胶体金标记免疫层析技术的最新应用进展

胶体金标记免疫层析技术作为一种新型的免疫学快速诊断和检测技术,具有微量、特异、简便等特点,非常适合基层使用。笔者综述了免疫层析快速诊断试剂的历史、基本原理、制备方法及目前在医学检验和动物疫病诊断上的应用情况。     

C型口蹄疫病毒型特异性抗原的表达与鉴定

[目的]为C型FMDV型特异性多克隆抗体、单克隆抗体的制备及FMDV定型提供理论依据。[方法]以含有C型口蹄疫病毒（FMDV）结构蛋白基因VP1的重组质粒pGEM—CP1为模板,设计特异性表达引物,扩增VP1及其C端编码区。对C型口蹄疫病毒VP1及其C端进行原核表达,并测定反应原性。利用纯化的C型VP1及其C端融合蛋白建立间接ELISA,分别对O、A、C、Asia14型豚鼠阳性血清进行检测,确定C型VP1及其C端与其他3型FMDV抗体的型间交叉反应性。[结果]构建了pPRO-CVP1、pPRBO-CVP1c重组原核表达质粒,实现了C型口蹄疫病毒VP1及其C端的高效表达,目的蛋白的分子量大小分别为33和20kD。Westernblot显示。VPl及其C端融合蛋白均可与对应血清型的豚鼠阳性血清反应。C型VP1及其C端与其他血清型的FMDv阳性血清均未发生交叉反应。且以VP1c端的型特异性最好。[结论]获得了C型FMDV特异性抗原。     

A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达·纯化及活性检测李

[目的]表达口蹄疫病毒结构蛋白VP1,并对其进行纯化和相关活性的检测。[方法]以A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1重组质粒pGEM-VP1为模板,用特异性表达引物扩增其编码区,经酶切后与pGEX-4T-1、pPROExHTb等原核表达载体相连,转化大肠杆菌BL21（DE3）pLysS表达菌株,经IPTG诱导表达,以实现VP1蛋白的表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并对2种载体重组菌进行超声裂解,取上清和沉淀电泳,用金属螯合亲合层析法对His-VP1进行纯化。[结果]SDS-PAGE电泳分析显示pPRO-VP1诱导后目的条带为33ku,与预期结果相符;目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带;His-VP1可与A型口蹄疫病毒豚鼠灭活阳性血清发生特异性的反应。[结论]表达及纯化了具有高特异性的A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1,为深入研究结构蛋白VP1在口蹄疫病毒致病机制中的作用奠定了基础。     

用原位杂交技术对牛组织中FMDV RNA检测和定位

采用原位杂交技术对6头试验牛易感染组织中的FMDVRNA进行了检测和定位。结果显示，接毒后7～28d4头牛舌上皮组织、7～21d的喉咽部有强阳性染色；接毒后35d的牛及正常对照牛舌上皮没有阳性染色；接毒牛及对照牛的扁桃体、淋巴结和蹄叉等其他组织中均没有阳性染色，表明牛舌上皮和喉咽部上皮组织中感染了FMDV，本研究为进一步阐明FMDV在宿主体内的持续感染机理提供极有价值的线索。     

O型口蹄疫单克隆抗体6H4株金标试纸条的制备

以制备的O型口蹄疫单克隆抗体为基础,结合免疫金技术,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,对6H4单克隆抗体进行标记,制备了该单克隆抗体的金标试纸条.研究结果表明,6H4单克隆抗体在pH 8.64下的稳定点为12 mg/L,可制备成金标记抗体及其反应膜.     

免疫佐剂研究进展

佐剂是能够增强免疫应答或改变免疫应答类型的物质,本身可以具有免疫原性,也可以没有免疫原性.佐剂种类很多,如氢氧化铝佐剂、细菌佐剂、脂多糖、细胞因子等.综述了氢氧化铝佐剂、多糖佐剂、细胞因子佐剂以及一些新型佐剂的研究进展,旨在为今后开展疫苗和佐剂的相关研究提供参考.     

猪口蹄疫疫苗的研究现状及使用效果研究

口蹄疫（foot-and-mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒（foot-and-mouth diseasevirus,FMDV）引起猪牛羊等重要经济畜种发病的重大动物疫病,严重威胁畜牧业的健康可持续发展,涉及食品安全、物价稳定等一系列安全和社会问题[1-2]。FMD灭活疫苗为在全球范围内有效控制口蹄疫疫...     

用原位杂交对BHK-21细胞中的FMDV定位和检测

为了明确FMDV在细胞内的增殖部位，建立检测细胞内低拷贝FMDV的方法，对试验接种FMDVO／Akesu／58（10^7TCID50）毒株的BHK-21细胞中2～10h不同时间段的病毒RNA进行检测和定位。选用FMDVRNA非结构蛋白区3D保守序列作为寡核苷酸探针，采用尾段标记法以地高辛-11-d UTP标记，用原位杂交敏感加强型试剂盒检测杂交体。结果显示，从感染FMDV后2～10h内的BHK-21细胞中检测出阳性染色的病毒粒子，这些病毒粒子大多集中在核周围，随感染时间延长阳性染色信号增强。这说明用寡核苷酸探针与敏感加强型试剂盒结合对检测细胞内低拷贝的病毒粒子是可行的，同时也从分子水平上证明FMDV主要在细胞质中进行复制和繁殖。     

细胞凋亡信号传导通路的研究进展

细胞凋亡是机体维持自身稳定的一种基本生理机制,是有许多基因产物及细胞因子参与的一种有序的细胞自我消亡形式。细胞凋亡发生过程的启动和进行受到精确调控,具有独特而复杂的信号系统。各种凋亡信号通过信号传导通路传至细胞内,激活靶分子而产生细胞效应,引发细胞凋亡。一般认为,细胞凋亡存在3条主要通路:线粒体通路、内质网通路和死亡受体通路,各通路间互相联系,共同调节细胞凋亡。