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副猪嗜血杆菌(H.parasuis)、猪圆环病毒2型(PCV2)及猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV)是引起猪呼吸系统疫病的3种重要病原,根据GenBank中这3种病原的基因组序列,选择基因序列的高保守区,分别设计合成了3对特异性引物进行3种病原的多重PCR,并对反应条件进行优化。利用建立的多重PCR方法,对河北省2012-2013年发生呼吸系统疾病的412份猪病料进行检测,并随机选择其中的57份,同时进行单一PCR检测,以确定2种方法检测结果的符合程度。结果表明,3对引物能特异扩增出大小分别为469,829,219bp的目的条带。灵敏度检测试验表明,H.parasuis,PCV2和PRRSV的最低检测量分别为52.7,335.0,137.0pg。412份临床样品检测结果显示,H.parasuis在2012年的阳性率为44.2%,2013年为45.1%,提示这2年引起猪呼吸道疫病的主要病原是H.parasuis。 相似文献
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目的了解中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)联合CA125对子宫内膜异位症(EM)的诊断价值。方法回顾性地分析了138例EM和87例非EM患者的病历,以受试者工作特征(ROC)曲线法评价初诊时的血清CA125水平和NLR对EM的诊断价值。采用以logistic为基础的数学方程将二者进行合并,分析二者联合对EM的诊断价值。结果 EM患者血清CA125水平以及NLR均较非EM患者明显增高(P<0.01)。CA125+NLR诊断EM的曲线下面积为0.82,较CA125(0.80)和NLR(0.70)增高(P<0.05)。CA125>36 k U/L与NLR>1.79均与EM独立相关(P<0.01)。结论 CA125与NLR均对EM的诊断有益;二者联合使用,更有助于提高EM的诊断准确性。 相似文献
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采用副干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌及酿酒酵母对无抗全价猪饲料进行复合微生物固体发酵,对不同发酵时间含菌数、pH值、营养成分、蛋白酶、有害菌等进行了测定。试验结果表明:随着发酵时间延长,发酵产物pH值逐渐降低,在发酵5~10 d发酵饲料含菌数达到最高,此后副干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母含菌数均逐渐减少,而发酵饲料中粗蛋白和小肽有增加的趋势,粗纤维含量略有降低。发酵过程中未检测到淀粉酶和植酸酶,蛋白酶和纤维素酶有检出,同时饲料中有害微生物大肠杆菌随着发酵时间延长而减少。因此,可以用副干酪乳杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌对无抗全价猪料进行三菌复合固体发酵,发酵效果以5~10 d最优。 相似文献
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为构建猪圆环病毒2型(PCV2)感染性克隆,采用PCR方法从已鉴定为PCV2阳性的病料中扩增PCV2全长基因组片段后将其定向克隆至PVAX1载体中,构建了PCV2感染性克隆质粒p VAX1-PCV2;将重组质粒转染细胞进行病毒拯救,通过免疫过氧化物酶和RT-PCR进行拯救病毒检测,并初步测定了拯救病毒在体外细胞培养的增殖能力和遗传稳定性。结果表明,构建的PCV2感染性克隆质粒,成功拯救出PCV2,拯救病毒盲传8代后毒价可达104.78TCID50/m L,体外增殖能力较为稳定。本试验为深入研究PCV2的基因功能及致病机制等奠定基础。 相似文献
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本试验通过对贵州省某规模化猪场疑似猪伪狂犬病发病猪进行病理剖检病变观察及PCR检测,并对其主要毒力基因(gE、TK基因)进行克隆测序及遗传进化分析。结果表明,该发病猪内脏组织器官多处发生病变,PCR检测为PRV野毒阳性,将其命名为PRV GZDZ2016株;序列分析结果显示该,毒株gE基因与参考毒株相比存在多个位点的插入与替换,并与近年来报道的变异毒株核苷酸及氨基酸序列相似性最高,分别为97. 7%~99. 9%和98. 8%~99. 7%; TK基因序列与标准毒株相比,存在两个位点的替换,与国内近几年分离的毒株的核苷酸同源性和氨基酸相似性最高,分别为99. 5%~99. 8%和98. 8%~99. 4%。遗传进化树显示,PRV GZDZ2016株gE基因和TK基因均与国内近几年的分离株亲缘关系较近,与国外分离株亲缘关系较远。 相似文献
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通过对PRRSV贵州分离株(Guizhou-1)RNA的提取和RT-PCR方法扩增得到ORF5基因,成功构建原核表达载体pET-32a—ORF5,转化至宿主菌BL21(DE3)中,诱导蛋白表达,并对诱导表达蛋白的SDS-PAGE电泳和Western-blotting分析,得到了约42.9ku左右的表达蛋白,与预期大小相符,表明猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因在大肠杆菌中能表达,并具有一定的生物学活性。动物免疫试验表明纯化蛋白和包涵体均可刺激小鼠产生抗体,纯化蛋白的效果优于包涵体。 相似文献