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选取15头体况相似的健康肉牛作为研究对象,随机分为运输0h组、运输3h组和运输6h组,每组5头肉牛,采用公路运输方式运输(平均速度为80km/h)。采集各组牛肝脏和脾脏组织样本,用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量PCR(qRT-PCR)2种试验方法检测各组肝脏和脾脏组织中应激蛋白-热休克蛋白70(HSP70)和急性期蛋白-C反应蛋白(CRP)含量的变化。qRT-PCR检测结果显示:与运输0h组相比,运输3h和6h肝脏组织中HSP70mRNA的表达量极显著升高(P0.01);而脾脏组织中HSP70mRNA只在运输应激6h后表达量显著增加(P0.05)。与0h组相比,运输应激后肝脏组织中CRP mRNA的表达量极显著升高(P0.01),脾脏组织中CRP mRNA的表达量显著升高(P0.05)。ELISA检测结果显示:与0h组相比,运输应激3h和6h肝脏中的HSP70质量浓度极显著升高(P0.01),脾脏中HSP70的质量浓度在运输6h后显著升高(P0.05);肝脏和脾脏CRP的表达在运输应激6h后极显著升高(P0.01)。结果表明:不同运输时间的运输应激可导致肝脏和脾脏中HSP70和CRP的浓度和mRNA转录水平升高,且肝脏中HSP70和CRP的表达量高于脾脏。HSP70和CRP可作为肉牛运输应激候选诊断标志物。 相似文献
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将30只清洁级Wistar大鼠随机分为试验组、普通对照组及应激对照组。试验组用自拟抗应激复合添加剂(维生素C+维生素E+碳酸氢钾+γ-氨基丁酸,羧甲基纤维素钠助悬)进行灌胃,2对照组灌胃0.5%羧甲基纤维素钠(CMC)溶液。1周后利用摇床模拟运输应激,检测大鼠血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、血糖(GLU)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、糖皮质激素(GC)以及部分细胞因子(IL-2、IL-4、IL-6和TNF-α)等应激血清标志物水平。结果显示,大鼠经2 h模拟运输应激后,各项指标均有不同程度升高,而自拟抗应激添加剂对运输应激引起的CK、ACTH、GC、IL-2、IL-4和IL-6水平升高有明显的抑制作用;表明自拟的抗应激复合添加剂对抵抗大鼠运输应激具有较好的效果。 相似文献
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将170只SPF级Wistar大鼠随机分为常温对照组及冷刺激试验组,冷刺激试验组又分为急性应激组及慢性应激组.急性冷刺激时间为3、6、12、24 h,慢性冷刺激时间为3、6、9、12d.试验大鼠均于人工气候室中饲养,对照组及冷刺激试验组的饲养温度分别为(24±0.05)C和(4±0.05)C.经不同时间强度的冷刺激后,采用心脏采血,采集大鼠血液,并分离血清,利用Luminex xMAP技术检测大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10以及IP-10的含量.结果显示,冷刺激能够提高各试验组大鼠血清中IL-6的含量,急性应激组与对照组相比TNF-α、IP-10 、L2和IL-4的含量变化水平呈上调趋势,而慢性应激组TNF-α、IL-2和IL4的含量变化呈下调趋势,IFN-γ和IP-10的含量在冷刺激9、12d时显著增强(P<0.05).研究结果表明,冷刺激能够引起大鼠炎症相关细胞因子以及辅助性T细胞亚群的分泌,随着应激时间的延长,细胞免疫(Th1)向体液免疫(Th2)漂移,从促炎症细胞因子(特点是IL-1和TNF-α的升高)向抗炎症细胞因子(特点是伴随IL-4和IL-10的增强)转化,机体产生细胞免疫并刺激机体产生体液免疫. 相似文献
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为构建表达籽鹅α-烯醇化酶(ENO1)基因的重组腺病毒,本研究利用RT-PCR技术,从籽鹅卵巢组织中扩增ENO1基因,克隆至pShuttle-CMV穿梭载体中,并利用I-CeuI与I-SceI将ENO1基因的表达框切下,连接到腺病毒骨架的pAdxsi载体中。采用PacⅠ酶切,将其线性化,并转染至293(R)细胞进行病毒的包装,制备重组腺病毒。实验结果显示,制备的表达ENO1重组腺病毒的滴度达到1.1×1011pfu/mL。将重组腺病毒感染籽鹅卵泡颗粒细胞后,荧光定量RT-PCR与western blot检测显示细胞中ENO1基因和蛋白表达水平显著高于正常细胞(p<0.05),这些结果为研究ENO1生物学活性及功能奠定了基础。 相似文献
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急性冷暴露对仔猪PBMC中HSP70和血浆抗炎性细胞因子IL-4、IL-10的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
为了探讨急性冷应激对仔猪免疫系统的影响,将18头45日龄"约克夏"仔猪随机分成常温对照组、冷暴露组和冷暴露并糖皮质激素受体阻断组.常温组在18~20℃下、冷暴露各组在4~8℃环境下分栏饲养.冷暴露时间持续12 h,在冷暴露开始后分6个时间点采血并分离血浆和外周血单个核细胞(PBMC),分别使用Western-blotting法测定淋巴细胞中HSP70的表达量;双抗体夹心ELISA法检测血浆中IL-4和IL-10水平.结果显示:冷暴露组IL-4和IL-10水平在冷暴露6、9 h时比开始前有显著升高(P<0.01),且IL-4与IL-10呈强相关(r=0.990 1);糖皮质激素受体阻断组IL-4水平在冷暴露1h时显著升高(P<0.01),IL-10在6 h时有显著升高(P<0.01),IL-4与IL-10呈强相关(r=0.873 1);冷暴露各组HSP70在冷暴露1、3、6、9、12 h时均显著升高(P<0.01),HSP70与IL-4/IL-10呈弱相关.本试验显示,急性冷暴露能使IL-4、IL-10和HSP70的表达增强,且阻断糖皮质激素对它们之间的相关性有一定影响. 相似文献