配种时间对母羊妊娠期生殖激素与生长激素的影响

为研究不同月份配种奶山羊妊娠期外周血中生殖激素与生长激素的变化规律,随机选择8月、10月、12月、翌年2月妊娠的关中奶山羊各10只,分别于配种后20d、75d、130d及分娩时采集其静脉血并分离血清,采用ELISA试剂盒检测血清中雌激素(E_2)、孕酮(P_4)、促卵泡生成素(FSH)、促黄体素(LH)、催乳素(PRL)和生长激素(GH)水平变化规律。结果表明,不同季节怀孕奶山羊在整个妊娠期间,同种激素的变化趋势一致,随着妊娠时间的延长,外周血中E_2、P_4、PRL和GH含量逐渐升高,FSH和LH含量递减,分娩前E_2和P_4含量下降,LH回升,FSH仍然下降,PRL和GH继续上升。不同月份妊娠期间外周血中E_2、P_4、FSH、LH、PRL、GH的均值变化范围分别为17.45~52.90ng/L,1899.39~6305.63pmol/L,4.45~6.99IU/L,142.33~207.09pg/L,367.37~626.88ng/L,15.55~28.71μg/L,奶山羊妊娠月份的不同对其激素水平有一定影响,但影响不大。说明奶山羊在不同月份配种妊娠后对其生殖内分泌无显著影响。     

无角陶赛特母羊超排效果影响因素分析

为了加快国内引进无角陶赛特绵羊的杂交改良和扩繁,将MOET技术应用于生产,迅速增加现有种羊的群体.进行了不同厂家生产的FSH超排、青年羊和经产羊超排、母羊重复超排、母羊诱导发情后超排、黄体退化及超排母羊发情延迟对收集胚胎及可用胚胎数的影响比较.结果表明:用加拿大FSH(剂量160～200 mg/只)超排效果比较成功,可以收获12.91枚±7.80枚胚胎/卵和8.64枚±7.99枚可用胚胎;经产羊的超排效果优于处女羊(P＜0.05);连续超排和手术会降低总胚胎/卵回收数,但是对可用胚胎数无明显影响;用观察自然发情母羊超排,可以回收到较高的总胚胎/卵数(13.83枚±4.64枚)和可用胚胎数(12.00枚±5.76枚),显著高于诱导发情母羊和未知发情周期母羊超排后获得的总胚胎/卵数(7.00枚±4.9枚和5.94枚)和可用胚胎数(4.22枚±3.42枚和3.19枚±2.56枚)(P＜0.05);超排处理母羊发情推迟24 h获得的总胚胎/卵数和可用胚胎数(0.92枚±1.51枚和0.42枚±0.90枚)显著低于正常发情母羊(P＜0.01;超排后黄体正常母羊获得的胚胎/卵数和可用胚胎数分别为8.83枚±5.75枚和6.66枚±5.41枚,显著高于黄体退化母羊(5.88枚±5.09枚和3.59枚±4.30枚)(P＜0.01).结论:在胚胎移植中,通过使用加拿大FSH(Fotropin V)再结合选择经产母羊、自然发情母羊进行超排处理,冲胚时选择按时发情母羊及黄体正常母羊,可以收获到理想的总胚胎/卵数和可用胚胎数.     

山羊转t-PA突变体基因的体细胞核移植研究

比较了用转t-PA突变体基因的胎儿成纤维细胞和卵丘细胞作供体时核移胚的发育情况。结果表明：卵丘细胞作供体时,核移胚的卵裂率（82.9%）和桑葚胚率（55.9%）均高于胎儿成纤维细胞卵裂率（75.7%）和桑葚胚率（48.7%）,但差异不显著（P＞0.05）;卵丘细胞作供体时的囊胚率（19.7%）则高于胎儿成纤维细胞（11.0%）,差异显著。(P<0.05)。比较了饥饿处理与否对胎儿成纤维细胞作供体时转基因核移胚的发育情况。结果表明：供体细胞饥饿后,其核移胚的卵裂率（75.6%）与供体不饥饿的卵裂率（75.8%）差异不显著;供体细胞饥饿后,其核移胚的桑葚胚率（46.5%）和囊胚率（11.0%）高于供体不饥饿的桑葚胚率（39.3%）和囊胚率（9.0%）,但差异不显著。比较了SOFaa和CR1aa分别添加10%FBS和bFF后,转基因核移胚的发育情况。结果表明：用CR1aa液培养时,添加10%bFF,其囊胚率（9.1%）高于添加10%FBS（4.2%）（P＞0.05）;用SOF液培养时,添加10%bFF,其囊胚率（11.2%）高于添加10%FBS（5.5%）（P＞0.05）。说明用SOF液优于CR1aa液。     

渭北黄土高原东部尧山林场主要人工林土壤肥力综合评价

为给陕西渭北黄土高原建设和管理提供依据,以尧山林场油松林、侧柏林、刺槐林等3种主要人工纯林为对象,利用常规测试方法和主成分分析法对林地土壤肥力进行了测定分析和综合评价。结果表明3种林分土壤有机质含量均随土层深度增加而逐渐下降,腐殖质层pH值显著高于其他土层;刺槐林碱解N含量随土层的增加而逐渐下降,腐殖质层有效P含量显著高于其他土层;油松林有机质含量显著高于侧柏和刺槐林;刺槐林土壤pH值和碱解N含量显著高于油松和侧柏林,速效K含量显著低于油松和侧柏林;土壤有效P含量油松林>侧柏>刺槐林;3种林分土壤综合肥力差异较大,肥力综合分值油松林(1.01)>侧柏林(-0.34)>刺槐林(-0.99);油松林有机质含量高、刺槐林碱解N含量高;油松和侧柏林地土壤碱解N亏缺,刺槐林地速效K缺乏。     

不同因素对牛卵母细胞胞质内精子注射效果的影响

采用胞质内精子注射法（ICSI）构建牛显微受精胚胎,探讨卵母细胞成熟培养时间、精子状态及精子操作液中聚乙烯吡咯烷酮（PVP）浓度对牛卵母细胞胞质内显微受精（ICSI）卵体外发育的影响。结果显示：成熟培养20 h、24 h和28 h的卵母细胞用于ICSI时,ICSI卵的形态完整率分别为94.6%（175/185）、97.2%（173/178）和96.4%（189/196）（P〉0.05）;成熟培养24 h和28 h的卵母细胞,其ICSI卵的卵裂率（73.4%和70.9%）和囊胚发育率（31.8%和29.6%）显著高于成熟培养20 h的卵母细胞（61.1%和20.6%）（P〈0.05）。对成熟培养24 h的卵母细胞注射获能精子时,ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率（72.7%和31.4%）高于未获能精子组（69.4%和29.3%）和不运动精子组（71.5%和30.4%）,但无统计学差异（P〉0.05）。采用含5%,10%和15%PVP的精子操作液处理获能精子后对成熟培养24 h的卵母细胞进行ICSI操作,PVP浓度为5%和10%时,ICSI卵的卵裂率（73.2%和66.9%）和囊胚发育率（32.7%和29.7%）差异不显著（P〉0.05）,但二者均显著高于15%PVP浓度组的卵裂率和囊胚发育率（51.0%和16.3%）（P〈0.01）。结论认为,选用获能精子,并使用含5%PVP的精子操作液进行处理,对成熟培养24 h的牛卵母细胞进行ICSI操作,有利于ICSI卵的体外发育。     

波尔山羊胚胎移植试验

应用FSH对8只供体波尔山羊进行了超排处理。在放栓的第9～12天,连续4d采用递减量肌肉注射FSH。结果有6只发情,同期发情率为75%。这6只羊配种后均采胚成功,共采胚83枚,只均13.8±7.36枚,其中可用胚75枚,只均12.5±5.99枚,可用胚胎率为90.36%(75/83)。将36枚可用胚移植受体奶山羊32只,妊娠18只,妊娠率56.25%(18/32)。     

山羊卵母细胞的体外成熟研究

1.比较了在卵母细胞成熟液中添加相同浓度(10ng/ml)的表皮生长因子(EGF),胰岛素样生长因子(IGF),EGF IGF后,不同生长因子对卵母细胞体外发育率的影响。结果表明,在成熟培养液中添加EGF后,其卵母细胞的成熟率(70.9%)与对照组(67.3%)相比有所提高,但差异不显著;在成熟培养液中分别添加IGF、EGF IGF,其卵母细胞的成熟率分别为80.0%,82.4%,显著高于对照组卵母细胞的成熟率(67.3%)。2.比较了不同季节采集的卵母细胞在体外成熟的情况。结果发现,12月份到来年的1月份,采集的卵母细胞,其体外成熟率最高,为81.0%;11月份采集的卵母细胞,其体外成熟率次之,为74.1%;3—5月份和9—10月份采集的卵母细胞,其体外成熟率为66.0%、69.6%;6—7月初采集的卵母细胞,其体外成熟率最差,为54.7%。3.比较了OM液pH值对卵母细胞体外成熟的影响。当OM培养液的pH值为7.2和6.8￣7.0时,卵母细胞成熟率的为66.2%和61.0%,显著高于pH≥7.5时的成熟率(50.9%,P<0.05)。     

小鼠输卵管上皮细胞的原代培养及纯化方法研究

建立小鼠输卵管上皮细胞原代培养及纯化方法.小鼠输卵管上皮细胞原代培养采用组织块培养法和酶消化法.酶消化法于37℃分为4个处理组进行.处理1以2.5 g/L胰酶+0.4 g/L EDTA消化5、10、20 min;处理2以0.5 g/L胰酶+0.08 g/L EDTA消化35、50、75 min;处理3以0.3 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60、90、240 min;处理4以2.5 g/L胰酶+0.4 g/L EDTA和0.3 g/L Ⅰ型胶原酶(1∶2)消化60 min,150 min.原代细胞纯化采用差速贴壁和反复差速贴壁法.传代采用胰酶两步消化法进一步纯化输卵管上皮细胞.组织块法原代培养成纤维细胞生长优势明显,传代纯化细胞效果不佳.用酶消化法原代培养时,处理1效果不理想;处理2采用3个消化时间时均取得比较理想的结果;处理3消化240 min时结果较好;处理4消化150 min效果较好.原代细胞纯化,反复差速贴壁得到的上皮细胞较纯,进一步传代纯化细胞取得了理想的结果.小鼠输卵管上皮细胞原代培养采用酶消化法结合反复差速贴壁分离纯化细胞,传代采用两步消化法,可以成功地进行小鼠输卵管上皮细胞的分离纯化培养.     

腹腔镜检查山羊超排反应准确性的手术评价

用手术法评价了192例超排山羊卵巢反应的腹腔镜检查结果。结果表明用腹腔镜检查计数超排羊的黄体数时,其准确性随黄体数和未排卵大卵泡数(直径>5 mm)的增多而降低;计数大卵泡时,其准确性随大卵泡数的增多而降低,但黄体的多少对大卵泡计数准确性无影响;超排羊卵巢体积较大时黄体及大卵泡计数的准确性降低;被检羊膘情较好且检查前饥饿不足时,对黄体及大卵泡计数的准确性有不利影响。