基于GR79 EPSPS筛选标记的抗虫抗除草剂表达载体构建及抗性鉴定

虫害和草害是农业生产中两大主要危害。目前,尽管转基因抗虫和抗除草剂作物相继报道和应用,然而我国抗虫抗除草剂复合性状作物培育仍然明显滞后,而且多依靠传统杂交选育的手段,费事费力、周期长。根据苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis, Bt）Cry1Ac蛋白结合结构域和毒性结构域特征,人工合成杀虫基因cry1Ac-2.5。同时,利用抗除草剂基因GR79 EPSPS替换卡那霉素筛选标记,构建基于草甘膦除草剂筛选标记的复合抗虫抗除草剂植物表达载体,并转化烟草。qRT-PCR结果表明转基因烟草cry1Ac-2.5和GR79 EPSPS基因转录水平均成功表达,经Bt和GR79试纸条检测表明上述基因在蛋白水平正确翻译。抗性实验表明,转基因烟草愈伤经草甘膦筛选,阳性率达到80%,且转基因烟草耐受100 mg/L草甘膦处理。抗虫实验表明,饲喂cry1Ac-2.5转基因烟草4 d后,棉铃虫幼虫死亡率为90%左右,表明人工基因cry1Ac-2.5具有显著的的抗虫效果。以上结果表明,构建的抗虫抗除草剂植物表达载体（Cry1Ac-2.5+GR79 EPSPS）将抗虫基因和抗除草剂基因有效合并,对于快速培育抗虫抗除草剂作物具有指导意义。     

植物monellin甜蛋白基因的细菌化改造合成及其在大肠杆菌中的表达

根据西非植物Dioscoreophyllum cumminisii果实中分离到的monellin甜蛋白的氨基酸序列,首次按照细菌优化密码子,人工合成了全长294bp的monellin甜蛋白基因。克隆后序列分析表明,所获得基因与设计相符。构建了该基因的表达载体pGESP9。经42℃诱导表达,发现所合成甜蛋白基因可在大肠杆菌BL21中高效表达,表达量占菌体可溶性蛋白的22.8%。分离纯化monellin,经测定其甜度是相同重量蔗糖的1100倍,且甜味纯正持久。     

用基因枪法将Bt杀虫基因导入水稻愈伤组织的研究

从水稻成熟胚诱导出的愈伤组织经继代培养后可以产生大量的胚性愈伤组织。本研究采用基因枪法转化上述胚性愈伤组织 ,在附加羧苄青霉素 (5 0 0 μg· m L-1)和卡那霉素 (5 0 μg·m L-1)的选择培养基上进行抗性愈伤组织的筛选 ,在附加羧苄青霉素 (5 0 0 μg· m L-1)和卡那霉素 (2 5 μg· m L-1)的分化培养基上诱导抗性芽。GUS酶活性检测和对基因组 DNA作 PCR检测结果均为阳性 ,证明外源目的基因 (Bt)已在寒地水稻抗性愈伤组织中整合并表达。抗性再生植株的 GUS酶活性及 PCR检测正在进行中     

利用花粉管通道法将cry Ia基因导入小麦

利用适用于禾谷类作物的表达载体pGU4ABBar,采用花粉管通道法,将人工合成的苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因cry Ia导入了优良冬小麦品系西农2208和西农132,经PCR和Southern blot鉴定,证明获得了27株导入了cry Ia基因的转基因植株,转化率约为1.13%～1.21%,并通过Western blot鉴定检测到了目的蛋白的表达.     

Bt棉不同品系对棉铃虫杀虫效果的比较

转 Bt(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫蛋白基因棉花 (Bt棉 )是第一种不影响害虫天敌 ,且对棉铃虫 (H elicoverpa armigera Hübner )具有杀虫活性的转基因棉花品系〔5〕,由美国孟山都公司生产的 Bt棉品系“新棉 3 3 B”1 998年在我国河北省推广应用。我国“863”项目自主研制的 Bt棉已经有多个品系于 1 998年在我国开始商业化种植 ,并不断有新的 Bt棉品系被选育出来。但在实际应用中发现 ,目前在我国推广应用的国内外培育的 Bt棉品系均存在着对棉铃虫杀虫活性的时空差异〔1,3,4〕,尤其是在我国华北地区 ,Bt棉的杀虫活性在棉铃虫的第三…     

转基因抗虫杂交棉湘杂棉8号的选育

介绍了转基因抗虫杂交棉湘杂棉8号的选育经过、特征特性及在国家与省级区试与生产试验中的产量表现，提出了其栽培管理及病虫防治要点。     

抗虫棉花新品种鲁棉研16

鲁棉研16是山东棉花研究中心与中国农科院生物技术研究所合作选育的转Bt基因抗虫棉新品种.以中棉所12为母本,泗棉3号转Bt基因种质材料为父本杂交,经连续南繁加代和鉴定选择育成.1998～1999年参加山东省抗虫棉区域试验,2000年参加生产试验.2001年5月经山东省农作物品种审定委员会审定.     

制备棉花幼蕾高质量总RNA的方法比较

 以棉花和烟草的叶片及幼蕾为材料,分别用Trizol法和热硼酸/蛋白酶K法提取总RNA,对获得总RNA的量和纯度测定。结果表明,热硼酸/蛋白酶K法提取棉花幼蕾总RNA效果最好,得到的RNA具有质量高、完整性好等优点     

棉花恢复系中含有26S rRNA序列的GH18Rorf392基因克隆

 以Y18R×P30A杂交F₁代自交材料播种后根据雄蕊形态学判断其育性,然后分别提取可育和不育材料现蕾3～5 d的幼蕾总RNA。通过抑制差减杂交的方法获得来自棉花恢复系的EST序列之后,以该EST序列设计引物再做5’和3’RACE,从而获得其全长cDNA序列。由于该基因来源于陆地棉（Gossypium hirsutum）恢复系Y18R,并且编码392个氨基酸的蛋白质,因此,将其命名为GH18Rorf392。该基因的5’端是一个全新的序列,3’端含有26S rRNA序列。该基因可能对研究棉花育性相关功能有帮助。     

转基因抗虫杂交棉鲁RH-1

鲁 RH- 1是山东省种子管理总站牵头的棉花杂优利用协作组选育的抗虫杂交棉组合。该组合1 997— 1 998年参加全国抗虫棉区域试验 ,1 999年参加全国和山东省生产试验。 2 0 0 1年 4月通过山东省农作物品种审定委员会审定。选育方法　利用抗 A1核不育系为基础材料选育出新的核不育