月季“月月红”(Rosa chinensis‘Slater’s crimson China’)愈伤组织诱导及植株再生初报

以"月月红"(R.chinensis‘Slater’s crimson China’)的嫩叶为外植体,采用MS为基本培养基,在添加不同浓度的2,4-D、TDZ、GA3和NAA上,结合不同时间的暗培养,研究"月月红"胚性愈伤组织的诱导及植株再生。结果表明,2,4-D 5 mg/L暗培养20 d诱导出的愈伤组织,在MS+TDZ 1.0 mg/L+GA30.1 mg/L+NAA0.01 mg/L培养基上暗培养12 d,可以获得较好的胚性愈伤组织;胚性愈伤组织转入光照培养15 d后可形成肉眼可辨的子叶期体胚及具有不定芽和胚根的结构,20 d后可长成绿色的小植株。     

‘月月粉’连续开花习性遗传规律分析

连续开花(Perpetual blooming,PB)是观赏植物的重要性状之一,是中国月季对现代月季的重大贡献。然而月季连续开花性状的遗传基础至今尚未清晰。为研究中国古老月季品种‘月月粉'(Rosa chinensis‘Old Blush',用OB表示)连续开花习性的遗传规律,以其为母本,以一季开花(Single seasonal blooming,SB)园艺品种‘无刺光叶蔷薇'(Rosa wichuriana'Basye's Thornless',用W表示)为父本,构建了OB、W、F_1、F_2、BC_1OB和BC_1W等6个世代827个株系的二倍体遗传分离群体。遗传分离群体表型测定将开花表型分为连续开花和非连续开花(Non-perpetual blooming)2种类型。296株F_1和150株BC_1W群体均表现为非连续开花,表明OB连续开花性状受隐性基因位点调控。300株BC_1OB群体中83株为连续开花,223株为非连续开花,χ~2适合性测验符合1:3的遗传分离规律(P0.05),表现为双隐性基因遗传,表明‘月月粉'连续开花可能受双隐性基因位点共同调控。     

中国古老月季品种的核型研究

采用常规压片法对‘月月红’等11个中国古老月季品种进行了以染色体形态和倍性为主的核型分析研究。结果表明: (1) 不同品种的染色体数差异较大, ‘绿萼’、‘玉玲珑’、‘月月红’和‘月月粉’是二倍体(2n = 2x = 14) ; ‘春水绿波’和‘湖中月’是三倍体( 2n = 3x = 21) , ‘大富贵’、‘金粉莲’、‘菊红潮’、‘映日荷花’和‘思春’是四倍体(2n = 4x = 28) 。(2) 11个品种染色体的绝对长度均在1～3μm之间; 品种间核不对称系数变化范围为56.560% ～60.376%; 除‘思春’和‘映日荷花’外,其它9个品种中均未观察到随体存在。(3) ‘春水绿波’和‘湖中月’的核型公式为2n = 3x = 21 = 3 sm +18m, 核型类型均是1A; ‘金粉莲’和‘菊红潮’的核型公式为2n = 4x = 28 = 4 sm + 24m, ‘大富贵’的核型公式为2n = 4x = 28 = 2 sm + 26m, 核型类型都是1A; ‘绿萼’的核型公式是2n = 2x = 14 = 2 sm + 12m, 核型类型为1B; ‘思春’和‘映日荷花’的核型公式是2n = 4x = 28 = 4 sm + 22m + 2m ( SAT) , 核型类型为1A; ‘玉玲珑’的核型公式是2n = 2x = 14 = 2 sm + 12m, 核型类型为1A; ‘月月粉’和‘月月红’的核型公式是2n = 2x = 4 sm + 10m, 核型类型为2A。     

云南蔷薇属部分种质资源的SSR遗传多样性研究

利用简单重复序列SSR（Simple Sequence Repeat）标记技术对42份蔷薇属（Rosa L.）种质资源（包括13份野生种、变种、变型及29份栽培品种）的遗传多样性进行了研究。用筛选出的18对SSR引物对42份材料DNA进行PCR扩增,在18个位点共检测到148个等位基因,每一位点的等位基因变幅为6~14个,平均8.2个。材料间遗传相似系数变化范围为0.282~0.892,表明在分子水平上云南省蔷薇属植物具有丰富的遗传多样性。本研究发现,在相似系数为0.456时,基于SSR标记的聚类分析可以将 13个蔷薇野生种明显分为5个组,这与植物形态学分类结果大体一致。在遗传相似系数为0.43水平上,聚类分析将42份供试材料分为5大组群;同时初步探讨了野生种之间以及野生种与栽培品种之间的遗传亲缘关系。     

野蔷薇（Rosa multiflora）抗白粉病基因RmMlo的克隆与表达分析

以野蔷薇（Rosa multiflora）为试材,采用RT-PCR和RACE方法从叶片中获得了一个Mlo同源基因的cDNA全长,命名为RmMlo,GenBank登录号为JF310747。序列分析结果表明,RmMlo基因cDNA全长为1993bp,包含49bp的5′非编码区、243bp的3′非编码区和一个长度为1700b...     

月季SSR反应体系的优化

以月季品种‘月月粉’为试材,利用CTAB法提取DNA,对影响SSR—PCR扩增体系的主要因子设计了多梯度的优化实验,建立了适用于月季的SSR反应体系：总反应体积为25μL,包括模板DNA溶液（20ng／μL）2μL,10×PCR buffer（Mg^2＋free）2．5μL,MgCl2（25mmol／L）2．0μL,dNTPs（10mM）0．5μL,正反引物各（10μmol／L）1μL,TaqDNA聚合酶（5U／μL）0．3μL．利用该优化体系对部分月季品种进行PCR扩增和电泳检测,扩增结果清晰且有较高的多态性,表明该体系适合用于分析月季的遗传多样性．     

蔷薇属植物野生资源白粉病抗性鉴定

为明确蔷薇属植物野生资源对白粉病的抗病能力,对覆盖蔷薇属9个组的50个野生种进行了白粉病抗性的离体鉴定和田间鉴定.结果表明,免疫野生种有6个,高抗野生种有13个,中抗野生种有15个,中感野生种有5个,高感野生种有11个.筛选出的免疫和高抗种质资源可选作今后月季抗白粉病育种的亲本,期望通过杂交育种等手段将抗白粉病基因引入现代月季新品种中.     

云南复伞房蔷薇天然居群表型多样性的居群生物学分析*

 应用居群生物学的原理和方法,对分布于云南的6个复伞房蔷薇（Rosa brunonii Lindl.）天然居群的15个表型性状进行多样性分析。结果表明,复伞房蔷薇表型性状在群体间和群体内均存在丰富的变异,15个性状群体间的F值为2.29～7.71,除花瓣宽不显著外,其余14个表型性状均达到极显著或显著水平;15个性状群体内的F值为1.21～11.04,除花萼长和宽不显著外,其余性状均达到极显著水平。15个性状群体平均表型分化系数为33.14%,群体内变异（31.27%）大于群体间变异（13.98%）,说明群体内变异是复伞房蔷薇的主要变异来源。复伞房蔷薇刺数量与纬度呈显著正相关,中部和顶端的小叶长与宽与纬度呈显著负相关,叶柄长与海拔呈显著负相关,其它性状与地理因子的相关性均不显著。利用群体间欧氏距离进行UPGMA聚类分析的结果表明,6个天然群体可以划分为两类。依据研究结果,复伞房蔷薇的遗传改良策略应当是：适当地减少抽样居群数,增加居群内的家系数,即应重视群体内优良单株的选择。种质资源的保护策略应当是：尽量保护一个居群的完整性。     

月季（Rosa chinensis）丁香酚合成酶基因RcEGS1的克隆及其表达分析

 根据GenBank 发表的丁香酚合成酶（EGS）基因的蛋白保守序列设计引物,利用RT-PCR结合RACE-PCR 技术,从古老月季（Rosa chinensis）品种‘月月粉’盛开期的花瓣中获得了1 个新的丁香酚合成酶基因RcEGS1,GenBank 登录号为JQ522949。该基因全长为1 171 bp,开放阅读框（ORF）951bp,编码317 个氨基酸;蛋白质理论分子量为35.64 kD,等电点为7.36。氨基酸同源性分析表明,RcEGS1与矮牵牛PhIGS1 的氨基酸同源性达到70%,与罗勒ObEGS1 的同源性为59%,与月季RhEGS1 的同源性仅为48.2%。运用实时荧光定量PCR 法分析RcEGS1 在不同组织部位和不同开放时期花瓣中的表达,发现其在叶片和茎段中没有表达,在花瓣和萼片中有表达,在盛开期的花瓣中表达量最高。     

月季抗白粉病基因RhMLO的亚细胞定位及功能分析

MLO是一类新发现的抗病基因,一些双子叶植物隐性突变的mlo基因使其获得了广谱高抗的抗病性。通过生物信息学分析结合亚细胞定位试验,对前期克隆获得的月季MLO进行亚细胞定位,结果表明,RhMLO1和RhMLO2均为主要分布于细胞质膜、液泡膜和细胞核的跨膜蛋白,与预测结果相符。构建了RhMLO1的正义表达载体,通过农杆菌介导法对月季‘白玉’植株体细胞胚进行遗传转化。利用PCR法和荧光定量PCR法对转基因植株进行分子检测,表明基因已经整合到转基因植株中。分别利用离体鉴定法和显微镜观察法对转基因植株和对照植株进行对白粉病菌(Podosphera pannosa)抗性鉴定,结果一致显示:正义载体的导入降低了转基因植株对白粉病的抗性。