基因芯片技术及口蹄疫病毒基因芯片研究进展

口蹄疫的暴发与流行给世界各国的畜牧生产、社会经济和国际贸易构成严重威胁并造成巨大的经济损失,经典的血清学和PCR检测方法越来越不适应进出口动物检疫的快速、准确、高通量的要求.建立一种快速的诊断方法,使其在很短时间能够区别各血清型口蹄疫和其他水泡性疾病是非常必要的.口蹄疫病毒基因芯片包括155个寡核苷酸探针,总长35 bp～45 bp,设计在VP3-VP1-2A区,既有共有的病毒型别,也包含特异的血清型别.这项技术的优点是能在单一的芯片上检测多元病原体.     

基于主成分分析的常绿—半常绿杨树磷素利用率评价

采用砂培试验,对常绿杨3个无性系在低磷胁迫下的苗高生长量、地径生长量、根冠比、生物量、单叶面积、叶绿素含量及光合速率等7个指标进行主成分分析.结果表明,选用的7个指标之间存在显著的相关性.选取代表常绿杨生长性状78.58％的前2个主成分作为常绿杨低磷胁迫下的生长性状选择的综合指标,得出3个无性系中磷素利用率最优是A-61/186,其次是A-65/27、A-65/31.     

基于GIS的城市水果物流分区配送辅助系统

目前,水果产业随着需求骤然升温,随之也反映出了水果物流技术理论和实践的相对滞后.针对这一状况,根据区位优势原理,构建了城市水果物流分区配送模型,并利用遗传算法优化方法,开发了基于GIS的分区配送辅助决策系统.仿真结果表明:系统能有效地解决配送企业城市水果配送分区及路径优化问题,实现配送的有效决策和管理.     

细胞内转录拯救Asia1型口蹄疫病毒

 【目的】建立口蹄疫病毒（FMDV）感染性分子克隆的体内拯救技术平台,为深入研究该病毒基因组的结构与功能奠定基础。【方法】将置于T7启动子下的FMDV Asia1/JS/China/2005株全长cDNA的真核重组质粒pFMDV-A经Not I线化后和表达T7 RNA聚合酶的真核质粒pcDNAT7P共转染BHK-21细胞,进行病毒体内拯救的研究。【结果】转染细胞盲传第3代48 h后出现致细胞病变（CPE）,第4代10 h出现典型的CPE。RT-PCR、间接免疫荧光、电镜等均检测到了拯救的FMDV,而且存在分子标签,表明构建的FMDV全长cDNA分子克隆在BHK-21细胞内成功包装出FMDV。拯救毒与亲本毒对乳鼠的致病力（LD50）差异不显著,具有相似的生物学特征。共转染试验重复多次,均拯救到FMDV病毒。【结论】成功建立了基于质粒为基础的FMDV的体内拯救方法。     

通过耐酸性改造在昆虫细胞中组装FMDV空衣壳结构

 【目的】口蹄疫病毒（FMDV）对酸很敏感,当pH值低于7时,二十面体对称的衣壳结构就会裂解成12S的五聚体。而昆虫细胞培养基的正常pH值在6.3左右,很难应用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中组装天然的FMDV空衣壳结构。本研究旨在通过耐酸性改造,应用杆状病毒表达载体在昆虫细胞中组装产生AsiaⅠ型FMDV空衣壳结构。【方法】应用定点突变技术改变VP3上的H140和H143为亮氨酸,以提高空衣壳对酸的耐受性。将改造和未改造的P12A基因和3C基因插入带双启动子的杆状病毒转移载体pFastBacTM Dual 中,通过在大肠杆菌内转座重组,获得重组杆粒,转染Sf 9细胞,获得两株表达FMDV全衣壳蛋白的重组杆状病毒Bac mP12A3C和Bac P12A3C。重组杆状病毒经增殖后感染High FiveTM细胞,进行目的蛋白的表达。【结果】通过Western blotting检测表明目的基因均获得表达,且衣壳蛋白被3C蛋白酶成功地加工裂解。双抗体夹心ELISA和免疫荧光检测结果表明表达蛋白主要集中在细胞膜上,且具有很好的抗原性。通过电镜观察到P12A基因改造的重组杆状病毒在昆虫细胞内产生了直径为25～30 nm的空衣壳结构,而P12A基因未改造的重组杆状病毒观察到很多直径小得多的结构。【结论】本研究首次用电子显微镜在昆虫细胞中观察到FMDV完整的空衣壳结构,为基因工程亚单位疫苗和新型诊断试剂的研发奠定了基础。     

仔猪口蹄疫母源抗体衰减规律研究

为了明确仔猪体内A型口蹄疫母源抗体衰减规律,为仔猪口蹄疫疫苗首免时间的确定提供理论依据,选取预产期相同、口蹄疫抗体水平(A型)有差异的5头母猪,每头母猪随机选取5头仔猪并分16个时间点采集外周血,利用液相阻断ELISA对仔猪体内A型口蹄疫抗体进行检测,评估其消减规律。结果显示:脐带血不传播母源抗体,仔猪获得母源抗体保护的唯一途径是吃母乳;仔猪采食初乳后体内A型口蹄疫母源抗体可在吃初乳后当天达到峰值,而后随时间增加而降低;当母猪分娩时抗体水平为1∶1024时,仔猪63日龄左右体内抗体水平降低至1∶45;当母猪分娩时抗体水平为1∶720时,仔猪56日龄左右体内抗体水平降低至1∶45;当母猪分娩时抗体水平为1∶360时,仔猪28日龄左右体内抗体水平降低至1∶45。仔猪体内A型口蹄疫抗体衰减时间和分娩时母猪抗体水平呈正相关性。本文研究结果为制定科学合理的仔猪口蹄疫疫苗免疫程序提供数据支撑。     

A型口蹄疫病毒多基因重组腺病毒载体的构建

采用体外连接法构建了含有A型口蹄疫病毒(FMDV)P1-2A和3C或3ABC基因的重组腺病毒表达载体.利用PCR技术分别扩增得到P1-2A、3C和3ABC基因,经XbaⅠ/BamHⅠ和BamHⅠ/KpnⅠ双酶切之后,与XbaⅠ/KpnⅠ双酶切的穿梭载体pShuttle2大片段连接,获得重组穿梭质粒pSh-P12a3c和pSh-P12a3abc.然后用I-CeuⅠ和PI-SceⅠ双酶切穿梭质粒回收目的基因表达盒,通过体外连接法将目的基因表达盒与BD Adeno-X Vi-rus DNA连接,转化DH5α感受态菌.获得两个重组腺病毒质粒分别命名为A-P12a3c和A-P12a3abc,经PCR、酶切及测序鉴定正确.用PacⅠ酶切后转染HEK293细胞,取转染细胞裂解液上清连续传至第5代时,在24~48 h内细胞完全病变.分别提取第3、7代病毒DNA,可扩增出目的基因,表明目的基因已整合到腺病毒基因组内,且能稳定传代.     

我国口蹄疫流行现状与控制策略

[目的]科学研判我国口蹄疫流行形势,明确今后我国口蹄疫防控的重点工作。[方法]以口蹄疫分子流行病学和我国口蹄疫疫情情况、国家口蹄疫参考实验室疫情监测、主动监测数据为基础,分析了我国口蹄疫流行的现状和特点。[结果]目前,我国口蹄疫流行呈零星散发,毒株复杂,但总体疫情形势平稳。通过口蹄疫分子流行病学分析,表明我国目前主要流行有O型Mya-98毒株、A型Sea-97毒株,而这些毒株均来源于东南亚国家,污染面广,危害严重。[结论]境外流行毒株的威胁依然存在,防堵境外毒株的传入,加强威胁毒株的储备研究,加强免疫与免疫监测仍然是今后工作的重点。     

福建省森林生态系统公益价值增长率及其空间关联分析

在估算1987～1997年福建省森林生态系统公益价值的基础上，分析了福建省1987～1997年森林生态系统公益价值增长率，结果显示这一时期福建省森林生态系统公益价值增长率普遍较高，除局部县、市增长率为负值之外，大部分地区增长率均为正值。并用空间统计分析方法研究了这一时期福建省森林生态系统公益价值增长率的空间关联关系，1987～1997年福建省森林生态系统公益价值增长率可分为福建省南部森林生态系统公益价值高增长率区域、福建省东部森林生态系统公益价值较高增长率区域、福建省西北部森林生态系统公益价值较低增长率区域及部分沿海地区森林生态系统公益价值低增长率区域，最后对实证研究结果进行了分析。