黑曲霉XY-7固态发酵生产木聚糖酶主要营养因子的研究

运用Plackett-Burman试验设计筛选对黑曲霉XY-7生产木聚糖酶有显著影响的因素.在研究的20个因素中,氯化钙、木糖、蔗糖、棉子糖和硫酸亚铁5种因素明显抑制黑曲霉XY-7的产酶水平,为产酶负影响因子;硝酸钠、酵母粉、尿素、碳酸钠、硫酸镁、蛋白胨和硫酸铵7种因素强烈诱导A.niger XY-7的产酶水平,为产酶正影响因子.氮源中尤以硝酸钠诱导效果最显著,其次是酵母粉和尿素.     

棉粕发酵样品总DNA的提取方法

棉粕是我国重要的饲用蛋白质原料,采用微生物发酵原棉粕脱毒是当前重要的高效技术手段。为了使用分子生态学方法监测微生物发酵棉粕的过程,优化发酵工艺,试验先以脱色缓冲液去除棉粕发酵样品中的游离棉酚及色素类杂质,继之以溶菌酶—SDS—蛋白酶K温和裂解,提取获得总DNA产量达1.8～6.4 μg/g棉粕样品(湿),DNA的提取效率达89%以上,片段大小均在23 kb左右,不经纯化即可直接进行PCR扩增和限制性酶切。以该DNA为模板扩增16S rRNA V3区片段,可用DGGE分析棉粕发酵过程中细菌群落结构的变化。该方法是一种适用于棉粕发酵样品总DNA提取的简便、可靠方法。     

黑曲霉变种RM48 α 半乳糖苷酶的分离纯化及其酶学性质研究

    经硫酸铵沉淀、疏水柱层析和分子筛层析,从黑曲霉变种RM48(Aspergillus niger v.Tiegh RM48)固体发酵后的浸提液中分离纯化了α-半乳糖苷酶.SDS-PAGE分析表明,此酶蛋白的分子量约为108 kDa.酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度是60℃,耐热温度为40℃:最适反应pH为4.5,在pH 3.0～6.0之间保持90%以上的酶活性;在实验的金属离子范围内,所有金属离子对黑曲霉变种RM48α-半乳糖苷酶均有抑制作用,其中Cu2+和Fe2+抑制作用最为显著,Li2+、Zn2+、Mn2+、K+、Na+、Ca2+,Mg2+和Co2+对酶活性有轻微的抑制作用.在pH 4.0和60℃反应条件下此酶的Km为7.37mm01·L-1,Vmax为5618 IU·mg-1·min-1.成熟酶蛋白N端序列为DEKAYSPCYY,与已报道的α-半乳糖苷酶蛋白无同源性.     

黑曲霉MA-56 β-甘露聚糖酶的生产条件研究

本文通过Plackect-Burman设计及单因素试验,研究了影响黑曲霉菌株MA-56生产β-甘露聚糖酶的主要因子,并优化了影响β-甘露聚糖酶固体生产的因素.结果表明,硫酸亚铁、牛肉膏、磷酸二氢钾和玉米浆粉4个因素对β-甘露聚糖酶生产影响显著,可信度大于90%.但均为产酶负影响因子;尿素、氯化钙和硫酸镁为产酶的正影响因子,但影响不显著.单因子试验表明,黑曲霉菌株MA-56产β-甘露聚糖酶的最适培养基条件为:麸皮8 g,豆粕2 g,魔芋粉0.1 g(以10 g干基为标准).当固形物与加水比10:9,接种孢子悬浮液2.5mL(以一支菌种斜面加30 mL无菌水为标准),300 mL三角瓶中装量7 g培养基,发酵56 h时,产酶量达到2.01×105U/g.