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为建立检测副流感病毒5型(PIV5)的荧光定量RT-PCR方法,针对PIV5 L基因设计筛选出一对特异性引物和探针,对退火温度、引物浓度、探针浓度进行了优化,并进行了敏感性、特异性和重复性试验。结果显示:最适退火温度为54.7℃,最适引物浓度为0.5μ mol/L,最适探针浓度为0.1μ mol/L。检测灵敏度为10 copies、0.8-1TCID50,特异性结果显示与BPIV3等22种常见病毒均无交叉,重复性试验显示不同模板浓度重复检测变异系数均小于1.5%,重复性良好。 相似文献
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为了解国内PCV2灭活疫苗效力检验用PCV2抗体检测试剂盒的质量,参照农业部第683号公告有关规定,对国内5个厂家生产的5种PCV2抗体检测试剂盒进行了敏感性、特异性和符合率测定,并比较了试剂盒间的符合率。结果表明:5个PCV2抗体检测试剂盒特异性检测结果均在90%左右,但敏感性差异较大(57.7%~100%),且各试剂盒间检测结果的符合率较差(仅为63.2%)。总体来看,国产PCV2抗体检测试剂盒质量参差不齐,仅2个试剂盒适合用于PCV2抗体检测。 相似文献
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为获得副流感病毒5型SH蛋白的单克隆抗体,将构建的重组表达质粒pET43a-SH转化BL21(DE3)plys,经IPTG诱导表达、过镍柱纯化后将重组蛋白作为免疫原,免疫8周龄Balb/c雌性小鼠,并按常规方法制备杂交瘤细胞。通过间接免疫荧光方法进行筛选,获得3株杂交瘤细胞株,命名为5B9、3G8、4E11,并进行了培养特性、分泌抗体活性、分泌抗体亚类的鉴定。结果显示:3株细胞株连续传代10代均稳定分泌单克隆抗体,细胞上清液IFA效价稳定,分泌单克隆抗体亚型均为IgG2a。制备并纯化了1株(5B9)单克隆抗体,浓度为4.26 mg/mL,纯度不低于90%,IFA效价不低于1∶2000,与猪牛等常见病毒均无交叉反应。 相似文献
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测定了中国4个细胞源猪瘟活疫苗(C株)E2基因全序列,将其与GenBank上13个猪瘟病毒的E2基因序列(含C株原始毒株、7个猪瘟病毒C株以及国际上5个主要猪瘟活疫苗毒株的E2基因全序列)进行了核苷酸序列、推导的氨基酸序列进行遗传变异分析,通过生物信息学手段对预测的E2蛋白N-糖基化位点、E2蛋白磷酸化位点和理化特性以及模拟的蛋白空间结构进行了比较,并通过免疫攻毒试验对4个细胞源猪瘟疫苗(C株)的免疫效果进行了验证。结果表明,与猪瘟病毒C株原始种毒相比,尽管中国4个细胞源猪瘟活疫苗的E2基因核苷酸序列、推导的E2蛋白氨基酸序列或模拟的三维结构等发生个别核苷酸变异、个别氨基酸位点突变或缺失,但均不影响猪瘟C株的免疫原性,猪瘟疫苗C株仍然是防控猪瘟的最有效武器。 相似文献
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2006年对全国的养殖户来说是一个灾年,高热综合症造成的悲惨画面历历在目,疫病横行,尸横遍野,一些小场仅剩几头,更有甚者,圈舍中只留下石灰的痕迹;原本已经窃喜的一些大猪场场主以为可以逃脱这场浩劫,但疾病的浪潮一波更比一波高,最后,大型猪场也在劫难逃.…… 相似文献
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