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猪白细胞介素-12的分子克隆与序列测定 总被引:5,自引:0,他引:5
为研究白细胞介素-12在机体免疫应答中的作用。从猪外周血提取单个核细胞(PBMCs),用含LPS的培养基培养细胞,从培养2h和12h的活化细胞中分别提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出编码猪IL-12两个亚基的基因,其大小分别为720bp(P35)和1044bp(P40),将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后,回收纯化,用SacI和SalI双酶切后,分别将其连接至pUC18质粒上,进行质粒PCR和SacI,SalI双酶切鉴定后筛选阳性克隆,并进行序列测定和分析,序列分析表明P35基因开放阅读框含有669个核苷酸,序列与人,小鼠和羊同源性分别为79.2%,37.6%,86.1%,P40基因开放阅读框含有975个核苷酸,与人和小鼠,羊基因序列的同源性分别为79.5%,53.1%,84.3%。结果表明克隆到了猪白细胞介素-12P35和P40两个亚基的基因,得到的P35基因序列与国外报道完全一致,P40基因序列与发表的序列有4个碱基差异,提示P40基因可能存在多态性。 相似文献
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选用6个不同基因型的大豆品种,运用框栽的方法,研究了大豆蔗糖含量的动态变化。结果表明,大豆植株营养器官中蔗糖含量呈单峰曲线变化,峰值出现在开花期;荚果中的蔗糖含量先升高后降低,叶部和根中的蔗糖含量较高,是合成和贮藏蔗糖的主要部位;茎部蔗糖含量处于最低水平,不同大豆品种间的蔗糖含量没有表现出明显的规律性;绥农14叶片和叶柄的蔗糖积累呈极显著正相关(r=0.945**),丰收10和秣食豆叶片和叶柄蔗糖含量呈显著正相关(r=0.754*,r=0.823*),绥农14和龙选1号叶片和茎的蔗糖含量达到显著正相关水平(r值分别为0.724、0.791)。 相似文献
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秋淡蔬菜良种──安阳大红茄455000河南省安阳市蔬菜研究所张世田,郭海龙一、主要特征特性:安阳大红茄株高120厘米,开展度80厘米,茎秆粗壮抗倒伏,叶片大,叶长30厘米,叶宽24厘米,绿色,茎和叶脉紫红色,叶面有紫色茸毛。二权分枝,8~9片叶出现门... 相似文献
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枯草芽孢杆菌是我国农业部允许作为饲料添加剂的两种芽孢杆菌之一 ,其已被越来越多地研制成饲用微生态制剂。因其制剂是无毒、无残留、无污染的“绿色”添加剂 ,故具有广阔的发展前景 ,并已在畜牧业、饲料业广泛应用 ,显示巨大的社会效益和生态效益。枯草芽孢杆菌具有很强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等活性 ,能产生抗菌素 ,在动物肠道内具有较强生物夺氧能力。这些特性对促进动物营养的消化吸收、提高动物的饲料转化率、防病和促进生长起到重要作用。现阶段的工业化生产中 ,常存在着发酵周期长、芽孢形成率低、成本高等问题 ,对此我们对发酵培… 相似文献
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猪白细胞介素-10的分子克隆与序列测定 总被引:2,自引:0,他引:2
从LPS活化的猪外周血单个核细胞(PBMC)提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出猪白细胞介素-10(IL-10)的编码基因,将其连接到pUC18质粒上,然后进行BamHI和HindⅢ双酶切鉴定筛选阳性克隆,序列分析结果表明该基因开放阅读框由528个核苷酸组成,推测产生的编码产物由175个氨基酸组成。猪IL-10基因与人、大鼠和小鼠基因序列的同源性分别为84%、79%和795,与国外报道的猪IL-10基因序列完全一致,试验成功克隆到了猪IL-10基因。 相似文献
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应用竞争PCR定量检测猪IFN-γmRNA 总被引:2,自引:0,他引:2
运用RT-PCR从经ConA体外刺激培养的猪外周血单核细胞(PBMC)提取的细胞总RNA中扩增猪γ-干扰素(IFN-γ)的部分片段,经酶切鉴定后双酶切缺失中间一小片段,将余下的2个较大片段连接,并用相同的引物在相同条件下扩增连接产物,从而获得截短的同源性片段.将其纯化后克隆于pMD18-T载体,重组质粒经酶切和PCR鉴定后进行序列测定,验证无误后作为竞争性模板内对照,一定比例稀释后分别与等体积经刺激培养的PBMC总RNA反转录产物进行PCR,产物电泳后经扫描分析获得各目标条带与竞争条带的溴化乙锭(EB)嵌入光密度值(IOD),经校正后取上述两者比值的对数值作为Y轴,取已知竞争模板相应浓度的对数值作为X轴,绘制成竞争曲线.应用建立的竞争PCR对不同样品重复试验表明,本方法操作简单,结果可靠,稳定性高,适用于猪IFN-γ mRNA的定量检测. 相似文献
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