猪链球菌2型表面蛋白sp融合基因的构建与高效表达

利用PCR方法从猪链球菌2型四川资阳分离株449-1扩增出sp基因,克隆到pMD18-T载体中,构建出克隆载体pMD18T-sp。以SalⅠ和BamHⅠ从pMD18T-sp中切下目的sp基因片段并克隆到质粒pMAL-p2X中,构建重组表达质粒pMALp2X-sp,转化宿主菌TB1中进行诱导表达。分析表明sp基因序列比GenBank报道序列AY864331少了270 bp;SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组菌株表达出了136 Ku左右的目的蛋白MBP-Sao,目的蛋白为可溶表达,约占菌体蛋白总量的12.3%。表达的蛋白可用Amylose树脂纯化。将纯化的融合蛋白MBP-Sao免疫家兔,所得抗血清经ELISA检测,结果显示融合蛋白MBP-Sao包板抗体效价达1:16 000,且与猪链球菌2型和9型呈阳性反应,而与沙门氏杆菌及巴氏杆菌呈阴性反应。本试验对猪链球菌2型表面蛋白Sao的高效表达及其免疫原性进行了初步研究,为进一步研究猪链球菌2型表面蛋白Sao的结构和功能奠定了基础。     

大肠杆菌O_(157)多重PCR快速检测方法的建立

E. coli O157∶H7是肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)最有代表性的血清型,感染后能够导致人的出血性结肠炎(HC)、溶血性尿毒综合征(HUS)和血小板减少性紫癜(TTP)[1].     

蜜脆苹果的生长习性及栽培要点

1 病虫害基本情况 大棚黄瓜主要病害是白粉病、霜霉病,其次是灰霉病、细菌性角斑病、炭疽病,黄瓜枯萎病为零星发生。虫害主要有白粉虱、斑潜蝇、瓜蚜、瓜绢螟、红蜘蛛和茶黄螨等,其中前3种为害较重。     

苹果病虫害的物候期防治措施

休眠期。此期各种病菌及害虫都以不同的方式、形态进入越冬休眠期。主要工作是在土壤接近封冻时翻园，冬剪时剪除病虫枝，清理修剪后的枝条，用护树宝或果树伤口愈合剂封剪锯口，人工摘除树上虫卵．树干涂白等。     

绿脓杆菌外毒素A受体结合亚单位基因的克隆与表达

为防治绿脓杆菌感染造成的细胞坏死及多器官衰竭，本试验克隆了含绿脓杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ）结合亚单位（Ⅰ区）和部分跨膜亚单位（Ⅱ区）编码３０９个氨基酸的约１０００ｂｐ的基因片段，以正确阅读框架将该片段置于原核高效表达Ｔ７启动子下游，构建了高效表达质粒ｐＥＴ－ＥＡＢ。转化宿主菌ＢＬ２１（ＤＥ３）、ＨＭＳ１７４（ＤＥ３）、ＨＭ１７４（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ和ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ后，经ＩＰＴＧ诱导４ｈ，均表达了外源目的基因蛋白，其中ＢＬ２１（ＤＥ３）和ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ的表达量明显高于其他宿主菌。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，外源蛋白分子量约３４０００，与ＰＥＡⅠ区和部分Ⅱ区基因所编码的蛋白理论估计值相符，命名为ＰＥ３４。凝胶薄层扫描显示，ＰＥ３４含量占菌体蛋白总量的５６％。Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ检测证明ＰＥ３４为所需目的蛋白     

重组绿脓杆菌外毒素A受体结合区蛋白的初步复性及细胞生物学活性检测

用逐步稀释透析法将纯化的大肠杆菌表达的重组绿脓杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ）受体结合区蛋白初步复性,复性后的可溶性蛋白用于竞争抑制ＰＥＡ的细胞毒性实验。将１０μｇ／Ｌ的ＰＥＡ与其敏感细胞Ｌ９２９共孵育,３６ｈ左右可见细胞发生病变死亡,而同时加入复性的重组ＰＥＡ受体结合区蛋白的培养细胞孔与未加ＰＥＡ阴性对照培养细胞一样仍分裂增殖,这种ＰＥＡ细胞毒性抑制作用可持续到所有培养细胞老化死亡。结果表明,重组ＰＥＡ受体结合区蛋白可在体外竞争抑制ＰＥＡ对Ｌ９２９细胞的毒性。     

日本苹果考察报告

2007年10月27日至11月10日,笔者一行5人对日本、韩国的苹果生产进行了全面考察,现将日本苹果的考察情况归纳如下:     

惠民短枝苹果优质高效栽培技术

陕西渭北短枝红富士苹果栽培面积约1.8万hm2,普遍由于栽植过密,造成果园郁闭,光照不良,枝组退化,结果能力严重下降,果品质量差,导致销售不畅。针对这一问题,于2001—2005年我们进行了短枝红富士苹果优质高效栽培技术研究,取得了显著效果,现将试验结果总结如下。1试验示范样板园     

2006年套袋苹果黑点病发生原因及防治对策

笔者于2006年9月至10月上旬,对陕西白水县7个乡镇14户果农果园的苹果黑点病发生情况进行了调查。从调查结果看,2006年黑点病发病相当严重,果实黑点病平均发病率达20.5%,部分果园高达80%,严重影响了果实的商品质量。1重发原因1.1用药方面1)忽视农药质量。不少果农购药时图便宜,不重视质量,所购农药有效成分含量达不到标签上写的数量或国家登记的数量,有的农药有效成分不是标签上标的成分或国家登记的成分。2)用药次数少。调查发现,用药次数多,尤其是套袋前用药次数多,发病相对较轻。套袋前用药在3次以上的,能有效减轻病害的发生。白水县雷芽…