抑制真菌病害几丁质酶产生菌的筛选、鉴定

从土壤中分离到132株细菌和链霉菌,用平板透明圈法筛选到32株产几丁质酶菌株,其中一株链霉菌经测定对稻瘟菌、水稻纹枯病菌、辣椒炭疽病菌、小麦赤霉病菌等多种病原真菌具明显抑制作用,该菌经形态学及生理生化特性鉴定,初步定为球孢链霉菌(Streptomyces globisporus),是一种新的几丁质酶产生菌。     

猪戊型肝炎ELISA诊断试剂盒的研制及应用

本试验旨在建立有效的针对猪戊型肝炎病毒(HEV)的诊断技术及试剂盒。作者建立了应用猪HEVORF3筛选出来的一段序列合成肽swHEV11检测HEV血清抗体的间接ELISA诊断方法,确定的抗原最适包被浓度为3μg·mL-1;血清最适稀释度为1∶10,作用时间为30min;酶标抗体最适稀释度为1∶12000,作用时间为60min。用HEV ORF3合成肽swHEV11研制的猪HEV ELISA诊断试剂盒,与北京万泰试剂盒检测比较,符合率为73.4%(205/279),灵敏度和特异性分别为73.3%(200/273)和83.3%(5/6)。该试剂盒批内重复的变异系数10%,批间变异系数20%。结果表明,该方法的建立和所研制的猪戊型肝炎诊断试剂盒灵敏度高,特异性强,稳定性合格,为猪戊型肝炎病毒抗体的检测和流行病学的调查提供了一种简便快速的血清学诊断方法。     

一种用于评价植物根系微生物群落多样性的土壤DNA提取方法

建立了一种有效提取根际土壤微生物基因组DNA提取方法,提取的基因组DNA能够有效进行根际土壤微生物分子生态学相关的分子操作。该方法提取了12份不同作物根系土样的基因组DNA,每克土样都能够获得10μg以上的基因组DNA,片段大小在20kb左右。A260/A230平均值为1.505,A260/A280平均值为1.780,全波长吸收曲线与纯核酸一致。PCR扩增,均能得到清晰的单一目标条带。不同稀释浓度的基因组DNA污染物都能进行限制性酶切操作。稀释100倍土样DNALambda DNA酶切效果和在ddH2O中酶切效果一致。     

ETPMG极端嗜热多肽N-末端氨基酸测序及其对苗瘟的防效

本试验用加热法从多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)LM-3菌株的发酵液中纯化得到2个极端嗜热多肽.平板拮抗实验表明,5μL纯化多肽对稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)抑菌率达89.6%.SDS-PAGE电泳显示纯化多肽分子量介于6 000～7 000 D之间.多肽复性后,其中之一对稻瘟病菌表现出强的拮抗活性,命名为ETPMG(extreme thermophilic polypeptide against M. grisea);另一个则无此活性,命名为ETPL3(extreme thermophilic polypeptide from LM-3).ETPMG经氨基酸测序,获得了其N-末端5个氨基酸序列(H2N-ANDPR).以ETPMG为主效成分配得5种微生物源生防乳剂,对水稻苗瘟进行了田间防效试验.试验结果表明,这5种乳剂的防效都优于LM-3拮抗液直接喷雾,其中处理AB4的防效最佳,达80.73%,其拮抗成分、吐温80、乳化剂OP、溶剂的质量比为50∶6.5∶1.75∶41.75.ETPMG为首次报道的兼具极端嗜热性和稻瘟病菌拮抗活性的小分子多肽.     

富集纤维素降解菌群过程中微生物群落多样性分析

纤维素降解微生物资源的挖掘，是实现纤维素高值化利用的重要途径。为构建高效的可培养的纤维素降解体系，以羧甲基纤维素钠(CMCNa)为底物，通过长时间富集山羊瘤胃内溶物，经传代培养，初步构建了1个纤维素降解富集体系。在富集过程中选取前、中、后3个时期10个传代样品，采用高通量测序技术，剖析富集物中细菌、真菌群落结构和多样性的响应差异，揭示不同时期的微生物群落结构变化规律。前期传代样品的细菌丰富度、多样性及均匀度均优于后期传代样品。前期传代样品的真菌群落丰富度较差，但真菌群落的多样性及均匀性高于后期传代样品。分析10个样品中的细菌属水平，德沃斯氏菌属(Devosia sp.),纤维单胞菌属(Cellulomonas sp.)所占比例较高。真菌属水平曲霉属(Aspergillus sp.),古根霉属(Archaeorhizomyces sp.)所占比例较高。细菌，真菌属热图分析表明不同传代样品之间优势种群存在显著差异。以羧甲基纤维素钠为底物对山羊瘤胃内容物连续传代培养可以富集得到纤维素降解复合菌系。     

一株对鳞翅目高毒力的苏云金芽孢杆菌亚种的分离与鉴定

从四川温江地区采集土壤,采用醋酸钠-抗生素分离法分离到一株苏云金芽孢杆菌,经形态、生理生化测定,该菌为苏云金芽孢杆菌莫里逊亚种(Bacillus thuringiensissubsp.morrisoni)。生物测定结果表明,该菌对菜青虫表现出较高的毒力,在饲喂浸含伴孢晶体的叶片72 h后校正死亡率达到96.3%。根据Genbank中的序列设计cry基因型鉴定引物,对此菌种进行cry基因型检测,结果表明,该菌含有对鳞翅目高毒力的cry1Ac、cry1Ab和cry1C基因,还含有对植物寄生线虫高毒力的cry5基因。