黑斑蛙“白内障(歪头)”病原诊断及药敏试验

为探明湖北松滋鑫满塘生态养殖公司患病黑斑蛙的致病病原,采用营养琼脂培养基分离纯化,并用16S rRNA基因序列分析方法及系统发育树分析方法对其进行细菌分离检测。同时,采用10种抗菌药物对其进行药敏试验。结果表明,从典型患病黑斑蛙中分离出1株菌株,经16S rRNA基因序列分析和系统发育树综合分析,确定该菌株为肺炎克雷伯菌。该菌对诺氟沙星、头孢曲松、氧氟沙星、环丙沙星及丁胺卡纳等5种药物敏感;对多黏菌素B和四环素等2种药物中度敏感;对万古霉素、复方新诺明及多西环素3种药物耐药。研究确定该例黑斑蛙死亡原因为感染肺炎克雷伯菌,并以药敏试验提供参考,为养殖户下一年生产和病害防治提供可靠依据。     

网箱养殖对底栖动物丰度和生物量的影响

对湖北省秭归县童庄河网箱养殖鲢、鳙鱼的区域与未进行网箱养殖的空旷区的底栖动物的种类组成、丰度、生物量及生物多样性进行了比较研究。结果表明,网箱内外共采集到12个物种,包括双壳类、寡毛类和摇蚊幼虫,其中优势种类为摇蚊幼虫。网箱内外底栖动物的物种数量差别不大,但物种组成存在差异。与网箱外相比,网箱内底栖动物密度、生物量和生物多样性明显下降。这表明网箱养殖降低了底栖动物的密度、生物量和生物多样性。     

橄榄蛏蚌不同组织乳酸脱氢酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶的电泳分析

为了解橄榄蛏蚌的生化遗传特性,采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳,研究了橄榄蛏蚌闭壳肌、斧足、鳃、肠道、外套膜中乳酸脱氢酶（LDH）和苹果酸脱氢酶（MDH）同工酶的电泳酶谱和活性。结果表明,橄榄蛏蚌5种组织乳酸脱氢酶共检测到5条酶带,5种同工酶在闭壳肌中均有表达,在肠道和鳃中只检测到2种,在外套膜中检测到1条酶带;苹果酸脱氢酶检测到4条酶带,其中闭壳肌含有4条谱带,鳃、斧足和盲肠具有3条谱带,而外套膜具有2条染色很浅的微弱带。可见2种同工酶的分布均具有组织特异性。     

鳜免疫球蛋白 D 重链基因的克隆与表达分析

用RACE-PCR和RT-PCR方法获得鳜(Siniperca chuatsi)膜结合型免疫球蛋白D(Membrane-bounded IgD,mIgD)重链基因的全长cDNA序列。鳜mIgD的cDNA全长为3358bp,其5l非编码区包含30bp,3l非编码区包含337bp;开放阅读框包含2991bp,编码996个氨基酸,基因结构为VDJ-μ1-δ1-δ2-δ3-δ4-δ5-δ6-δ7-TM。鱼类IgD恒定区氨基酸序列比对结果显示,鳜mIgD存在半胱氨酸和色氨酸保守位点,与其他鱼类IgD的相似性在37%～72%之间。用邻接法(Neighbor Joining)构建的鱼类免疫球蛋白基因的系统发育树表明,鱼类IgD形成独立的一支,鳜mIgD与牙鲆和庸鲽IgD聚为一支。荧光定量PCR结果显示,鳜mIgD的mRNA主要分布于外周血白细胞、胸腺、头肾、中肾和脾脏中。     

食用河蚌新品种—橄榄蛏蚌

近几年来消费者开始关注河蚌,因为河蚌是摄食水体中的细菌、藻类、有机碎屑等生物,不需要投喂任何饲料,养殖水体水质好,属于健康型养殖。下面介绍一种新型食用河蚌———橄榄蛏蚌。一、橄榄蛏蚌的分类地位橄榄蛏蚌(Solenaiaoleivora)隶属于瓣鳃纲、蚌目、蚌科。二、橄榄蛏蚌的外形描述橄榄蛏蚌示意图橄榄蛏蚌壳窄长形,壳薄。壳顶低,不显著,位于距前端约1/4壳长处。前缘圆,背缘直,后缘斜切,腹缘近平直,但中部略凹入。壳面无色到黑色,生长线较粗(见图1)。三、橄榄蛏蚌的生长与繁殖橄榄蛏蚌为我国特有种,主要栖息于水质清澈,有一定水流的河口…     

饲喂枯草芽孢杆菌对杂交鲟生长和肠道菌群结构的影响

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)(Gutcare?,DSM32315)按0.00％(对照组)、0.10％、0.20％和0.40％的浓度添加到饲料中,投喂杂交鲟(西伯利亚鲟Acipenser baerii♀ ×施氏鲟A.schrenckii♂)90 d,通过观察其对杂交鲟幼鱼生长性能、血液理化指标和肠道...     

中华鲟IFN-γ的免疫调控作用

为了解中华鲟IFN-γ的免疫调控作用,实验通过中华鲟转录组获得IFN-γcDNA序列,构建重组表达质粒pTRI-st-IFNγ,原核表达IFN-γ蛋白,检测其在病毒和细菌感染过程中的免疫调控作用。SDS-PAGE显示,中华鲟IFN-γ重组蛋白大小为19.17 ku,以可溶性表达为主,浓度为0.998 mg/mL;荧光定量PCR显示,IFN-γ蛋白能够诱导中华鲟肾脏细胞中下游相关抗病毒基因Mx、Viperin和CXCL家族中CXCL11-L1、CXCL11-L2表达;与EPC细胞共孵育能够有效抑制鲤春病毒血症病毒(spring viraemia of carp virus,SVCV)引起的细胞病变和增殖,并对SVCV病毒的G、P、N 3个基因表达量呈现出极显著性下调;在体外能够调控抑制嗜水气单胞菌、中间产气单胞菌和维氏气单胞菌并对其生长表现出明显的抑制作用。     

斑点叉尾鮰致病性类志贺邻单胞菌的分离鉴定及药物敏感性

为探究某斑点叉尾鮰养殖场鱼类发病死亡原因,从患病的斑点叉尾鮰(Ietalurus Punetaus)鱼体分离得到一种病原菌,通过形态学观察以及16S rRNA基因序列测定与系统发育树构建分析,确定该菌为类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides)。用Kirby-Bauer纸片扩散法检测病原菌的敏感性,进行药敏试验。类志贺邻单胞菌为革兰氏阴性菌,且对呋喃唑酮、头孢拉定、头孢曲松、头孢唑林及头孢呋辛5种药物产生高度敏感,对氧氟沙星、头孢氨苄、哌拉西林等11种药物中度敏感。通过回归感染试验进行验证,注射类志贺邻单胞菌菌株后,斑点叉尾鮰感染后出现的症状与自然发病个体的症状基本相同。从患病鱼体分离出的即为类志贺邻单胞菌,也正是该致病菌导致斑点叉尾鮰死亡,可利用头孢类高度敏感药物防治。     

达氏鲟自噬基因MAP1LC3B克隆及其组织表达分析

[目的]掌握达氏鲟微管相关蛋白1A/1B轻链3B基因(MAP1LC3B)的表达模式,为后续研究MAP1LC3B基因功能及揭示达氏鲟的抗病分子机制提供理论依据.[方法]采用RACE技术从达氏鲟组织中克隆MAP1LC3B基因,通过ProtParam、TMpred、Phyre2及Singal 4.1等在线软件进行生物信息学分析,同时借助实时荧光定量PCR检测MAP1LC3B基因在达氏鲟不同组织中的表达情况.[结果]达氏鲟MAP1LC3B基因cDNA序列全长2208 bp,包含378 bp的开放阅读框(ORF)、202 bp的5'端非编码区(5'-UTR)和1628 bp的3'端非编码区(3'-UTR),编码125个氨基酸.MAP1LC3B氨基酸序列含有GABARAP泛素结构域、Agt7结合位点、脂化位点和维管束蛋白结合位点.达氏鲟MAP1LC3B蛋白由18种氨基酸组成,其中谷氨酸(Glu)含量最高(占9.6%)、丙氨酸(Ala)含量最低(占1.6%);蛋白分子量为14743.01 Da,理论等电点(pI)为8.92,不稳定系数为65.12,总平均亲水性为-0.484,是一种不稳定的疏水性蛋白,且不存在跨膜结构,也无信号肽序列.MAP1LC3B基因在达氏鲟鳃、脑、皮肤、头肾、前肾、脾脏、中肾、心脏和肠道等组织中均有表达,以在鳃和肠道组织中的相对表达量较高,显著高于在其他组织中的相对表达量(P<0.05).[结论]达氏鲟MAP1LC3B基因具有较高的保守性,在鳃和肠道黏膜免疫组织中高表达,表明自噬参与达氏鲟黏膜免疫过程,调节机体免疫反应.     

中华鲟IFNe2的抗病毒天然免疫作用研究

为探究中华鲟干扰素e2（AsIFNe2）的免疫调控作用,本研究通过原核表达获得了重组中华鲟干扰素e2蛋白（rAsIFNe2）,并分析了它对抗病毒相关基因的影响及其抗病毒活性。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）结果显示,rAsIFNe2能显著激活中华鲟鳍细胞中干扰素刺激基因（IFN-stimulated genes,ISGs）的表达,如Mx、PKR、Viperin和ADAR4 。此外,rAsIFNe2还能通过激活IRFs和IFNes基因的表达,从而帮助宿主细胞迅速建立抗病毒状态。在鲤春病毒血症病毒（spring viremia of carp virus,SVCV）感染鲤鱼上皮细胞（EPC）模型中,rAsIFNe2能够诱导EPC细胞中Mx、PKR和Viperin的表达,并降低EPC细胞中SVCV病毒G、N和P基因的表达,减少病变效应的产生。上述结果表明AsIFNe2在宿主抗病毒天然免疫反应中发挥作用,为深入了解中华鲟的干扰素免疫系统以及治疗病毒性疾病提供了理论依据。