转Bt基因棉花品系对红铃虫、黄萎病的抗性及纤维品质测定结果初报

1　材料和方法1 .1　 6个转 Bt基因品系均为“863”抗虫棉选育项目组育成。将 GFMCry A基因导入泗棉 3号 ,在人工病圃、自然病地、海南、内地不同生态气候类型反复、高压、穿梭系统选择。1 .2　抗红铃虫鉴定。田间自然虫源 ,网室接虫 ,每平方米接 1头 (华中农业大学 )。1 .3　抗黄萎病鉴定。人工黄萎病圃、动态鉴定 (7月1 4日、8月 6日、8月 1 4日、1 1月 30日剖秆 ) ,取相对病情指数 (IR)和抗病效果 (ER)最高值 ,以冀棉1 1指数 50为对照 (华中农业大学 )。1 .4　纤维品质鉴定。霜前花混合取样 ,HVI90 0系列测试 (农业部棉花纤维品质…     

表达K_88K_99双纤毛抗原及K_99纤毛抗原的产肠毒素大肠杆菌的构建

应用转化法:将带有K_99纤毛抗原的重组质粒PHK_99分别转化到具有K_88纤毛抗原的产肠毒素菌株B_6(O_149K_91K_(68)ac)“和不具K_88抗原的产肠毒素菌株(O_14K_85),获得了35株抗氨苄青霉素的转化子。在这35个转化子中,有32个能同时表达K_(88)、K_(99)两种纤毛抗原,有3株能表达K_(99)纤毛抗原。这些转化子仍具有产肠毒素的特性。     

双价杀虫基因植物表达载体的构建及其在烟草中的表达

本文报道了抗虫植物基因工程研究中的新进展－转双价杀虫基因烟草的获得。用ＰＣＲ方法来自豇豆的胰蛋白酶抑制基因进行了修饰,在基因５‘及３’端分别加入了克隆所需地ＰｓｔＩ和ＳａｃＩ限制性酶切位点,去除了原基因５‘端非翻译区序列,并进一步定点突变了基因内存存在的ＥｃｏＲＩ位点。     

花椰菜花叶病毒（CaMV）35S启动子在转基因棉花中的表达

利用GUS作为报告基因，通过GUS组织化学定位法检测棉花转化愈伤组织、体细胞胚，R0代棉花根、茎、叶、花器官以及正在发育的胚GUS基因表达情况，详细阐述了CaMV 35S启动子在棉花细胞中的表达轮廓。结果表明，在愈伤组织细胞有丝分裂和增殖过程中GUS基因能稳定表达并遗传给后代细胞；在根、茎、叶细胞中检测到GUS表达活性。在     

子房注射法获得转基因抗虫棉植株研究

采用子房注射法将构建在植物表达载体ｐＢＩ１２１．１上的Ｂｔ杀虫基因导入棉花品种石远３２１、中植３７２、８２２和辽棉９００１中,获得８株转基因植株。经温室抗虫性鉴定,８株转基因植株对棉铃虫都表现出较好的抗性。同时对这８棵株叶片进行的ＰＣＲ检测结果证明Ｂｔ基因已经整合进植物基因组中。     

棉花遗传转化和植株再生的研究

利用农杆菌（ＧＵＳ基因（β－葡萄糖苷酸酶基因）为标记基因，ＮＰＴⅡ为选择基因）用共培法对棉花下胚轴切段直接转化，在０．１ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ和０．１ｍｇ／ＬＫＴ的ＭＳ的培养基上共培４８ｈ，转移到加头孢霉素５００ｍｇ／Ｌ和５０～１００ｍｇ／Ｌ卡那霉素的上述培养基中诱导和筛选抗性愈伤组织，７０～８０天计算愈伤组织的诱导频率，并有组织化学定位法检测ＧＵＳ基因的表达，统计转化频率，结果表明：平均出愈率为４０     

棉花线粒体基因组细菌人工染色体文库的构建

以P30A细胞质雄性不育系黄化苗为材料,采用蔗糖密度差速离心和不连续蔗糖密度梯度超速离心提取棉花线粒体,低熔点琼脂糖包埋和原位消化裂解的方法制备高分子量的线粒体DNA(mtDNA),经BamHⅠ,HindⅢ酶切和PCR扩增进行纯度鉴定,并对其进行部分酶切,酶切片段与载体连接,电击转入大肠杆菌DH10B中,成功的构建了棉花线粒体基因组BAC文库。该文库共挑取3 840个单克隆,平均插入片段大小为15.5 kb,覆盖率超过70倍,研究结果表明该基因文库具有较高的质量。     

基于GR79 EPSPS筛选标记的抗虫抗除草剂表达载体构建及抗性鉴定

虫害和草害是农业生产中两大主要危害。目前,尽管转基因抗虫和抗除草剂作物相继报道和应用,然而我国抗虫抗除草剂复合性状作物培育仍然明显滞后,而且多依靠传统杂交选育的手段,费事费力、周期长。根据苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis, Bt）Cry1Ac蛋白结合结构域和毒性结构域特征,人工合成杀虫基因cry1Ac-2.5。同时,利用抗除草剂基因GR79 EPSPS替换卡那霉素筛选标记,构建基于草甘膦除草剂筛选标记的复合抗虫抗除草剂植物表达载体,并转化烟草。qRT-PCR结果表明转基因烟草cry1Ac-2.5和GR79 EPSPS基因转录水平均成功表达,经Bt和GR79试纸条检测表明上述基因在蛋白水平正确翻译。抗性实验表明,转基因烟草愈伤经草甘膦筛选,阳性率达到80%,且转基因烟草耐受100 mg/L草甘膦处理。抗虫实验表明,饲喂cry1Ac-2.5转基因烟草4 d后,棉铃虫幼虫死亡率为90%左右,表明人工基因cry1Ac-2.5具有显著的的抗虫效果。以上结果表明,构建的抗虫抗除草剂植物表达载体（Cry1Ac-2.5+GR79 EPSPS）将抗虫基因和抗除草剂基因有效合并,对于快速培育抗虫抗除草剂作物具有指导意义。     

抗虫棉花新品种——鲁棉研16号

鲁棉研16号是山东棉花研究中心与中国农科院生物技术研究所合作选育的转Bt基因抗虫棉新品种.以中棉所12号为母本,泗棉3号转Bt基因种质材料为父本杂交,经连续选择和南繁加代育成.1998～1999年参加山东省抗虫棉区域试验,2000年参加生产试验,2001年获农业部"棉花丰产基金”项目资助,2001年4月通过山东省农作物品种审定委员会审定.