鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒三重RT PCR检测方法的建立

为建立可同时鉴别检测鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒的三重RT-PCR方法,根据基因库中鸭Ⅰ型肝炎病毒、番鸭细小病毒和鸭圆环病毒的基因序列,分别设计3对特异性引物,通过三重RT-PCR扩增条件优化、敏感性和特异性试验,建立了鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒三重RT-PCR方法。使用该方法对同一样品中的鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒模板进行扩增,结果均得到与试验设计相符的202bp(鸭Ⅰ型肝炎病毒),351bp(鸭圆环病毒)和474bp(番鸭细小病毒)的特异性扩增条带,对小鸭温病毒、鸭副粘病毒、鸭瘟病毒和禽流感病毒等病原体的检测全为阴性。敏感性试验结果表明,该方法最低能检测到1pg的鸭Ⅰ型肝炎病毒RNA、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒DNA。建立的鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒及番鸭细小病毒的三重RT-PCR方法,具有快速、敏感、特异、定量和重复性好等优点,可用于临床鸭Ⅰ型肝炎病毒、鸭圆环病毒及番鸭细小病毒感染的检测。     

H5亚型禽流感病毒RT-LAMP可视化检测技术的建立

【目的】建立一种适用于H5亚型禽流感病毒（AIV）的逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）可视化快速检测技术,为控制疫情扩散、减少经济损失争取了时间。【方法】根据GenBank中H5亚型AIV血凝素（HA）基因序列,设计一套针对HA基因6个区域的4条特异性引物,在反应之前向反应液中加入荧光试剂（Calcein／MnCl2混合液）,然后对反应条件和体系进行优化。【结果】优化的RT-LAMP技术操作简便迅速,常规水浴锅中50min可完成,能特异性地检测出H5亚型AIV,但对其他HA亚型AIV、禽呼吸道病原体无交叉扩增反应,灵敏度是常规RT-PCR的10倍;反应结束后无需打开反应管盖,即可根据反应液的颜色变化对结果进行判定。【结论】建立的H5亚型AIVRT-LAMP可视化检测技术具有简便、快速、特异等特点,可在设备有限的基层兽医站及养殖场对H5亚型AIV进行快速初步诊断。     

广西鸡毒支原体血清学调查

鸡毒支原体（ＭＧ）是引起鸡慢性呼吸道病（ＣＲＤ）的重要病原。其特征是病鸡表现气管罗音、咳嗽、流鼻涕,母鸡产蛋下降,生产性能降低。是危害养鸡业发展的重要传染病之一。为了搞清广西鸡群中鸡毒支原体的感染情况,我们采用了鸡毒支原体血清快速平板凝集方法,检查了...     

广西10个地方优质品种鸡γ-干扰素基因的克隆与序列分析

根据基因库中鸡γ-干扰素的基因序列设计了1对特异性引物，应用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术，从ConA诱导培养的广西10个地方优质品种鸡外周血淋巴细胞RNA中扩增了γ-干扰素基因，结果，均得到了大小为520 bp的特异性片段。将扩增产物纯化并克隆到pMD18-T载体上，获得重组质粒，经PCR和EcoRⅠ＋SalⅠ双酶切鉴定后测序。序列分析结果表明，广西10个地方优质品种鸡γ-干扰席基因均编码145个氨基酸的成熟蛋白，分子质量约为16．8ku，与哺乳动物和其他品种鸡的核苷酸序列同源性分别为38．8％～39．0％和99．2％～100％，氨基酸序列同源性分别为23．69／6～24．8％和97．6％～99．4％。     

雏鸡暴发绿脓杆菌病的诊治

雏鸡绿脓杆菌病是一种由条件性致病菌绿脓杆菌引起的传染病。通常细菌经免疫注射的伤口或脐带进入雏鸡体内并大量繁殖而发病,造成雏鸡大量死亡。近年来该病常有发生,造成严重的经济损失,已引起养禽业者的重视。１９９７年１１月南宁某鸡场饲养的Ｂ４蛋用雏鸡,暴发一起...     

广西牛烂脚病研究——Ⅲ、致病性试验

白色念珠菌已早为医学界确认是致病真菌。为了证实本菌是否是牛烂脚病的病原,我们反复多次进行致病力试验,现将结果叙述如下:     

禽巴氏杆菌B_(26)-T_(1200)弱毒冻干苗的研究 Ⅰ.禽巴氏杆菌B_(26)- T_(1200)弱毒菌株的选育

从广西各地患禽巴氏杆菌病急性死亡的鸡、鸭肝脏分离出５６株禽巴氏杆菌强毒株，经培养特性和生化特性试验鉴定，从中选出１５株典型禽巴氏杆菌菌株。Ｃａｒｔｅｒ荚膜抗原分型鉴定，１５株菌均为荚膜Ａ型，间接血凝滴度为１∶１６０～１∶６４０。通过毒力和免疫原性测定，从中选择毒力较强、免疫原性较好的Ｂ２５、Ｂ２６、Ｂ２７３菌株进行人工致弱，其中Ｂ２６菌株在０．１％裂解全血马丁汤中，通过物理诱变方法致弱，即在传代过程中，把培养温度由３７℃逐渐提高到４５℃，每１２ｈ传１代而成功致弱，传至１２００代时，毒力显著减弱，且仍保持其良好的免疫原性和培养特性，从而获得了禽巴氏杆菌Ｂ２６－Ｔ１２００弱毒菌株     

二温式多重RT-PCR快速检测对虾TSV和IHHNV的研究

分别针对桃拉综合征病毒（TSV）基因、传染性皮下和造血器官坏死病毒（IHHNV）基因,设计了2对特异性引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了快速检测TSV和IHHNV的二温式多重RT-PCR技术.特异性和敏感性试验结果表明,该技术只对TSVRNA和IHHNVDNA进行扩增,分别得到1条231bp的TSV特异性cDNA扩增片段和1条356bp的IHHNV特异性DNA扩增片段,对其它对虾病原核酸的扩增结果为阴性,该技术最低能同时检测到10pg的TSVRNA和IHHNVDNA,具有高度的特异性和敏感性.临床应用试验证明,该技术可以用于对虾养殖业中TSV和IHHNV的快速检测和鉴别诊断.     

雏鸡暴发肺型鸡白痢的诊断及治疗

某鸡场5天龄伊沙雏鸡群暴发以肺部充血出血,并有散发性黄白色结节为主要剖检特征,死亡率为16.6%的疫病.经实验室的病原分离,生化试验测定和血清学鉴定,确诊为鸡白痢沙门氏杆菌感染。