果期多,盛果期、采果末期逐渐减少。